Основы микробиологии

Основы микробиологии

1. Предмет и задачи микробиологии, этапы развития, значение микробиологии для врача

Микробиология от греч micros-маленький и bios-организм наука которая изучает микроорганизмы маленьких размеров менее 0,1 мм, систематизирует, выясняет свойства, а также вопросы наследственности, изменчивости. Микроорганизмы самая древняя форма организации жизни на земле около 3-4 млрд. лет назад. В то же время наиболее значимая и разнообразная часть живого мира. Количество их на планете 10³⁰. Они везде есть в космосе, на всех объектах внешней среды, растениях, заселяют организм животных насекомых, человека.

Значение микробов в природе:

1.      Участие микробов в круговороте веществ (азота, углерода, фосфора, серы)

2.      Влияние микроорганизмов на почву (структуру, плодородие)

.        Широко используются для обеспечение жизнедеятельности человека (получение хлеба, вина, пива, молочнокислых продуктов)

.        Получение белкового корма

.        Получение медицинских препаратов

Биотехнология - использование биологических объектов для получения полезных для человека веществ (кислоты, спирты, кормовые белки, антибиотики, гормоны, заменители крови, вакцины и т.д.) Главные биологические объекты БТ: бактерии, вирусы, клетки человека, растений.

Мир микробов

клеточные		Внеклеточные
прокариоты - бактерии - арихибактерии (самая первая форма бактерий, для человека не имеют значение) - синезеленые водоросли	эукариоты - простейшие - грибы	вирусы	прионы	Вироиды

Отличие прокариот от эукариот.

	прокариоты	Эукариоты
Размер	1-10 мкм	10-100 мкм
Возможность анаэробного дыхания	возможно	Невозможно
Мембранные структуры	Отсутствуют	Присутствуют
Генетический материал	Молекула ДНК в дисперсном состоянии, не имеет ядерной мембраны	Имеют истинное ядро т.к. генетический материал ограничен ядерной мембраной.
Форма генетического материала	Кольцевая	Хромосома
Белки гистоны	Отсутствуют	Присутствуют
Тип размножения	Простое бинарное деление	Митоз, мейоз
Синтез белка	На рибосомах (70S)	Рибосомы (80S)
ЭПС	Нет	Есть
Особенности клеточной стенки	Имеет особые белки пептидогликаны Нет стеролов	Есть хитин, целлюлоза и т.д. Есть стеролы

Вирусы это неклеточная форма, генетический материал представлен РНК или ДНК. Не имеют собственного метаболизма. Абсолютные внутриклеточные паразиты на генетическом уровне. Могут жить только внутри живой клетки изменяя ее геном. Присуща наследственность, изменчивость.

Прионы или белки PrP^Sc-возбудители конформационых болезней. Не имеют наследственного материала, являются инфекционными агентами (неживые). Pr^cell отличаются конформацией. Находятся в клетке, выполняют роль передачи импульсов, изменив конфигурацию становятся вредными и вызывают губчатые энцефалопатии. Прионы передаются с пищей, препаратами полученными от животных.

Вироиды нуклеиновые кислоты без белка. Они мигрируют, перемещаются вызывают болезни у растений и пока неизвестно что бы они вызывали болезни у человека.

История развития микробиологии.

Эмпирический период. А. Левенгук (1632-1723) Рассматривал в стекла и увидел организмы, которые назвал animalcuta viva т. о. Левенгук является основоположником микробиологию. Он создал оптический прибор, который давал увеличение 160, 300 раз. В этот период были открыты возбудители многих болезней (чумы, трихомонады, возбудитель сибирской язвы). Дженнер (1740-1823) предложил метод натуральной вакцинации (vacca - корова) для борьбы с натуральной оспой (перенос зараженного материала коровы к человеку).

Пастеровский период. Пастер (1822 - 1895). Первое открытие то что брожение не является только химическим процессом, оно вызывается различными группами микроорганизмов (молочнокислое - молочнокислыми бактериями, спиртовое - дрожжевыми клетками, уксуснокислое). Второе это открытие анаэробиоза - жизнь в отсутствии кислорода. Одновременно открыл микробы анаэробы. Провел опыты по самозарождению и доказал, что самозарождение не существует, а порча продукта связана с попаданием в этот продукт из воздуха микроорганизмов. Пастер доказал, что виновником гнойных послеоперационных осложнений являются патогенные стрептококки. В основе этого Листер предложил обработку ран карболовой кислотой это положило начало эры асептики и антисептики. Пастер установил природу гниения, то что в нем учувствуют Clostridium. Так же предложил превращение патогенного микроорганизма в непатогенный т.е. способ получение вакцин (получил против куриной язвы, бешенства). Вакцину против бешенства он изобрел взяв зараженный мозг собаки и заразил этой тканью кроликов введя в субдуральное пространства. Кролики заболели бешенством и погибли. И пересеял их мозговую ткань другим кроликам и т.д. Пастер затем заметил, что новая партия кроликов заболевает быстрее чем предыдущие. Таким образом он получил фиксированный вирус бешенства, который был высоко патогенен у кроликов. Пастер ввел этот фиксированный вирус собаке, человеку (другому биологическому виду) и т.д. И другим видом (подкожно) и увидел, что собаки не заболели бешенством, а так же были защищены от дикого вируса. Первыми пациента укушенными волком были смоленские крестьяне (18 человек) 15 из них выжили.

Роберт Кох открыл возбудителя туберкулеза, холеры, получил туберкулин. Предложил методы выделение чистой культуры, окраски микроорганизмов Сформулировал триаду признаков триада Генле-Коха для установление этиологической рполь для любого микроорганизма. Включает три признака:

Ø  возбудитель должен быть выделен в чистой культуре,

Ø  возбудитель должен быть выделен только при этом заболевании и ни при каком другом, выделятся на чистой культуре

Ø  чистая культура должна вызывать эксперементальную инфекцию

В этот период открыты (гонококки, возбудитель брюшного тифа, клепсиелы, эшерихии, палочка дизентерии).

Иммунологический период. Мечников открыл фагоцитоз чвляется основоположником клеточной теории иммунитета. Эрлих открыл антитела, гуморальная теория иммунитета. Разработал методы химиотерапии. Ивановский открытие вируса (табачная мозаика). Разработаны антибиотики.

Молекулярно-генетический период. Начало вторая половина 20 века до сих пор. Стало возможным изучение генома микроорганизмов открыты прионы, открыты новые вирусы (ВИЧ, SARS) открыты новые антигены - опухолевые, гистосовместимости системы HLA (человеческие лейкоцитарные антигены), расшифровано строение антител или иммуноглобулина, получены клеточные структуры ткани, получены рекомбинантные бактерии, вирусы содержащие генетические материал 2 вирусов. Созданы гибридомы - клетки, которые получены слиянием 2 типов клеток, и гибридомы с помощью которых получают моноклональные антитела. Открыты имуномодуляторы - вещества влияющие на имунокомпетентные клетки. Разработаны новые способы диагностики инфекционных заболеваний и других заболеваний методами ИФА, РИА, ПЦР. Развитие биотехнологий, т.е. использование микробных клеток для производства многих препаратов, гормонов, цитокинов. С открытием новых инфекций отмечается реставрация старых патогенов таких как возбудитель сифилиса, туберкулеза, дизентерия, гонорея.

Разделы медицинкой микробиологии:

Ø  паразитология

Ø  микология

Ø  иммунология

В завистимости от целей и задач:

Ø  медицинская микробиология

Ø  промышленная

Ø  сельскохозяйственная

Ø  ветеринарная

Ø  пицевая

Медицинская в зависимости от цели и задач:

Ø  клиническая - изучает условнопатагенные микроорганизмы вызывающие неспецифические инфекционные заболевания с локализацией в разных органах и тканях, с которыми сталкиваются в врачи любой профессии (гнойно-воспалительные процессы) и патогенные, которые вызывают конкретные инфекционные заболевания (чума, холера, дизентерия) .

Ø  санитарная микробиология - изучает распространение в окружающей среде, наличие в объектах таких УПМ и ПМ, влияние их на здоровье населения

Ø  фармацевтическая - микрофлора лекарственного сырья, растений, вопросами микробиологической чистоты и стерильности препаратов, использованием микроорганизмов в производстве многих лекарственных препаратов.

2. Систематика, номенклатура микроорганизма, принципы классификации микроорганизмов

Задачи систематики показать степень родства между организмами и эволюционную связь. Принципы классификации изучает - таксономия (от греч. taxis-расположение, homos - закон) Основные таксономические единицы в систематики микроорганизмов следующие:

Ø  Царство в основе тип клеточной организации (прокариоты, эукариоты, вирусы)

Ø  Отдел - бактерии

Ø  Класс

Ø  Порядок

Ø  Семейство

Ø  Род

Ø  Вид

Основная таксономическая единица в микробиологии вид, род, семейство.

Вид - бактерии это совокупность микроорганизмов одного генотипа, которые в одинаковых условиях имеют одинаковые фенотипические признаки. Например: Salmonella typhi (род, вид). В пределах одного вида отдельные признаки. Отдельные свойства могут варьировать, поэтому внутри вида могут вида могут определятся под виды (морфологические варианты, биоварианты, хемоварианты, фаговары, серовары(отличаются по антигенным свойствам)).

Установление принадлежности к роду и виду называется идентификацией бактерий. Для идентификации необходимо изучить все свойства микроорганизмов, обнаружить эти свойства в мире микроба. Идентификация микроорганизма происходит по набору следующих свойств: тинкториальный, кульруральных, биохимических, факторов патогенности, антигенных свойств и отношение к фагам. Для облегчения идентификации предложены специальные идентификационные ключи для определенных групп микроорганизмов это наборы признаков для микроорганизма - семейства, рода и вида. Идентификации подвергаются исключительно чистые культуры организма.

ЧКМ - микробы одного вида выращенные в лабораторных условиях на искусственных питательных средах.

Штамм - чистая культура выделенная из конкретного источника, либо чистая культура выделенная из одного источника, но в разное время.

Клон - чистая культура микробов полученная из одной бактериальной клетки

Популяция микробов - совокупность особей одного вида длительно существующих на определенной территории и изолированных от других особой того же вида, популяция единица эволюции. Например популяция сальмонеллы тифи северных регионов отличается от обитающих в южных регионов.

Генетическая таксономия

Идентификация бактерий на основании генетического родства. В основе определение генетических структур клетки - ДНК, внехромосомных структур - плазмиды, транспазоны. Доказано что состав основавний ДНК витоспецифичны т.е. определяется процентное содержание ГЦ от общего содержание всех оснований это может иметь значении е для определение вида. Определяется сходство или комплементарность кислот между различными организмами методом гибридизации. Устанавливают гомологию последовательности нуклеиновых кислот. Этим методом определяют родство между микроорганизмами. % сходства одного порядка равен 80%, для семейства 90%, рода 95% для вида почти 100%.

Первый труд в котором были описаны и классифицированы бактерий был составлен Берджи в 1923 г. В нем бактерии разделены на 25 группы. Патогенные всего 20 групп. В определителе бактерии разделены на Gracilicutes - тонкостенные, Firmicutes - толстостенные, Teniricutes - мягкотелые.

Ультраструктура бактериальной клетки

Бактериальная клетка имеет постоянные структуры - клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, рибосомы, нуклеоид. Непостоянные - жгутики, ворсинки, капсула, включения, споры.

Постоянные структуры.

Клеточная стенка: Функции - защитная, формообразующая, участвует в делении, транспортная, рецепторная, определяет антигенные свойства бактерии, определяет тинкториальные свойства бактерии (диффузии краски). Нарушение синтеза клеточной стенки приводит либо к гибели бактерии, либо к образованию сферобластов, протобластов (теряют способноть к размножению) или L-формы (сохранили функцию размножения). Утрата связана с антибиотиками, влияние лизоцина. Утрата будет сопровождаться () процесса и антибиотиками не лечится.

Главный элемент к.С Муреин - полимер, связываются фрагменты связываются уникальными аминокислотами (есть только у прокариот), муреин является мишенью для антибиотиков именно избирательность антибиотиков связана с муреином. КлС Г(-) тонкая, в ней выделяют ригидный слой образованный пептидогликаном (20%) и пластичный слой его толщина значительна и в нем много липополисахарида (80%), который имеет базисную часть это молекула полисахарида, липид-А (отвечает за токсичность, пирогенность), О-специфические боковые фрагменты (состоят из полисахаридов, определяют антигенные свойства). Г(+) стенка толще состоит из многослойного пептидогликана 90%, тейхоевые кислоты. Тк пронизывают клеточную стенку и связываются с ПГ за счет них определяются антигенные свойства, липополисахаридов почти нет. Белки порины пронизывают КС бактерии, но размеры разные у Г(-) больше, у Г(+) меньше.

Цитоплазматическая мембрана: функция: избирательная проницаемость, осмотический барьер, участие метаболизме, энергетический обмен (в составе много ферментов - цитохромы, оксидазы, дегидрогиназы, атефазы), репликация, участие в спорообразовании, выделительная.

Цитоплазма коллоидная система состоит из воды включений органелл, место где идет метаболизм.

Нуклеоид замкнутая ДНК (бактериальная хромосома) имеет гаплоидный набор. Методы выявления нуклеоида: специальная микрохимическая реакция по Фельгину, обнаружение в электронный микроскоп. Функции: хранение генетической информации, определение жизнеспособности клетки.

Непостоянные структуры.

Капсула: по химическому составу полисахаридное в-во, слизистый слой, белки, липиды. Может быть большой (больше чем клетка), маленькой можно обнаружить. Функции: защитная (от фагоцитоза макрофагами), дополнительный фактор патагенности, защищает от действия антилел, антибиотиков, придает адгезивные свойства. Продукция капсулы исключительно в живом организме, а не Вов внешней среде, на искусственной питательной среде (обогощенной полисахаридами) небольшая часть микробов может продуцировать капсулу (пневмококки, клепсиелы, возбудитель сибирской язвы).

Споры: является защитной реакцией присущей некоторым микроорганизмам, при попадании в неблагоприятные условия (внешняя среда - отсутствие воды, питательных веществ, старение культуры, неблагоприятная температура), обычно палочковидные (в зависимости от этого они делятся на бациллы, кластридии (Сп⁺) и остальные бактерии). Спорообразование у прокариот является формой сохранения генетического материала клетки при неблагоприятных условиях, а не метод размножения (из одной клетки 1 спора). Обязательное условия для спорообразования необходимо присутствие кислорода. Во внешней среде могут жить десятки лет. После прорастания (4-5 часов) вегетативная форма (способная к делению, метаболизму). Разрушаются оболочки споры, образуется ростовая трубочка, синтез клеточной стенки.

Процесс спорообразования:

. образование спороносной зоны в которой находится нуклеоид,

. образование проспоры при этом спорогенная зона отделяется,

. образование кортекса - оболочки споры,

. отмирание вегетативной части клетки и освобождение споры.

По локализации: спора может занимать центральное положение, субтерминальное, терминальное.

По величине: меньше чем диаметр палочки (бациллы), больше диаметра палочки (клостридии)

Свойство споры:

Устойчивость. Термо- связано с химическим составом: мало воды 5-10%, много солей кальция, есть дипиолиновая кислота, поэтому выдерживает пастеризацию, кипячение. Что бы убить спору нужна T=180-200⁰, 20 мин, т=120⁰ + 1,5 атм.

Спорообразование присуще:

Бацилле антрацид - сибирская язва

Кластридии - гангрена, столбняк

Возбудителям ботулизма

Жгутики: органы движения. Поверхностные структуры в виже ниточек, обнаруживаются только в электронный микроскоп в составе сократительный белок флагелин, прикрепляются к цитоплазматической мембране. По количеству и расположению все делятся на: монотрихии, лофотрихии (пучок), амфотрихии (два пучка), перитрихии (по периметру), Длина Ж больше чем длина клетки. Наиболее подвижны монотрихии, лофотрихии.

Методы изучение подвижности:

Висячая капля

Раздавленная капля

Темнопольная микроскопия

Фазоконтрастная микросокпия

Ворсинки: тонкие полые нити белковой природы, коротенькие, которые покрывают поверхность клетки, очень много, не выполняют локомоторную функции. Функции: адгезия (ворсинки 1 типа, с ними связана патогенность бактерии), конъюгативная (половые ворсинки) их мало.

Включения: зерна волютина (метафосфатические обладают свойством метохромазии - способность окрашиваться не в цвет красителя), жировые зерна, гликоген. Запас питательного вещества.

ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ФОРМЫ БАКТЕРИЙ.

Ø  Шаровидные

Ø  Палочковидные

Ø  Извитиые (вибрионы, спириллы (имеют лофотрихии), спирохеты)

Прокариоты имеющие особую морфологию:

Ø  Спирохеты

Ø  Рикеции

Ø  Актиномицеты

Ø  Хламидии

Ø  Микоплазмы

Спирохеты: нитевидные, спиральнозакрученые, извитые есть локомоторный внутренний аппарат представленный осевой нитью миофибрилл.

Семейства спирохет.

1.       Борели - грубые завитки

2.      Трепонемы - равномерные завитки

.        Лептоспиры имеют первичные завитки, и вторичные, утолщенные концы

Дифференциация проходит: по количеству завитков, характеру концов, по характеру движения.

Типы движения:

Ø  Винтообразные (трепонема, лептоспира)

Ø  Вперед-назад, право-лево

Характер движения:

Ø  Плавные

Ø  Резкие

Методы изучение: окраска по Романовскому-Гинзе. Борели - синие, остальные розовые. Микроскопия темнопольная микроскопия, фазово-контрастная.

Риккетсии: прокариоты, маленьких размеров,

Полиморфные (коковидную, кокобактериольную, палочковидные, длинную нитевидную) связано с особенностями деления, перегородка неполная и по этому клетки могут принять различную форму.

Облигатные внутриклеточные паразиты на искусственных средах не растут, могут культивироваться только в живой клетке (куриного зародыша), в организме насекомых.

Экологическая ниша: заселяют организм членистоногих, передаются трансмессивным путем (укусы) от насекомых - вши, блохи, клещи. Примеры: сыпной тиф.

Методы выявления: окраска - Романовскому - Гинзе, по Здоровскому, при этом клетки в которых находятся риккетсии окрашиваются в один цвет, ядро в другой, сама риккетсия в третий. Микроскопия: цветовая, фазово-контрастная, электронная.

Хламидии: возбудители трахомы, урогенитальный хламидиоз. Прокариоты, маленьких размеров, облигатные внутриклеточные организмы, энергетические паразиты.

Морфологические формы:

Ø  Внеклеточная - элементарное тельце, сферическая форма, маленького размера 0,3 мкм, имеющая клеточную стенку, мембрану

Ø  Внутриклеточная - ретикулярное тельце, находится на разных стадиях созревания, можно обнаружить только внутри клетки, там созревает и разрывает клетку.

Методы обнаружения: окраска по Романовскому - Гинзе, фазово-контрастная микроскопия, реакция имунофлюоресценции, метод иммуноферментного анализа.

Микоплазмы: болезни: пневмония, бронхит, урогенитальный микоплазмоз, неонатальная патология.

Особенности:

Ø  Нет клеточной стенки

Ø  Очень маленькие размеры

Ø  Полиморфны (сферические, нитевидные)

Ø  Не красятся по Граму

Ø  Не чувствительны к пенициллину

Ø  Являются мембранными паразитами - садятся на клеточную стенку и вытягивают в-ва (холестерин)

Методы изучение: культивирование (с добавлением холестерина), растут медленно, РИФ, ИФА, ПЦР, фазово-контрастная микроскопия после окраски по Романовскому-Гинзе.

Актиномицеты: прокариоты имеющие сходство с грибами. Полиморфные (ветвистые, короткие палочки) способны образовывать мицелий, Грам⁺, кислотонеустойчивые. Растут медленно. Места обитание: внешняя среда, полость рта (нормальная микрофлора). Могут размножаться спорами. Изучение: окраска - по Романовскому-Гинзе, культивирование.

Морфология и структура вириона, особенности репродукции.

Размеры вирионов от 15 до 400 нм. Самые крупные - оспа, герпес, маленькие - пикорна вирусы.

Структура вириона:

Ø  Нуклеокапсид - нуклеотид (ДНК, РНК)

Ø  Капсид - состоит из субъединиц, которые укладываются вокруг нуклеиновой кислоты симметрично в виде спирали (палочковидная форма ), кубическая (сферическая форма).

Ø  Супер капсид имеет выступы в виде шипов.

Химический состав: нуклеиновая кислота, белки капсида, липиды, полисахариды, ионы кальция, магния.

Особенности вирусной ДНК.

Типы: двунитевые, однонитевые. По форме: линейная, кольцевая, может иметь повторы на концах. В кольцевой форме способна в репликации встраиванию в клеточный геном. Вирусная РНК - является носителем генетической информации. Типы: однонитевые, двунитевые, одна нить спирально закручена, нить фрагментарная, нить кольцевая. Формы: линейная, кольцевая, фрагментированная. Функции РНК:

Ø  РНК+ нить - позитивный геном, способна выполнять функцию трансляции, информации на рибосомы клетки хозяина,

Ø  РНК-нить - негативный геном, не могут выполнять иРНК,, а являются только матрицей для образования информационной РНК.

Функции вирусных белков:

Ø  Струткрные

Ø  Рецепторные

Ø  Антигенные

Ø  Ферментативные

Ø  Способность к самосборке

Ø  Услойчивость к протеолитическим ферментам клетки хозяина

Репродукция вируса.

1.      Адсорбция. Прикрепление вирона к клеточной поверхность за счет рецепторов на клетке узнающих субстанции на поверхности вируса. Высоко специыфический процесс. Например вирус гриппа способен адсорбироваться на клетках продуцирующих муцин. Клеточным рецептор выступает сиаловая кислота. Для ВИЧ-вируса СД4. При этом одни вирусы имеют клеточные рецепторы только в организме приматов. Другие вирусы только среди бактериальных клеток, третьи только в организме насекомых.

2.      Проникновение вируса в клетку. Рецепторный эндоцитоз. Вирус инвагинирует внутрь клетки с образованием фагосомы внутри клетки (Грипп). Слияние мембран - вирусная оболочка и плазматическая мембрана клетки сливается (ВИЧ), этот механизм включает и соседние клетки не инфицированные вирусом с образованием синцития.

.        "Раздевание вирона". Депроитенизация. Удаление вирусных защитных оболочек и освобождение генома. Это происходит в определенных участках при участии клеточных ферментов. Эта стадия необходима для экспрессии генома вируса, что бы все гены вируса заработали.

.        Транскрипция. Переписывания генетической информации ДНК или РНК на рибосомы клетки по законам генетического кода. Транскрипция заканчивается образованием иРНК. При этом у вирусов ДНК-содержащих иРНК синтезируется на одной из нитей ДНК. Вирусы РНК-содержащие+нитевые процесс транскрипции отсутствует РНК выполняет функцию иРНК. РНК-нитевые процесс транкрипции включает образование иРНК и далее. В составе этих вирусов есть фермент РНК полимераза. Ретровирусы (ВИЧ) это РНКовые вирусы, но в составе есть специальный фермент - обратная транскриптаза транскрипция у таких вирусов включает: обратное переписывание, сначала образуется ДНК (прегеномная), затем транскрипция прямая с образованием иРНК (гомологичная геномная) и далее трансляция - белок.

.        Трансляция процесс перевода иРНК на специфическую последовательность аминокислот. Этот этап необходим для синтеза вирусного белка. Есть 2 способа формирования вирусных белков.

. иРНК транслируется в гигантский полипептид предшественник, который потом подвергается нарезанию на отдельные белки (полиомелит). Процесс нарезания происходит в специфических точках с помощью протеолитических ферментах. В результате образуются белки-слияния т.е. у вириона появляются инфекционные свойства.

. и РНК транслируется с образованием зрелых белков. В качестве модификации может выступать-гликозилирование, метилирование, сульфирование, фосфолирирование с ним связан механизм антивирусного действия интерферона.

Многие противовирусные препараты способные задержать репродукцию на ходят точку мишени в этой стадии.

6.      Репликация вирусной РНК. Синтез молекул нуклеиновой кислоты гомологичной вирусному геному. Репликация ДНК-содержащих вирусов осуществляется за счет ДНК-полимеразы. Репликация РНК-содержащих при участии фермента катализатора. И по этому у +нитевых вирусов практически не отличается от транскрипции. У - нитевых отличается только длинной образовшихся РНК.

7.      Сборка вирусных частиц. Белки, нуклеиновые к. этот процесс разобщен, протекать в разных струткурах и по времени. Вирусные Б и НК обладают способностью узнавать и самопроизвольно соединятся друг с другом. Просные вирионы собираются на мембранах ЭПС, сложные на цитоплазматическоей мембране образуя почку. Многие ДНК-вирусы собираются в ядре, на мембране где образуются нуклеокапсиды из этих структур вирусы транспортируются на поверхность клетки.

.        Выход вирусных частиц из клетки. Происходит за счет: "взрыва" - при этом клетка гибнет. "почкование" - характерен для сложных вирусов при этом клетка не погибает.

Результаты взаимодействия вируса с клеткой хозяина.

Продуктивная вирусная инфекция - характеризуется репродукцией вирусов. Все стадии проходят в клетке. Результат вирусная инфекция приводящие к гибели клетки (грипп, корь, ветрянка, краснуха).

Интегративная вирусная инфекция. Вирогения. Сопровождается интеграцией нуклеиновой кислоты вируса в геном клетки хозяина и в этом виде функционирует как составная часть геном хозяина - лизогения клетки. (герпес, ВИЧ) это приводит к длительному персистированию в составе клетки. Результатом может быть злокачественная трансформация клетки.

Абортивная вирусная инфекция не приводит к появлению к вирусных белков, накоплению вирусных частиц. Обычно характерен для дефектных вирусов или для вирусов, которые внедрились в покоящиеся клетки. Это способствует хронизации процесса, скрытому латентному течению и любые внешние факторы способны вызвать в выраженную инфекцию.

Культивирование и индикация вирусов.

Культивирования:

Ø  Лабораторное животные

Ø  Куриный эмбрион (8-10 дней)

Ø  Клеточные структуры ткани - монослой однородных клеток фиксированный к стеклу, который растет и размножается на специальной питательной среде (199). Они могут быть первичными - из нормальных клеток (культура Фб), она может дать только первичные регенерации в пробирке; перевиваемая - готовится как правило из опухолевой клетки (Hela), может пассироваться в течении долгих лет; Попупрививаемая - из норамльных клеток пассируется 10-15 раз.

Индикация:

На эмбрионе:

Ø  По реакции гемагглютинации (ГМА), склеивание эритроцитов под влиянием вируса.

Ø  Реакция имуноферментативная (ИФА)

Ø  РИФ

На клеточной культуре:

Ø  По цитопатическому действию (ЦПД), которое проявляется в гибели, деструкции или образованию синтиция.

Ø  По выявлению специфических вирусных включений. Могут находится в цитоплазме, ядре (вирус бешенства).

Ø  Реакции имунофлюоресценции (РИФ)

Ø  Реакция гемабсорбции

Ø  По изменению цвета индикатора питательной среды (199) - цветная проба.

Ø  Метод электронной микроскопии

На животных:

Ø  По клинической симптоматике

Ø  По специфическим изменением клеток

Ø  По включениям методом РИФ

Диагностика:

Вирусоскопия- обнаружение непосредственно в материале или найти его антигены, включения.

Ø  Электронная микроскопия

Ø  РИФ

Ø  ИФА

Ø  Цитоскопически

Вирусологический - включает культивирование вирусов, обнаружение вируса, идентификация вируса.

Ø  Серологичекий - парные сыворотки больного для обнаружения специфических противовирусных антител.

Генетические - обнаружить в материале больного вирусные нуклеиновые кислоты.

Ø  Метод гибридизации

Ø  Метод полимеразной цепной реакцией ПЦР

3. Физиология микроорганизмов

Включает питание, дыхания, размножение бактерий.

Метаболизм.

Метаболизм микрообранизмов - совокупность всех биохимических процессов происходящих в клетке. Различают энергитичекий метаболизм 9катабализм) - реакции расщепления при которых выделяется энергия; конструктивный (анабализм) - процессы синтеза веществ из которых образуются основные структуры клетки, требует энергии. Оба типа метаболизма связаны между собой, происходят одновременно, деления на два типа условно. Для питания микроорганизмов требуется 4 главных элемента: углерод, кислород, водород, азот. Эти элементы являются основой органических веществ и составляют 95% клетки. Кроме этого требуются макроэлементы: сера, фосфор, калий,, магний, кальция и микроэлементы: натрий, железо, цинк, марганец, медь.

1.      Аутотрофный (сомопитающийся)

Типы питания:	Источник углерода, азота	Источник энергии	примеры	Патогенны
Аутотрофный (широко распространены)	Неорганические соединения (соли)	Ø Окислительно-востановительные реации (хемоаутотрофы) Ø Свет (фотоаутотрофы)	Нитрофицирующие-, азотфиксирующие-, серо- бактерии	нет
Гетеротрофы    Сапрофиты - используют органические соед Паратрофы (паразиты)	Органические соединения (глюкоза, спирты, аминокислоты) Органические соединения мертвых субстратов Органические соединения живых субстратов	Ø Окислительно-востановительные реации (хемоаутотрофы) Ø Свет (фотоаутотрофы)		есть
Ауксоторофы

А широко распростеронены для культивирования неорганические питательные среды. Для Г среды с легко усвояемыми белками.

Микроорганизмы неспособные синтезировать, конкретное в-во из органического соединения - ауксотрофы обитают в среде обитания конкретных факторов роста (аминокислоты, пуриновые основания, пиримидиновые основания, фосфолипиды, холестерин, витамины В, геммы) могут нуждаться в одном или нескольких факторов. Прототрофы могут сами синтезировать.

Транспорт питательных веществ в бактериальную клетку.

1.      Пассивный - облегченная диффузия, в следствии разности концентрации питательных веществ, без затрата энергии. Отвечает за транспорт цитоплазматическая мембрана. Помогают ферменты, белки

2.      Активный транспорт - перемещение в-в происходит ч/з цитоплазматическую мембрану, отвечают за перенос специальные белки мембраны и периплазмы. Этот путь требует энергии и у бактерий он является доминирующим.

.        Транспорт обусловленный фосфорилированием (транслокация) - используется для переноса углевода. Вначале на наружней мембране происходит транслокация группы, дальше транспортируемое в-во поступает ч/з ЦПМ и на внутренней стороне происходит отделение радикалов от субстрата. Эти превращения необратимы.

Выделение в-в из клетки.

В процессе жизнедеятельности бактериальная клетка выделяет многие в-ва:

1.      БАВ (ферменты)

2.      Токсины

.        Антибиотикоподобные вещества - бактериоцили

Они выделяются ч/з ЦПМ, содержат сигнальный пептид для прохождения, а при выходе пептид остается в мембране. Процесс выделение это не выброс шлаков, а механизм адаптации клетки к условиям внешней среды. Это определяет конкурентные свойства бактерий.

Ферменты бактерий.

Ферменты - специфические белковые катализаторы, которые присудствуют во всех живых клетках и за каждое превращение отвечает фермент.

Регуляторные, которые работают на уровне генома воспринимает все метаболические сигналы и изменяют каталитическую активность.

Эффекторные ферменты - определяют метаболизм в б/к можно выделить 6 класов этих ферментов:

1.  Оксидоредуктазы - катализируют о-в реакции между субстратом (НАД, НАДФ, каталаза, ДГ);

2.      Трансферазы - катализирует реакции переноса химических групп и одноуглеродных остатков;

.        Гидролазы - катализируют реакции гидролиза связей (протеиназа, липаза, гликозидаза);

.        Лиазы - катализирует реакции присоединения и обрыва групп по 2-м связям (альдолаза, фумаразы, декарбоксилазы, дезаминазы);

.        Изомеразы - катализируют реакции изомеризации (топаза);

.        Лигазы - катализируют реакции синтеза.

Синтез ферментов видоспецифичен, постоянен и поэтому набор ферментов у бактерий используется для их видовой идентификации. Ферменты которые синтезируются независимо от условий обитания клетки - конститутивные. Ферменты синтез которых зависит от определенного субстрата в среде обитания - индуцивельные.

Получение микробных ферментов важная отрасль промышленной микробиологии, широко используется в биотехнологии. Промышленная микробиология получает: амилазы, липазы… как лекарста, питательные добавки, пектиназы - для осветления соков, рибонуклеазы, ДНК-лагазы, полимеразы - в генной инженерии для моделирования нуклеиновых кислот.

Метаболизм.

Азот необходим для синтеза аминокислот, белков, пуриновых, пиримидиновых нуклеотидов, для витаминов. Использование неорганического азота происходит при ассимиляции под действием нитратредуктазы Б, дессимиляции - сопровождается выделением газообразных форм азота - под действием нитратредуктазы А, восстановлением нитратов в нитриты. Появление азота служит для идентификации бактерий. Способность разлагать определенные аминокислоты тоже как идентификационные тест.

Высоко молекулярные соединения неспособны проходит ч/з клеточную стенку поэтому утилизировать белковый азот могут бактерии которые выделяют экзоферменты протеазы они расщепляют белки до пептидаз, поэтому протеолитическая активность используется для оценки ферм активности.

При выращивании в лабораторных условиях для источника азота используют пептоны, или препараты неполно гидролиза белка, белковые гидролизаты (продукт первичного гидролиза белка) - рыбы, мяса (сухожилия, костная мука, фасции).

Фосфор основной его источник неорганические фосфаты, отдельные нуклеиновые кислоты.

Сера получается из цистеина, метионина, витаминов (биотин, тионин), глютатион. Это определяет о-в потенциал клетки. Утилизируется в форме сульфатов и при этом переводит окисленную форму в восстановленную под действием сульфатредуктазы - с образованием сероводорода. Обнаружение сероводорода тоже идентификационный тест.

Кислород включается в бактериальную клетку из молекулярного кислорода с помощью оксигеназ и опосредовано из воды, СО₂ в зависимости от потребности в молекулярно кислороде бактерии делят на 5 основных групп:

1.      Облигатные аэробы - способны получать энергию только путем дыхания (псевдомонады, вибрионы, бруцеллы) имеют фермент супроксиддесмутазу, каталазу

2.      Облигатные анаэробы - метаболизм происходит в отсутствии свободного кислорода т.к. кислород ля них токсичен.

.        Факультативные анаэробы - растут как в присутствии свободного кислорода так и в отсутствии т.к. могут переключатся с дыхания на брожение пероксидаза

.        Аэробтолерантные - способны расти в присутствии атмосферного кислорода, но не используют его в качестве источника энергии (молочно-кислые бактерии) супреоксид десмутаза, пероксидаза

.        Микроаэрофилы (капнофилы)- нуждаются в кислороде для получения энергии в маленьких количествах, но лучше растут в присудствии высокой концентрации СО₂ (гонококки, кампилобактерии, хеликобактери)

Катаболизм.

Реализуется ч/з образование молекулы АТФ "разменной монеты", может превражатся в АДФ, АМФ. Эта неустойчивость позволяет выполнять функцию переноса химической энергии. Синтез у гетеротрофов осуществляется двумя способами:

1.      Окислительное фосфолирирование - дыхания при котором происходит транспорт электрона по дыхательной цепи у эукариот в митохондриях, у прокариот в ЦПМ. Перенос происходит по стандартной схеме: Субстрат → НАД → флавопротеины → железосодержащие белки→хиноны→цитохромы (а,в,с)→конечный акцептор. Окислению могут подвергаться органические субстраты идет до СО₂ и воды. Если субстрат неорганическое в-во, то это сероводородное (железное) дыхание. В реакциях окисления работают дегидрогеназы. Аэробное дыхание используется у сапрофитов, патогенные для человека имеют это дыхание (псевдомонады, холерные вибрионы).

2.      Субстратное фосфолирирование - брожение

Катаболизм углеводов.

Способность утилизировать углеводы важный идентификационный признак. Базовый субстрат - Глюкоза она используется как при дыхании, так и при брожении. Протекает одинаково у аэробов и анаэробов. Пути превращения:

1.      Гликолиз - доминирует у энтеробактерии, конечное превращение идет с образованием пирувата (фермет аелаза). Затем он полностью окиляется и превращается в СО₂ в цикле Кребса (ферменты дегидрогиназы)

2.      Пептофосфатный путь - не имеет специального назначения (дополнительный)

.        Кето-дезокси-6-фосфо глюканатный путь (КДФК) - только у прокариот (бактерий). Не образуется млочной муравьиной кислот.

Катаболизм азот содержащих органических сединений.

Происходит ч/з декарбоксилирования с образованием СО₂ и работают ферменты декарбоксилазы. Происходит за счет дезаминирования, конечные продукты аммиак, индол, триптофан. Происходит за счет периаминироания. Определение ферментов используется для идентификации.

Катаболизм жиров.

Происходит ч/з гидролиз кислот до глицерина и свободных кислот. Далее окисление с образованием ацетил КоА → цикл Кребса.

Анаболизм.

Углеродные соединения (сахара, аминогруппы) образуются в ходе синтеза продуктов окисления пирувата и ц. Кребса. Эти продукты используются для синтеза моно-, ди-, полисахоридов. Синтез происходит на рибосомах в сочетании в мРНК ДНК-азы, РНК-азы идет синтез моносахарав, жирных кислот полимеров белков лигазы, синтетазы, пептидазы.

Взаимосзясь метаболизма и катаболизма самая прямая разграничение условное. Между ними гибкий баланс, главный метаболит пируват.

Рост и размножение бактерий

Рост- увеличение массы клеток, размножение - увеличение чила популяции клетки. Если бактерии культивируются в жидкой питательной среде то в процессе роста и размножения выделяют несколько фаз:

1.      Начальная фаза (ЛАГ) - 2 часа, клетка увеличивается гтовится к делению. В этой фазе увеличивается количесвто рибосом.

2.      Экспотенциальная (ЛОК) - скорость деления максимальная, в эту фазу максимальная чуствительность к антифиотикам.

.        Стационарная - постоянное количество микробных клеток

.        Отмирание - гибель клеток и накопление кислых продуктов метаболизма в питательной среде

Факторы влияющие на рост и размножение:

1.      Культуральная среда - должны иметь определенный pH, стерильны, содержать углерод, азот, фосфор (5:1:0,3)

2.      Температура - по этому микробы мезофильные (20-40⁰), термофилы (47⁰), сихрофилы (0 - +10)

.        Аэрация - присутствие свободного кислорода или его отсутствие

.        Концентрация ионов Н - большинство растут при 7,2, а некотрые растут в щелочной среде 8 (холерный вибрион), а некоторые килую (лактобактери). Поддержание рН необходимо для бактерий образующих кислые продукты. Для поддержания рН добавляют бикарбонаты, фосфаты.

Экология микроорганизмов. Микрофлора воды, воздуха, почвы.

Микробные биоценозы, влияние на бактерии физических факторов.

На Земле микробы живут практически во всех регионах, климатических зонах и т.д. Обнаружены следы микроорганизмов в космосе.

Факторы влияющие на микроорганизмы:

Температура: по этой характеристики делятся на психрофилы (от-10 до +10), микробы лучше переносят низкие температуры; мезофиллы (от +20 до +40) практически все паразитические симбиоитные бактерии, человек для них идеальная питательная среды; термофилы (от +50 до +70).

Температурный минимум - температура при которой микроб замедляет жизнедеятельность.

Температурный максимум - температура при которой жизнедеятельность прекращает.

Температурный оптимум - оптимальная среда для микроба.

В природе микробы размножаются только в воде и почве. Стоки воды большого города имеют бактерии которые разлагают вредные вещества и создают для патогенных бактерий неприемлемые условие происходит самоочищение.

Ø  Антагонизм - одному из организмов причиняется вред. Возможно, что один вид размножается быстрее и другому не хватает питания. Возможно выделение одним микробов продуктов обмена, которые изменяют характеристики среды и другой не может развиваться. Выделение антибиотиков.

Ø  Симбиоз - любое совместное проживание макро и микроорганизмов. Классическим симбиозом является мутуализм при этом два организма извлекают пользу. Метабиоз - продукт жизнедеятельности одного микроба, питательная среда другого, разновидность сателитизм - один микроб выделяет продукты, которые стимулирует рост другого микроба. Синергизм - повышается жизнеспособность под действием в-в выделяемых другими бактериями. Комменсализм - один из членов микробиоза извлекая питание из другого не нанося ему вреда.

Ø  Хищничество

Ø  Паразитизм

Типы заболевания в зависимости от источника:

Антропонозные - источник человек

Зоонозные, зооантропонозные - источник животные

Сапронозные - источник сама окружающая среда. Долгое время холерный вибрион считался антропонозом, но недавно было выявлено что он сапрофит.

Но для большинства организмов окружающая среда прожиточный этап. Поэтому необходима оценка окружающей среды.

Методы оценки микробиологической чистоты объектов окружающей среды:

1.      Прямые - подразумевают нахождение на объектах внешней среды патогенных микроорганизмов.

2.      Косвенные - выявление санитарно-показательных микроорганизмов, они должны указывать возможность загрязнения и легко культивируются. Это микроорганизмы выделяются из организма человека.

Санитарная чистота воздуха.

СПМ: золотистый стафилококк, гемолитический стрептококк, споры плесневых грибов. Определяют общее микробное число - кол-во бактерий на 1м³, число стафилококков, стрептококков, грибов по отдельности.

Классы чистоты медицинских помещений:

А) Повышенной чистоты - операционные, родильные блоки, боксы для ожоговых.

Б) чистые - процедурные, перевязочные

В) условно чистые - палаты

Г) грязные - коридоры, туалеты, кабинеты

Для общего числа - МПБ, для стафилококка - желточный агар, для стрептококков - кровяной агар, грибы - среда собурон.

Методы забора воздуха:

)седиментация по Коху - открыть 2 чашки с питательной средой, ставить в термостат, на следующий день =считают 250 и менее чистые, 250-500 условно чистые, 500 и более грязные

) 2 чашки открыть на 5 минут→термостат→подсчет по формуле Омелянского: за это время оседает столько микробов сколько содержится в столбе воздуха.

) аспирационный метод - аппаратом Кротова. В аппарат помещается чашка с средой, над чашкой проходит поток воздуха и происходит посев. Зная скорость потока, время экспозиции и количество колоний можно подсчитать общее число микробов.

Санитарная чистота воды.

СПМ: общие колиформные бактерии ферментирующие лактозу при 37⁰, термолтолирантные ферментирующие бактерии при 40⁰. В 100 = 0 бактерий, колибактериофаги они указывают на вирусное загрязнение в 100 мл=0. Общее микробное число - число бактерий образующих колонии в 1 мл среды=50 КОЕ, споры сульфит продуцирующих бактерий, лямблии 50л=0, энтреробактерии.

Среды для колиформных бактерий: среда Эйтмана, Энда.

Методы определения колиформных бактерий:

1)      бродильный - берут 333 мл (6 пробах) воды засевают в глюкозопептонную среду, затем заселяют колонии на среду, красят, делают оксидазный тест. Колитиртр объем воды в котором обнаружена 1 кишечная палочка, колииндекс - количество палочек на 1 литр.

2)      Мембранных фильтров: через них пропускают воду, выкладывают на среду Энда если они присутствуют, то они берутся→красятся→считаются→окидазный тест→высевают →считают.

Основы химиотерапии, химиопрофилактики. Антибиотики.

Химиотерапия - лечение инфекционных заболеваний с помощью лекарственных препаратов, которые преобладают избирательным действием на микроорганизмы подавляя их рост и размножение

Химиопрофилактика - предупреждение инфекционных болезней и рецидив путем их приема лекарственных средств

Основоположником химиотерапии является Пауль Эрлих 1885 год. Сформулировал саму идею. Основной принцип химиотерапии: Физиологическая имитация. Химическое вещество способно избирательно взаимодействовать с бактериальным кл за счет наличия на поверхности рецепторов по своей конфигурацией подходящих для этого химического вещества.

Известно большое количество химиотерапевтических препаратов их объединяет ряд общих признаков:

1.      Химический препарат не должен обладать токсическим действием на макроорганизм Безвредность проверяется с помощью химиотерапевтического индекса: ХТ_индекс = min_{терапевтическая доза}/max_{переносимой}<1. max_{переносимой}- достижимая концентрация в жидкостях организма.

2.      Избирательное действие на микроорганизмы и их. Например на Г+, на грибы, на паразиты, на спирохеты, микобактерии.

.        Обладают бактериостатическим или бактерицидным действием.

.        Постоянное формирование лекарственной устойчивости у микроорганизма.

В основе мтодов профилактики и борьбы с инфекционными болезнями лежат методы уничтожения и подавления условно и патогенных микроорганизмов. Это подав может быть на объектах внешней среды и внутри организма. Известно много химических веществ с антимикробным действии - химические вещества:

Ø  Дезинфектанты, которые используются для уничтожения микроорганизмов на объектах внешней среды (хлорсодержащие препараты, фенольные препараты - избирательным действием не обладают, токсичны для живых тканей).

Ø  Антисептики - для уничтожения условно - патогенных на нормальных, поврежденных тканях, на медицинском инструментарии, средствах гигиены (спиртовой раствор йода, марганцовка, перекись водорода, 70% этиловый спирт, хлоргексидин, первомур, растворы кислот) могут быть использованы для местного применения, не обладают избирательным действием, малотоксичные.

Механизм действия связан с денатурацией белка.

Анитибиотики обладают избирательным действием, могут применятя внутрь, сохранятся внутри, они находят мишени (отдельные структуры бактериальной клетки) и не вступают в связь с другими клетками.

Антибиотики - высокоактивные продукты метаболизма многих микроорганизмов избирательно подавляющие рост и размножение бактерий и опухолей.

Открытие связано с явлением антоганизма (Пастер, мечников). Открыватель пенициллина - Флеминг 1940 год (через 20 лет после обнаружения явления). Производство связано с учеными Флори и Чейн 1942 год. В нашей стране 1943 год - Ермольева.

Классификация антибиотиков:

По источникам получения:

Ø  Бактериальные - актиномицеты

Ø  Грибы - плесень

Ø  Растения - чеснок, лук, редька, редис, сосновые (фитонциды)

Ø  Животные - лизоцим (слюна, слезы)

Ø  Биологический синтез

По спектру действия:

Ø  Широкого спектра способны действаваьь на Г+, Г-, риккеции и т.д.

Ø  Узкого спектра

По направленности

Ø  Бактериальные

Ø  Противогрипковые

Ø  Противовирусные

Ø  Противоопухолевые

Ø  Противопаразитарные

По химическому строению:

Ø  Бета-лактанные (пенициллины)

Ø  Тетрациклины

Ø  Аминогликозиды

Ø  Макролиды

Ø  Левомицетин

Ø  Рифампицины

Ø  Полиеновые антибиотики

Противобактериальные антибиотики.

По механизму

Ø  Ингибиторы синтеза компонентов клеточной стенки (пенициллины,

1.       ингибиторы сборки и пространственного положения

2.      ингибиторы синтеза самого пептидогликана

Пеницинины:

Природные, продуцирутся грибами, использование сейчас минимально они действуют только на Г+, разрушаются НСl, неустойчивы к воздейсвию беталактамаз.

Полусинтетические с 1957 года. Сейчас имеются 4 покаления. (мелин, ампициллин)

Потенцированные пенициллины - в составе вещество разрушающее бета-лактамазу. Препетары действуют на Г+ и Г- (амоксиклав, сульбактан)

Цефалоспорины:

Природные: грибы, легко модифицируются известно более 30 препаратов. Имеется 1 поколение только на Г+, 4 покаление и на Г-

Монобактаны:

Карбопенемы имеют самый широкий спектр дейстия

Батитроцины, ванкомицины - стрептомицетами на Г+, основной стафилококковый антибтиоттик. Циклосерин - противотуберкулезный

Ø  Нарушающие функцию цитоплазматической мембраны:

Полимексины: бактерии, нарушают осматическое равновесие, токсичны для макроорганизма

Полиеновые: нистатин-протиивогрипковый. Леварин - взаимодействуют с белком эргостеролом входящим в состав мембраны.

Ø  Ингибиторы синтеза белка на уровне рибосом.

Влияющие на 30S -

Тетрациклины - продуцируются стрептомицетами, природные сейчас не применяются. Используются полусинтетические - доксициклин, миноциклин на Г+ и Г-, микоплазмы, рикеции, хламидии. Быстро формируют дисбактериоз. Депонируются в костной ткани не назначаются детям, беременным.

Аминогликозины (известно 50 препаратов стрептомицин, гентамицин,) нейротоксичны, нефротоксичны, потеря слуха.

Влияющие на 50S линкомицины,

Левомицитины - стрептомицетами. Г+ и Г-, анаэробы, гемофилы. Вызывают осложнение со стороны ЖКТ, нарушают функции костного мозга.

Макролиды - эритромицин, троксимицин. Широкого спектра. Последние группы суммамед.

Ø  Ингибиторы транскрипции и синтез нуклеиновых кислот.

1.       подавляющие синтез ДНК

2.      подавляющие синтез РНК

Римфампицин - противотуберкулезный ингибирует ДНК-зависимую РНК-полимеразу. Быстро развивается устойчивость.

Хинолоны - получаются только синтезом. Ингибируют ДНК-лигазу. Примеры: налидицевая кислота, оксалинеевая кислота, циноксоцин.

Фторхинолоны - широкого спектра. Норфлоксацин, офлоксацин, ципрофлоксацин.

Ø  Препараты нарушающие метаболизм

Сульфамины Триметаприн - действуют на уровне рибосом. Ингибируют синтез пуринов, пиримидинов, фолиевой кислоты. Действуют на Г+ и некоторых Г-. Модификации позволяют использовать для лечения хемофильной, протейной, стрептокковой, пневмококковой инфекцией.

Метранидозол - действуют против хеликобактерной инфекции. Действует на белки пиродоксины, которые участвуют в О-В реакциях.

Нитрофунаны - фурациллин, фурозалидол, фурагин для лежения инфекций ЖКТ, МПС.

Противовирусные антибиотики.

Механизмы:

Ø  Ингибиторы адсорбции, проникновения, депроинезации вируса:

Антитела

Амантадины: ремантадин

Ø  Ингибиторы синтеза ранних белков вируса (еще разрабатывается)

Ø  Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот:

1.  Ингибиторы фермента обратной транскриптазы: Зидафудин, ставудин, зальцитовин

2.      Ингибиторы ДНК-полимеразы (протиивогерпетические): ацикловир, фамцикловир, рибовирин, доксуридин - аномальные нуклиазиды

.        Ингибитры синтеза нуклеиновых кислот (вирусных протеаз) саквиновир, риктоновир

МЕХАНИЗМЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ.

1.      Естественная резистентность, видовая связана с отсутствием мишеней. Например микоплазмы не имеют клеточной стрелки → они к бета-лактанным антибиотикам будут резистентные. Уменьшением числа мишеней

2.      Генетическая. Приобретается в процессе жизнедеятельность. Мезанизмы: продукция клеткой специальных ферментов (бета-лактамазы, ацитилтрансферазы) инактивирующих препаратов. Изменение структуры молекулы мишени - ответственны хромосомные мутации - изменение ДНК-гиразы, РНК-полимеразы, субъединиц рибосом.

.        Изменение транспортных механизмов (поринов клетки) - может быть ускорение выведения препарата, снижение проницаемости клетки, хромосомные мутации.

ПУТИ ПРЕОДОЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТРОНОСТИ.

1.      постоянная разработка и получение новых препаратов с разными механизмами действия

2.      Химическая модификация известного антибиотика.

.        Комплексное использование антибиотиков.

.        Изучение лекарственной устойчивости.

.        Запрещение использования антибиотиков в качестве консервантов, добавок. Ограничение применения без достаточных показаний. Иметь антибиотики резерва.

Осложнения антибиотикотерапии:

1.      Токсичность (нейро, нефро, гепато)

2.      Развитие дизбактериоза

.        Формирование резистентных штаммов

.        Аллергизация

. Генетика бактерий

1865 год Мендель установил существование генов. 1869 Фишер выделил ДНК. Через 80 лет доказано что носителем генов является ДНК, 1953 Крик, Уотсон - расшифрована структура ДНК.

Ген выполняет следующие основные функции:

1.      Непрерывность наследования генетической информации благодаря механизму репликации ДНК

2.      Управление структурами и функциями организма с помощью генетического кода

.        Благодаря мутации и генетическим рекомбинациям, которые происходят в гене осуществляется эволюция всех живых организмов.

Генетический код расшифрован и характеризуется следующими свойствами:

1.      Код триплетный → кодон состоит из 3 букв и кодируют одну аминокислоту

2.      Код не перекрывающийся

.        Число бессмысленных кодонов очень маленькое (3 из 64)

.        Последовательность расположения кодов в гене определяет последовательность положения аминокислотных остатков в полипептидной цепи

.        Код универсален

Генетическая система обладает уникальными свойствами:

1.      Способность к самоудвоению с помощью механизма саморепликации

2.      Самовыражение (экспрессия) с помощью регулируемого синтеза матричной РНК

.        Самообновление с помощью мутаций, рекомбинаций и самоподвижных элементов

.        Самоисправляемая (ревизия, репарация, супрессия)

Ген - структура определяющая последовательность аминокислот в ППЦ.

Гены вирусов и эукариотов состоят из экзона (кодирующий) и интроны (не кодирующие). У вирусов в одном и том же фрагменте могут существовать 2 гена с разными рамками считывания. Ген не всегда строго ограниченный участок хромосомы, есть подвижные участки у бактерий. Ген требует регулирования (регуляторы, промотеры). Ген единственные носитель и хранитель жизни, а белок определяет форму и способ жизни.

Эволюция генетической системы шла в направлении кодон(триплет) → ген → оперон → геном вирусов и плазмид → хромосома прокариотов → хромосома эукариотов (ядро).

Объем генома у представителей различных живых организмов сильно отличается. Можно измерить в следующих единицах: молекулярная масса нуклеиновых кислот либо в количестве нуклеотидных пар либо в количестве генов. Все эти значения сопоставимы ген в среднем включает 1000 пар нуклеотидов (вируса гепатита В - 4 гена; ВИЧ - 9 генов)

Генотип - вся совокупность генов у данного вида организма. 10%-70% не кодирующие гены (повторяющиеся последовательности), они не относятся к генотипу и составляют геном.

Фенотип - внешние проявления генотипа в конкретных условиях внешней среды при изменении внешних условий меняется генотип, но генотип при этом сохраняется.

Особенности генетики бактерий.

Хромосомы бактерий располагаются свободно в цитоплазме, не ограничены мембранами, но во всех случаях ДНК бактерии связана с рецепторами на мембране.

Бактерии гаплоидны, содержание ДНК не постоянно, может достигать 2, 4, 6, 8 - хромосом (у других организмов оно постоянно и удваивается только перед делением).

Передача генетической информации идет не только по вертикале (материнская→дочерняя), но и по горизонтали (конъюгация, трансформация)

Помимо хромосомного генома имеется не хромосомный генетический материал, который называется плазмидным геномом (эписомы, внехромосомные факторы наследственности). Это наделяет клетку дополнительными биологическими свойствами.

Содержание ДНК у бактерий зависит от условий их роста или от времени клеточного цикла бактерии, которые осуществляется каждые 20-30 минут, поэтому и количество может соответствовать (4,6,8) и это сопровождается увеличением количества рибосом (этапы транскрипции, трансляции идут одновременно, возможность регулировать скорость размножения главное условие сохранения вида.

Особенности репликации.

Вегетативная репликация: обуславливает передачу информации по вертикали, контролируется хромосомными и плазмидными генами.

Конъюгативная репликации: перенос материала по горизонтали и контролируется только плазмидными генами, при этом происходит достройка нити ДНК комплиментарной нити от донора к реципиенту.

Репаративная репликация: механизм при котором устраняется из ДНК поврежденный участок

Стркуктурно-функциональной едициней является оперон - группа структурных генов связанных с особым геном оператором, он управляет всей группой структурных генов и идет как самостоятельная единица, находится под контролем гена модулятора. В хромосоме гены распределяется друг за другом контролируя разные процессы, но законченный результат можно получить выбирая не последовательно (как игра на пианино).

Хромосомная карта бактерий

Хромосомы бактерий имеют кольцевую форму, гены располагаются линейно, их можно последовательно расположить. Локализация генов определяют в минутах их переноса, и хромосомная карта это 0-100 минут.

Определение локализации гена на хромосоме называется картированием, а их расположение хромосомной картой масштаб которой в минутах. В настоящее время есть карты: кишечной палочки.

Изучение организации генома бактерий.

Проводится с помощью ферментов - рестриктаз способные расщепить ДНК в специфических участках, которые они комплиментарны. В настоящее время известно более 100 рестриктаз. С помощью них можно получить рестрикционные фрагменты ДНК → рестрикционный анализ. Сравнение рестрикционных фрагментов и называется рестрикционным анализом, который может быть использован для идентификации. Делают копии цепей ДНК, которые имеют липкие концы с помощью которых фрагменты вновь могут образовывать кольца. Именно за счет липких концов можно получать между разными фрагментами ДНК - рекомбинантные ДНК. Если эти фрагменты получены с помощью одной рестриктазы они могут вступать во взаимодействия между собой.

Метод клонирования. Выделенный фрагмент ДНК с помощью рекомбинантных молекул вводится в самореплицирующую генетическую структуру - в плазмиду, вирус и дальше они выполняют роль вектора для клонирования. Их сшивают с фрагментом ДНК - геномом, который будет размножаться в составе плазмилы или в составе геном бактериальной клетки. Такие гибридные ДНК также можно выделить из клетки за счет рестрикции - вырезания. С помощью клонирования можно получать большое количество копий любого фрагмента ДНК, который можно метить радиоактивной меткой.

Метод сегвинирования. Используют для определения последовательности расположение ДНК в клонируемом фрагменте ДНК. Методы секвинирования и клонирования это методы помогающие изучить геномы в т. ч. геном человека (2004).

Плазмидный геном бактериальной клетки.

Плазмиды - фрагменты ДНК с небольшой молекулярной массой, несут от 40 до 50 генов. Они выполняют также регуляторную и структурную функцию. Плазмиды могут располагаться либо в цитоплазме, могут иметь кольцевую структуру. Могут находится в интегрированном состоянии хромосомы (эписомы).

Свойства плазмид:

1.      Не обязательные генетические элементы бактерий (дополнительные).

2.      Обладают саморепликацией и автономностью, независимостью от хромосомы клетки. ДНК бактерии им не управляет.

.        Склонны к трансмиссии как по вертикали, так и по горизонтали обеспечивая при этом гегетическую изменчивость бактерий.

Виды плазмид:

F-фактор - кольцевая молекула. Ее гены кодируют образование половых ворсинок, размножение бактерий, скорость размножения с ней связывают конъюгацию, участвует в горизонтальной передаче генетического материала и передаются различные свойства: устойчивость к антибиотикам, лактозо положительность.

R-фактор - детерминирует продукцию фермента β-лактамызы → устойчивость к антибиотикам. В составе этой плазмиды может быть специальный tra-оперон (ген отвечающий за перенос) → плазмида легко передается.

Hly - плазмида связана с продукцией гемотоксина → более токсигенные бактерии.

Col-фактор отвечает за продукцию колицинов (антибиотикоподобные вещества) обеспечивающих преимущество бактерий перед другими.

Плазмиды био деградации: участвуют в расщепдлении веществ загрязняющих окружающей среды.

Плазмида умеренного фага - фаг который способен распознать, внедрится, в клетку, но вызвать лизис бактерии вызвать не может. Может покидать клетку, захватывать часть генетического материала клетки и внедряясь в другую клетку участвует в переносе генетического материала (трансдукция)

Плазмиды есть конъюгативные (способные к переносу, имеющие в своем составе ген переноса), неконъюгативные (не участвуют в рекомбинации). По совместимости есть несовместимые друг с другом, совместимые.

Транспазоны, IS-последовательности.

Относятся к дополнительным генетичесим элементам

Th-маленькие участки ДНК (прыгающие) - в составе могут быть Rгены. Могут находится как в составе ДНК, так и в составе плазмид. Странспазонами связны мутации бактерии поскольку они могут перемещаться и вызывать мутации типа делеции, инверсии, дупликации.. Транспазоны ограничены с двух сторон IS-последовательностями.

IS-фрагменты - маленькие фрагменты ДНК, повторяющиеся, не способны к репродукции в свободном состоянии не участвуют. Основные функции: регуляторные (способны включить - выключить ген). Координируют взаимодействие транспазонов плазмид, фагов как между собой так и с хромосомой клетки хозяина.

Изменчивость бактерий.

Модификационная: адаптивная реакция организмов в ответ на условия внешней среды. Могут изменять морфологические, культуральные, ферментативные свойства.

Генотипическая: затрагивает генотип клетки:

Ø Мутационная - изменение первичной структуры ДНК, могут быть связаны с выпадением нуклеатида, делецией могут носить характер инверсии. Могут быть хромосомные, плазмидные. Могут быть спонтанные, индуцированные. Значение эволционные изменение, сопроваждается селекцией.

Ø  Комбинативная: трансформация - передача генетического материала в виде раствора ДНК донора к реципиенту, трансдукция - перенос генетического материала от донора к реципиенту с помощью умеренных фагов (неспецифическая, специфическая), конъюгация - передача генетического материала от донора имеющего F-фактор к реципиенту через половые ворсинки с образованием новых штаммов.

Значение генетики в эволюции бактерии.

Особенности генетики вирусов.

1.      Молекулярная масса геном вирусов 10⁶ меньше чем масса эукариотической клетки.

2.      Организация генетического аппарата такая же

.        Генов от нескольких единиц до десятков.

.        Принцип 1 ген - молекул РНК - 1 белок у вирусных ДНК нарушен и иРНК вирусов может направлять синтез 2 и более белков.

Способы увеличения генетической информации у вируса.

1.      Двукратное считывание одной и той же и РНК, но с другого кодона.

2.      Сдвиг рамки трансляции

.        Сплайсинг (вырез интронов)

.        Транскрипция с перекрывающихся областей нуклеиновой кислоты → размывается границы гена и понятие ген приобретает функциональное значение.

Виды изменчивости у вирусов.

Модификационная. В основном для вирусов определяет клетка хозяина. Модификация затрагивает суперкапсид.

Генотипическая. Мутационная, то есть изменение в первичной структуре нуклеотидов.

Рекомбинативная. Происходит при одновременном заражении клетки хозяина двумя или более вирусами, происходит обмен генами → образуются рекомбинантные штаммы вирусов, которые содержат гены 2 и более штаммов.

Генетическая реактивация. Процесс при котором вирионы дополняют друг друга в следствии перераспределения генов во время их репликации. Это наблюдается у вирусов с фрагментарным геномом. При скрещивании таких вирусов происходит образование полноценных единиц.

Комплементация (дополнение). Не генетический процесс при котором вирус снабжает своего партнера (как правило дефектного) недостающими компонентами белка, а не нуклеиновыми кислотами. Характерна для многих вирусов - аденовирусы могут культивироваться только в присутсвии SV₄₀ - вирус. Вирус гепатита В является помощником для δ - вируса (HDV).

Фенотипическое смешивание. Наблюдается при совместном культивировании двух вирусов наблюдаем, что геном одного вируса заключается в капсид другого вируса. Генотип при этом не меняется

Генная инженерия.

Биотехнология использование биологических объектов (клеток микроорганизмов, грибов, животных, людей) для получения полезных для человека продуктов, которые не могут быть получены другим путем. Основное направление это генная инженерия. Появилась с 1972 когда появилась первая работа по генной инженерии.

Объект генной инженерии: ген или группа генов.

Источники получения: вирусы, прокарилты

Цель: пересадка гена в другие, гетерогенные системы, экспрессия этого гена и т.о. получать полезные продукты (белки, фермены, гормоны, лекарственные препараты и другие БАВ)

Инструмент генной инженерии: ферменты рестриктазы с помощью которых можно получать фрагменты генома. Рестриктазы имеют липкие концы для сшивания различных генов. Если их нет используют лигазы.

Этапы генной инженерии:

1.      выделение гена из клетки с помощью рестриктаз из генома клетки.

2.      присоединение гена к вектору (переносчику) - плазмиду, ДНК, РНК втрусов, умеренные фаги, искусственные плазмиды. Основные требования к вектору - должен выполнять роль саморепликации. Этот этап сопроваждается образованием рекомбинантной ДНК (ген+вектор)

.        введение рекомбинантной ДНК в гетерогенную систему. В качестве этой системы выступает клетка прокариотов, эукариотов, соматическая.

.        экспрессия введенного гена, создаются условия что бы рекомбинантная молекула начала самореплицироваться и заставила клетку продуцировать вещество, которое кодирует перенесенный ген.

.        клонирование гена и выделение продукта, очитка продукта и выхода продукта

С помощью генной инженерии получают инсулин, интерферон, гормон роста, тромболитики, антикоагулянты, антигены (ВИЧ, малярийного плазмодия, бледной трипанемы) используют для создания диагностических систем, вакцины (против HBV, ВИЧ, малярии).

5. Учение об инфекции

Инфекция (от лат заражение) - совокупность физиологических и патологических реакций, которые возникают и развиваются в макроорганизме при попадании в него патогенных микробов.

Участники процесса: чувствительный макроорганизм, патогенный микроорганизм, внешняя среда (социальные факторы).

Особенности инфекционного процесса:

1.      Всегда есть возбудитель

2.      Цикличность течения

.        Ответная иммунологическая реакция макроорганизма на поступление возбудителя (образование антител, образование Т-лимфоцитов).

.        Заразность.

Условия развития инфекционного процесса:

1.      Попадания в макроорганизм возбудителя в достаточной дозе (инфицирующей дозе) для холеры 10⁹ клеток V. Cholero эта доза содержится в 1 г фекалий. Для дизентерии 10², брюшного тифа 10⁵.

2.      Организм должен быть чувствителен. Инкубационный период будет определятся от дозы и скорости размножения.

Входные ворота - место через которое возбудитель попадает в организм. Для многих возбудителей входные вороты определяют тропизм. Для гонококков - слизистая урогенитального тракта. Для гриппа - верхние дыхательные пути он миксотропен (взаимодействует с клетками которые продуцируют муцин). Для гепативо В,С - непосредственно в кровь. Для дизентерии, холеры, брюшного тифа - ротовая полость, слизистая ЖКТ.

Формы инфекционного процесса.

В зависимости от происхождения:

Экзогенная - попадает из вне (вода, воздух, пища).

Эндогенная - вызывается представителями нормальной микрофлоры, условно-патагенной. Могут вызывать заболевание при снижении защитных сил организма.

Аутоинфекция - разновидность эндогенной инфекции, которая возникает в следствии смозаражения т.е. переноса возбудителя из одного места (носа, зева) в другое (рана на руке).

По локализации:

Очаговая (местная) - находится в определнном месте и возбудитель находится в определенном веществе (карбункул, фурункул, ангина)

Генерализованная инфекция - инфекция при котором возбудитель из первичного очага попадает лимфогенным или гематогенным путем и распространяется по всем органам и тканям. Разновидности:

Ø  Сактериоэмия (попадание в кровь), разносится по организму, но в крови не размножается, только в очаге.

Ø  Септицэмия попадание в крови и размножение в крови.

Ø  Септикопиэмия при ней возбудитель находится в крови, размножается в крови и попадает в органы создает там пиэмические очаги (печень, селезенка, легкие).

В зависимости от свойств главных участников

Абортивная - возбудитель попадает в организм, но не размножается там из за наличия хорошего иммунитета. Возбудитель в организме либо погибает либо выделяется. Клиника не наблюдается.

Латентная инфекция - возбудитель попадает, размножается, клиники нет (сифилис, ВИЧ, туберкулез).

Типичная инфекция - сопровождается наличием клинических симптомов болезни. Например: корь - высокая температура, сыпь.

Атипичная форма - отсутствие или неярковыраженность симптомов, нет типичных симптомов. Например корь: сипи нет.

Персистентная (хроническая) - характерна для многих заболеваний, длительность более 3 месяцев, характеризуется размножением возбудителя в организме, образованием антител невысокого титра, неяркой клинической картиной, отсутствием симптомов, характерна для определенных возбудителей (гепатит В, сифилис, стрептококковая инфекция может иметь и острую и хроническую инфекцию благодаря переходу в L-форму).

Медленная инфекция - выделена в самостоятельную группу недавно. Примеры - ВИЧ (и.п несколько недель, клиники нет несколько лет), прионовые болезни, лепра (проказа) - инкубационный период может несколько лет.

Бактерионосительство - такая форма инфекционного процесса при котором нет клинических проявлений, но возбудитель находится, размножается, выделяется из организма с патологическим материалом и человек становится источником заражения для своего окружения. Может развиться после перенесенного заболевания.

По количеству возбудителей:

Моноинфекция - одним возбудителем

Миксинфекции - двумя или несколькими возбудителями

Вторичная инфекция - процеес при котором к уже инфекции присоединяется еще один возбудитель. Например первая инфекция грипп, а к нему присоединяются стафилококки, стрептококки.

Реинфекция - повторное заражение тем же возбудителем, после перенесенной инфекции при которой иммунитет не сформировался. Например: гонорея, сифилис, ВИЧ.

Суперинфекция - повторное заражение тем же самым возбудителем в острый период болезни, когда иммунная система еще не отреагировала. Протекает тяжело. Может наблюдаться и при одновременном попадании большой дозы одного возбудителя при первичном поступлении (дизентерия, гонококк)

Рецидив - такая форма процесса для которой характерен возврат клинических проявлений болезни без повторного заражения. Рецидив связан с активацией возбудителя (брюшной тиф, малярия)

Периоды инфекционного процесса.

1.      Инкубационный - период который начинается от момента поступления микроорганизма в организм. В зависимости от биосвойств возбудителя разный. Дизентерия 1-3 дня, грипп от нескольких часов до суток. В этот период происходит адаптация и размножение возбудителя. Пациент не заразен (исключение: гепатит А, В, ВИЧ, сифилис, полимеилит). В сыворотке больного антител нет, иммунная система еще не отреагировала.

2.      Продромальный - период предвестников. Занимает по времени от нескольких часов до нескольких дней. Период первых клинических проявлений болезни - температура, головная боль, бессонница, озноб, но типичных симптомов в этот период еще нет. Возбудитель массивно выделяется в окружающую среду. Пациент максимально заразен.

.        Разгар болезни - выраженные клинические специфические признаки болезни (корь - высыпание, ветрянка - пузырьки). Возбудитель накопился и идет ответная реакция организма, есть антитела. Возбудитель массивно выделяется в окружающую среду. Пациент максимально заразен.

.        Период реконвалесценции - характеризуется снижением клинических проявления, заканчивается иммунологическая реакция, титр антител максимален. Возбудитель выделяется из организма. Происходит санация (освобождение организма от возбудителя).

Классификация микроорганизмов по способности вызывать инфекционный процесс.

Патогенные. Патогенность - способность микробов вызвать инфекционные процесс. Для проявления возбудитель должен попасть в чувствительный организм (человек - антропонозы, животное - зоонозный, животных и человека - антропозоонозы) т.о. это качественный, генотипический признак многих микроорганизмов.

Условнопатагенные

Сапрофитические

Факторы патогенности:

I. Фактор токсиногенности могут продуцировать экзотоксины и эндотоксины.

Экзотоксины - белки, термолябильны способны разрушаться инактивироваться при 60⁰ и выше, оказывают специфическое токсическое действие (дермотоксины, энтеротоксины, нейротоксины), могут оказывать токсическое действие нарушая проницаемость цитоплазматической мембраны (цитотоксины - гемолизины, лейкоцидины), связываясь с ферментами клетки и нарушая их функции (функциональные блокаторы - холероген (на аденилатциклазу энтероцитов → потеря клеткой жидкости→обезвоживание организма) тетаноспазмин - возбудитель столбняка → блокирует передачу нервных импульсов в мозге → поступает сигнал о сокращении мышц, а о расслаблении сигнал не идет), а также эксполиатины - влияют на процессы взаимодействия клеток между собой с ними связывают возникновение сыпи (эритрогенины - гиперемию кожи).

Экзотоксины являются мощными антигенами на них вырабатываются антитоксины, их можно обезвредить химическим путем добавляя 0,5% формалин 4 недели при 37⁰. Экзотоксины можно перевести в анатоксин (обезвреженный токсин).

Эндотоксины - оказывают свое токсическое действие только после гибели клетки (фагоцитоза, действия антибиотиков) липополисахаридная природа. Ядовитое действие, специфической выражено меньше, при введении в организм оказывают общее токсическое влияние (лихорадку, лейкопению, лейкоциоз, падении деятельности ССС, могут вызвать токсико-септический шок) слабоимуногенны, не являются антигенами из них нельзя получить анатоксины (они не обезвреживаются.

II. Фактор адгезии и колонизации. В качестве этого выступают пили, белки клеточной стенки, тейхоевые кислоты, белки лектины (приобретенные рецепторами белки)

III. Факторы угнетения фагоцитоза которые продуцируют микроорганизмы (капсулы, белки клеточной стенки (А-протеин) - экранируют клетку от фагоцитов).

IV. Факторы инвазии - позволяют микробам инвазироваться в ткани и распространятся по тканям. В их число входят феремнты которые продуцирует бактериальная клетка (гиалуронидаза - разрушает гиалуроновую кислоту клеточной стенки, нейрамидаза, ковулазы, лецитиназа, уреаза, декарбоксилаза, каталаза)

Внутриклеточные паразиты, мембранные паразиты оказывают свое патогенное действие нарушением метаболизма клетки и ее гибелью.

Эпидемиология инфекционного процесса.

Эпидемиология - изучают условие возникновения инфекционного процесса т.е. источник инфекции, пути передачи, механизмы передачи, а так же вопросы профилактики инфекционных заболеваний.

Источник инфекции - организм (человек, животное) больной соответствующим инфекционным заболеванием или бактерионоситель в котором происходит размножение, накопление организма и из которого он выделяется во внешнюю среду.

Механизм передачи - материал с которым выделяется возбудитель и ворота через которые он попадает в организм:

Ø  фекально-оральный реализуется через воду, пищу, контактно-бытовой (пути передачи) - дизентерия,

Ø  воздушно-капельный (воздушный, аспирационный, пылевой) - коклюш, ветряная оспа

Ø  контактный чаще венерические контакт между слизистыми, пути - половой, раневая инфекция

Ø  трансмиссивный - через кровь (сыпной тиф, малярия)

Интенсивность - эпидемическая форма (заболеваемость в сотни раз больше фона), пандемическая форма, спорадическая (заболеваемость в 10 раз больше фона).

По месту регистрации - убивитарный характер (везде), природно-очаговые

Карантинные инфекции - быстрое распространение, высокая контагеозность (существует международное соглашение по ним запрещает въезд и выезд из страны на время инфекции).

. Учение об иммунитете

Неспецифические факторы защиты организма.

Иммунитет - (от лат освобождение, избавление) способ защиты организма от генетически чужеродных агентов поступающих в организм из вне или образующихся внутри организма. Комплекс реакции организма направленный на поддержание и сохранения гомеостаза.

У позвоночных сформировалась иммунная система состоящая из лимфоидной ткани. Основные функции иммунной системы:

1.      Распознать поступающие из вне

2.      Различить свое от чужого

.        Обезвредить чужое

Иммунология наука, которая изучает способы и механизмы защиты организма от генетически чужеродных агентов, решает вопросы медицины, вопросы борьбы с инфекциями, онкологическими болезнями, аллергиями, аутоиммунными болезнями.

Иммунная система человека включает центральные орган иммунной системы - костный мозг, тимус и периферические органы - лимфатические узлы, селезенка, печень, лимфоидные скопления в тканях, кровь.

Различают два уровня защиты от чужеродной информации: естественный (врожденный), иммунный (приобретенный, лимфоцитарный).

Естественный иммунитет.

Обеспечиваются покровными тканями, микробоцитными экзосекретами (соляная кислота, слюна, ферменты кишечника, лизоцим), сосудистые реакции с цель не пропустить во внутреннюю среду чужеродные агенты (воспалительная реакция), фагоцитоз чужеродных агентов специальными клетками (нейтрофилы, макрофаги), система белков комплемента, естественные клетки киллеры, белки острой фазы воспаления (С-реактивный белок, манонсвязивающий лектин), продукция цитокинов (интерферонов, интерликинов, хемокинов), продукция липидных медиаторов (простогландинов, лецкотриенов), нормальная микрофлора (кожи, слизистых), продукция эндогенных пептидов (из 13-80 аминокислот которые синтезируются многими клетками и способны убивать бактерии).

Эти факторы можно различить на гуморальные факторы и клеточные факторы (фагоциты, естественные клетки киллеры).

Лизоцим (муранидаза) - белок открытый в 1909 году Лащенко в яичном белке, затем в слюне, слезах, молоке, молозиве, околоплодных водах, сыворотке крови.

Функция лизоцима: бактериоцилное, бактериостатическое действие особенно на Г+ при этом изменяется проницаемость ЭПС и наступает лизис клетки, стимуляция фагоцитоза - активирует комплимент, стимуляция синтеза антител. Противовоспалительный препарат. Синтезируется железистыми клетками слюнных, слезных желез. У собак его больше всего.

Лактоферрин железосодержащий транспортный белок, его эффект связан со способностью конкурировать за железо с бактериями, его много в грудном молоке, синтезируется гранулоцитами.

Лактопероксидаза проявляет свое действие вместе с перекесью водорода. Ее много в слюне.

Желчь, желчные кислоты,

Кислые секреты влагалища, простаты

Нормальная микрофлора - антагонист транзиторной микрофлоры, за счет продукции бактериоцинов, конкуренции. (Гнотобионты - стерильные организмы полученные искусственным путем. Гнотобиология - изучает физиологию гнотобионов. Эти исследования показали значение нормальной микрофлоры тела, у них не развивается иммунная система).

Гуморальные факторы:

Сывороточные факторы лейкотриены, эритрит, β-лизины, пропердин, комплемент.

Комплемент: сложный комплекс белков внутри которого выделяют более 20 фракций. 9 из 20 являются главными, многие фракции ферменты. В сыворотке крови находится в виде про-ферменты, процесс активации происходит 2-мя главными путями:

Классический - возникает когда в сыворотке появляется комплекс антиген (бактериальная клетка)-антитела (белок) активируется С₁→С₄→С₂→С₃→С_5-9 комплекс действует на мембрану бактериальной клетки и разрушает ее.

Альтернативный - возникает когда в сыворотке появляется липополисахаридный комплекс, эндотоксины бактерий, вирусы или комплекс Ag-IgA-IgE, первой активируется фракция С₃→С_5-9→разрушается мембрана→лизис клетки.

Свойства комплемента:

Ø  Термолябильность

Ø  Лизирование

Ø  Усиливает фагоцитоз

Ø  Участвует в иммунологических реакциях (РСК, РИЛ)

Ø  Участвует в реакциях воспаления

Ø  Участвует в аллергических реакциях

Цитокины - разнообразные вещества низкомолекулярные, которые продуцируются клетками лимфоидного ряда и служат имуномодуляторами, участвуют в воспалении, противоопухолевом иммунитете, аллергиях (обеспечивают взаимодействие клеток в иммунном ответе т.е. язык межклеточного взаимолейтсв). Цитокины - медиаторы локальных взаимодействий (в-ва которые действуют на саму клетку), а тк же паракринных дейтсвий, дистантных действий (их всего 4) они действуют через кровь можно сравнить с гормонами. Цитокины не депонируются в клетке, синтезируются по запросу, продукция транзиторная. мРНК которая отвечает за продукцию цитокинов короткоживущая, цитокины взаимосвязаны друг с другом т.е. их продукция и взаимосвязь между собой носит название цитокинового каскада (т.е. один запускает другой).

Классификация цитокинов:

По функциональным группам:

1.      Медиаторы доимунного воспаления, продуцируются клетками покровных тканей (тканевыми макрофагами, макрофагами слизистых оболочек):

Ø Туморнекротический фактор (TNFα)

Ø  Интерферон α, β (IFN)

Ø  Интерлейкин 1,6,12 (Il)

. Регуляции активации, пролиферации, продуцируют сами лимфоциты:

Ø  Т_сд4, Т_сд8

3. Регуляторы иммунного воспаления, продуцируют иммунные Т-лимфациты (киллеры, цитотоксические, антигенпрезинтирующие клетки) как бы нанимают общевоспалительные лимфоциты на деструкцию антигенов.

. Факторы роста клеток предшественников лимфопоэзы - клетки стромы КМ, активируют макрофаги: Il 3, 7, коллонийстиммулирующий фактор.

Биологические свойства цитокинов рассматривают в паре: цтокин - клетка мишень:

Ø  Цитокины гемопоэтины т.е. действуют с эритроцитами: эритропоэтин, интерлейкин 2,3,4,5; грануло-цито-моно-цитарный фактор, который активирует клетку выполнять свою функцию.

Ø  Интерфероны: INF α,β,γ - впервые они открыты как продукты которая продуцирует клетка инфицированная вирусом. Сам термин произошел от слов мешать репликации вирусов т.е защитное свойство клеток организма всех млекопитающих. Т. о. - своиство интерферонов - противовирусное.

INFγ - продуцируется лимфоцитами и носит название иммунного интерферона продуцируется Т-лимфоцитами основной биологический эффект - иммунный интерферон. Свое действие направляет против клеток опухолей, противовирусную направленность, главный биологический эффект "нанимает" макрофаги, Т-лимфоциты для выполнения деструктивных функции по отношении к опухоли и клетки зараженной вирусами.,

INFα - лейкоцитами противовирусное противоопухолевое действие.

INFβ-фибробластами - противоопухолевое, противовирусное. Механизма действие α и β - индукция транскрипции с гена продукты этой транскрипции подавляют репликацию вируса и редупликацию собственной ДНК на этом эффекте основано применение интерферонов для лечения вирусных и опухолевых заболеваний (лейкозы, гепатит С), но необходимо что бы на больных, клетках били рецепторы интерферонов.

Ø  Il - их много идут по номерам и каждый номер имеет биологический эффект на клетку мишень свою. Il - взаимодействуют с Т и В лимфоцитами ими же и продуцируются и служат для взаимодействия между собой и макрофагами. Il₁-продуцируетмя макрофагом, активируют Т-лимфоцит. Il₂-продуцирукется Т-хелперы, активирует В-лимфоцит.

Ø  Фактор некроза опухоли: продуцируется макрофагами, активированными нейтрофилами, нормальные киллеры, тучные клетки. Эффекты: локальное воспаление в тканях при внедрении патогенна направленное на то что бы не пустить патоген в системную циркуляцию. TNFα - активирует синтез → запускает печеночную клетку синтезировать белки отсрой фазы воспаление → активируют макрофаг для выполнения своей функции.

Применение цитокинов.

Для ауто-цито-кино-терапии проводится в случаях аллергических заболеваний (заблаговременно до наступления предполагаемой аллергии (сезон цветения растений) берут кровь и в период аллергии распыляют на с/о собственные цитокины), для геторо-цито-кино-терапии - используются цитокины полученные от животных (суперлимф - от свиней). Недостаточность в образовании цитокинов в организме сопровождает иммунологическую недостаточность → аллергии, аутоиммунное заболевание, течение инфекционного процесса тяжелее.

Клеточные факторы неспецифической защиты.

Клетки фагоцитоза делятся на макрофаги и микрофаги.

Макрофаги образуют систему мононуклеарных фагоцитирующих клеток, поскольку отличие не по величине.

Макрофаг - мононуклеарен, более активен чем мирофаг, бывают подвижные (в лимфе, крови) обладают выраженными хемотаксисом, легко мигрируют в очаг воспаления и там фагоцитируют, неподвижные (органы) могут иметь название: гистеоциты - соединительной ткани, Купферофские клетки, альвеолярные, перитониальные, микроглия и т.д. Выполняют следующие функции:

Ø  Фагоцитоз

Ø  Антигенпрезинтирующая клетка (АПК)- участвует в иммунном ответе

Ø  Секреторная функция - продукция цитокинов с помощью которых макрофаг взаимодействует с Т, В - лимфоцитами, комплементом и т. д.

Микрофаги - нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, нет функции АПК, фагоцитирую не столь активно.

Во всех включает фагоцитоз может быть завершенные и незавершенный - нет последней стадии (патоген не подвергся разрушению и перевариванию) и → патоген сохраняет свою жизнедеятельность, а в некоторых случаях патоген там размножается т. к. он имеет капсулы, белки инактивирующие работу ферментов фагоцитов. Характерен незавершенный ф для гонореи, тубркулеза, сифилиса, вирусных патогенов.

Усиливают фагоцитоз опсонины: комплемент, антитела, белки острой фазы воспаление, некоторые цитокины эти вещества опсонизируют антиген (бак клетки покрывают,. На антитела садятся, антиген обволакивает) опсонизированные антигне фагоцитируют более активно и делают фагоцитоз завершенным. Опсонины (от греч - подготавливаю в пище).

Нормальные киллеры (NK) - лимфоциты, нормальные лимфоциты не относятся к клеткам иммунной системы наделены киллерной функцией могут убить клетки собственного организма ставшими чужеродными → основная функция внутреннего надзора. Изменившаяся клетка ставшая чужеродной подвергаетниется киллерному действию. Основная функция - противоопухолевая. В норме этих клеток 15% от общих лимфоцитов. С возрастом их количество уменьшается.

Приобретенный иммунитет.

Виды:

По происходжениею

Ø  Естественный - после перенесенного заболевание

Ø  Искусственный после вакцинации.

Активный - выработка антител на аниген (может быть несколько месяцев, лет, пожизненно). Искусственно активный - на вакцину

Пассивный - поступление готовых антител (от матери к плоду), искусственный - в виде сывороточных препаратах (иммуноглобулины, иммунные сыворотки) продолжительность несколько месяцев, недель.

Антимикробный

Антипаразитический,

Противоопухолевый.

Антитоксический

Антивирусный

Трансплантационный

Стерильный - освобождение от возбудителя

Гуморальный - связан с образованием антител находящихся в секретах жидкости (лимфа, сыворотка) главной клеткой является В - лимфоцит. Хараткрен для бактериальный (столбняк), вирусный (корь, краснуха, ветрянка0

Клеточный - связан с образованием в организме клеток Т-киллеров, Т-цитотоксические работают вместе с макрофагами работают на элиминацию антигена. Главная клетка Т-лимфоцит. Характерен для вирусных заболеваний, и бактериальный (сифилис, туберкулез), паразитарных, грибковых, трансплантационный.

Клетки иммунной системы.

В-лимфоциты, Т-лимфоциты, макрофаги - имунокомпетентные клетки, взаимодействют с помощью цитокинов.

В-лимфоциты - внешне в и т лифоциты неотличимы. В лимфоциты происходят из стволовой клетки костного мозга и далее в костном мозге проходят все стадии дифференцировки и становятся зрелыми именно в костном мозге, а далее перемещается в В-зоны переферических иммунных органов. Поверхностные маркеры позволяют дифференцировать их. Рецепторы В лимфоцитов (ВсR) можно обнаружить с помощью моноклональных антител. В состав рецептора входит основной имуноглобулиновый рецептор (мембранный), рядом с ними есть ко-рецепторы - обеспечивающие кластер дифференцировку (sdr). В настоящее известны их более 150 (sd_19,21,81) номер завист от стадии дифференцировки.

Т-лимфоциты - на поверхности имеется Т-клеточный рецептор (TcR) включает SD-рецептры №4 для Т-хелперов, №8 - Т-киллеров. Образуются в костном мозге дифференцируются в переферических иммунных органах.

Иммунный ответ:

Включает стадии:

Ø  Распознование - макрофаг

Ø  Переработка антигена - макрофаг

Ø  Презентация антигена - макрофаг

По гуморальному типу:

Антиген→узнается макрофагом (с помощью интерлейкина 1)→представляется Т-хелперу (Т0 в Т2→который запускает В-лимфоцит→он пролифирируется, дифференцируется с помощью Il 5,10→превратится в плазматическую клетку→продуцирующую разные классы имуноглобулинов (G, A, M)→поступают во все жидкости.

По клеточному типу:

Антиген→узнается макрофагом→разрушается→представляется Тххелперу (Т0 в Т1)→превращается либо в Т-киллер, (под действием интерферонаγ)либо ЦТЛ:

Т-к→синтезирует транзины, перфорины→действуют на клетку мишень и нарушая проницаемость мембраны

ЦТЛ→действует вместе с макрофагом на клетку мишень.

Специфические формы иммунного ответа.

1.      Антителообразование

2.      Образование в организме Т-киллеров

.        Иммунный фогоцитоз

.        Развитее реакции гиперчувствительность замедленного типа

.        Развитее реакции гиперчувствительность немедленного типа

.        Иммунологическая память

.        Развитие иммунологической толерантности

Иммунный ответ: включает доимунное воспаление (в нем задействованы неспецифические факторы защиты → распознавание антигена лимфоцитами → деструкция антигена (в результате действия антител, иммунного воспаления, работы цитотоксических лимфоцитов иммунного фагоцитоза).

. Антигены. Общая характеристика свойства

микробиология бактерия резистентность антиген

Антитела. Строение, свойства, продукция.

Антигены.

Антигены - вещества генетически чужеродные для того организма куда они поступают, которые попав в организм вызывают разные формы иммунного ответа.

Основные свойства антигенов:

1.      Чужеродность при парентеральном введении

2.      Антигенность (специфичность)

.        Имунногеннность.

Чужеродность: лучше всего проявляется на белках, антигены всегда органические вещества. В структуре белковых молекул реализуется специфичность работы генома каждого организма, такие вещества как аминокислоты, моносахара, азотистые основания, простые соединения (химические элементы) имеют у всех организмов одинаковую структуру и антигенами не явояются. Есть сильные антигены - микробные экзотоксины, белки сыворотки крови и слабые антигены - желатин, гемоглобин, инсулин (антигенные свойства связаны с низкой молекулярности). Антигенность зависит так же от молекулярной массы. Чем больше различий в аминокислотной последовательности тем выше антигенные свойства. Например такие белки как гистоны, за 1,5 млрд лет в них произошли всего 2 аминокислотных замены.

Полисахариды антигенные свойства слабее, поэтому они, а также липо-поли-сахаридные комплексы проявляют антигенные свойства слабенько, но некоторые например моно, олиго сахара, липиды являются гаптенами т.е. неполноценными антигенами.

Полноценные антигены при введении в организм вызывают иммунный ответ и способны с антителами или Т-лимфоцитами взаимодействовать как in vivo так и in vitro. Им присуще 2 функции:

Ø Вызвать иммунный ответ

Ø  Способны вступить с ними в взаимодействие

Неполноценным антигенами присуще только способность вступать в взаимодействие и не способны вызвать образование антител. Гаптены легко соединяются с белками носителями и в таком виде становятся полноценными антигенами при этом их специфичность определяется молекулами гаптена, а белок выполняет роль носителя. Что бы превратить в гаптен в антиген надо присоединить белок.

Липиды, глицерины - являются гаптенами. Нуклеиновые кислоты - слабые антигены.

Антигенные свойства зависят от дозы, от метода введения и от жесткости его структуры (насколько устойчив к протеолитическим ферментам)

Антигенные совйства могут быть усилены если к антигену добавить адъювант - неорганические вещества (гидроксид алюминия, квасцы, липиды; синтетические - полиоксидон; органические - цитоксины). Адъюванты повышают антигенные свойства и усиливают иммунный ответ т.е. имунногеность.

Специфичность: ей обладают поверхностные структуры антигена и носят название активных центров (эпитопов) именно эти группы распознаются макрофагами, В-лимфоцитами и является активными центрами антигена. Количество этих групп разнообразное. Активные центры антигена определяют силу связи между антигеном и антителом т.е. определяю последнюю стадию иммунного ответа.

Среди гаптенов различают полугаптены - неорганические радикалы (йод, бром, азот, -ОН), которые присоединяясь к белковой молекуле могут изменять специфичность и они вызывают выработку антител, которые и располагаются на поверхности полного белкового антигена.

Проантигены - гаптены, которые соединяются с белками организма при введении парентерально и сенсибилизировать такой организм как аутоантиген. В качестве проантигена может выступить любой лекарственные препарат.

Классификация антигенов.

Ø  Видоспецифические

Ø  Типоспецифически

Ø  Группоспецифические

Ø  Общие антигены

Ø  Гетероантигены

Микробные антигены

Сосредоточены в клеточной стенке: белки определяют группу О-соматически антигенов (термостабилен) может иметь липополисахаридную природу, поверхносные белки группу К-антигенов, типоспецифичные. Жгутики - Н-антигены это белок флагелин (термолябилен). Экзотоксины так же антигены, эксоферменты (плазмокоагулаза).

Например: E. Coli О₁₁₁, К₅₆ (род, вид, тип (111,56) - серовар, типоспецифический антиген). S. Typhy О₉ (т.е. относится к группе Д). Есть общие антигены внутри семейства, но всегда есть видовые и сероварные антигены изучая антигенную структуру можно идентифицировать бактерии.

Гетероантигены: общие антигены между бактериями и другими биологическими объектами например: человек - сифилитическая трепонема. Второе их название перекреснореагирующие антигены (ПРА) способны реагировать с антителами поэтому антитела на трепонему могут реагировать с тканями и запускать аутоиммунный процесс.

Антигены вирусов.

Нуклеиновая кислота вместе с капсидными белками у простых вирусов. У сложных вирусов есть еще суперкапсид и на поверхности этой оболочки есть липротеиновые антигены (обозначаются цифрами). Например у гриппа: имеет нейроамидазный антиген (около 5), Н₁, Н₅(птичий грипп). С помощью них вирус адсорбируется на поверхности эритроцитов и склеивает их, нейроамидазный адсорбируется на мембранах клеткок. По антигенным свойствам можно идентифицировать вирусы.

Антигены тела человека.

Изоантигены (индивидуальные антигены). Представлены на различных органах.

Эритроцитарная система (АВО, Rh) - по ним делят на группы крови и резусы. Их более 70, но практически используются только АВО и резус.

В большей степени изоантигены изучены на лейкоцитах т. о образуется система гистсовместимости по индивидуальным тканевым антигенам (Мaior Нistocompa Tibiliti Сomplex) или НLA. Совместимость по этой системе проводится в случае пересадки органов и костного мозга, Эти антигене генетически детерминированы, сцепеленны с генами иммунного ответа. МНТС разделены на 3 класса:

1.      Предствалены на поверхности всех ядер клеток нашего организма

2.      Представлены на поверхности имунокомпетентнык клеток

.        Представлены на белках системы комплемента

Функции:

класс позволяет разделять свое от чужого, 2 класс участвует в двойном распознавании антигена, могут усилить иммунные ответ, заставить клетку дифференцироваться.

Врачи еще различают опухолеспецифические антигены, эмбриональные антигены, маркерные опухолевые, трансплантационные антигены (сингенные - собственные, однояйцевых близнецов, чистых линий животных, аллогенные - взяты от другого человека, другой линии животных, ксеногенные - взятые от другого биологического вида(например человеку лимфоциты свиней)).

Антитела.

Имуноглобудины, γ-глобулины - синонимы антител.

Антитела - специфические белки синтезируемые в организме в ответ на поступление антигена находятся в сыворотке крови и находятся в γ-глобулиной фракции сыворотки крови. Составляют основу гуморального иммунитета. Приблизительно в сыворотки крови человека γ-глобулиновая фракция составляет 20%.

Строение антител: молекула Ig- состоит из двух идентичных, тяжелых цепей Н и 2-х легких L цепей которые соединяются между собой дисульфидными мостиками. Структурной единицей Ig являетмся мономер состоящий из 2 Н и 2 L цепей. Среди него различают вариабельную часть и константную часть. Вариабельная часть Н и L цепей составляют фаг-фрагмент к которому присоединяется антиген (2 штуки) специфичность этой связи носит название аффиности антитела, скорость и прочность связи определяет авидность. Константный фрагмен - отвечает за неспецифические функции антител: связь с комплементом, связь с фагоцитами, тучными клетками. В зависимости от структуры строение, формы Н-цепей различают 5 классов Ig:

1.      IgM -

2.      IgG

3.      IgA

4.      IgE

5.      IgD

Таблица

	IgM	IgG	IgA	IgE	IgD
Молекулярная масса	900	160	160-400
Количество мономеров	5	1	2
Валентность	10	2	4
Прохождение ч/плаценту	-	+	±
Константа седиментации	19S	7S
Функции	Участвуют в агглютинации, преципитации, активации, опсанизации, антибактериальная активность, нейтрализуют токсины	То же

 - бывают 2 варианта: сывороточные и секреторные, продуцируются клетками эпителия кишечника. Секторные это диметры есть компонент который защищает его от секретов пищеварительного сока, слюны, они обеспечивают местный иммунитет слизистых оболочек.

IgE - свидетели аллергических реакций, в сыворотке крови появляются при аллергических реакциях немедленного типа, взаимодействуют с тучными клетками и заставляют продуцировать гистамин, что определяет аллергии немедленного типа (крапивница, анафилаксия).

IgD - мономеры, склонны к агрегации, продуцируются зрелыми В-лимфоцитами к 10 годам появляются при аутоиммунной патологии, беременности.

Свойства антител.

Нормальные антитела - естественные антитела которые присутствуют в любой сыворотке человека, животного и дают базальный уровень иммуноглобулинов: антиэритроцитарные антитела, противобактериальные. Эти антитела постоянны в организме, дополнительной антигенной стимуляции не требуется все перечисленные микроорганизмы постоянно контактируются с человеком.

Моноклональные антитела - это антитела к одной антигенной детерминанте они принадлежат к одному классу, подклассу аллотипу имеют один вид легких цепей, имеют одинаковую аффиность поскольку моноклональные антитела образуются одним клоном В-лимфоцитов и поэтому эти антитела гомогенные, когда иммунизируют человека вакцинным препаратов или после болезни в сыворотке человека появляется антитела к разным антигенным детерминантам. И поэтому иммунные сыворотки от переболевших или иммунизированных гетерогенны. Гетерогенность антител снижает чувствительность методов индикации антигенов с помощью сывороток.

Получают моноклональные тела методом in vivo гибридом разработанным в 1975 году Келлером и Мильштейном (Нобелевская премия). Суть получение антител этим методом состоит в следующем:

1.      этап: Получение гибридому и отбор клеток. Мышь иммунизируют антигеном, после иммунизации берут селезенку и получают из нее лимфоциты, которые должны превращаться в плазматическую клетку продуцирующие антитела. Другую мышь (Balb C) с плазмоцитомой (опухолевый процесс поражающий селезенку) в органах этой мыши есть опухолевая плазматическая клетка, которую совмещают с нормальными клетками от здоровой мыши в присутствии полиэтиленгликоля, которые помогают гибридизации. Получившиеся клетки отбирают на селективной среде - ГАТ (гипоксантин - аминоптерин - тинидин) в этой среде погибнут нормальные клетки, опухолевые клетки, а гибридомные выживут и будут расти.

2.      этап: Отбор клеток нужных продуцентов. Проводится методом тестирования на искомые антитела. Делают с помощью иммунологических реакций ИФА, РИФ, пластинки с имобилизированным антигеном

.        этап: Клонирование гибридомных клеток много раз на специальной питательной среде.

.        этап: Консервирование - сипользуют низкие температуры

.        этап: Получение моноклональных антител. Гибридломные клетки вводят внутрибрюшинно белым мышам (здоровым) они там размножаются у них возникает асцит в котором содержится много моноклональных антител.

Второй метод: размножение гибридомных антител на культуре и они там продуцируют антитела (in vitro).

Моноклональные антитела получены к антигенным детерминантам Т (СД4) и В-лимфоцитов. МКА используются для идентификации Т и В - лимфоцитов и их субпопуляции, которые определяют активность, продукцию лимфокина. МКА получены для идентификации цитокинов в сыворотке, ВИЧ-вируса, для диагностики определяют антигенные детерминанты вещества. МКА используют в онкологии для терапии опухолевых заболеваний. МКА для таксономических идентификаций.

В последнии годы гибридому культивируют с помощью аппарата цитостат куда подается питательная среда и гибридомность поддерживается автоматически → большое количество генетически гомогенных антител.

Полные и неполные антитела: Деление основано на способности полных антител образовывать в результате иммунологической реакции с антигеном комплекс видимый невооруженным глазом (агглютинация) при преципитации этот комплекс называется преципитат (т.е. аморфный осадок). У полного антитела имеетя две и более валентности (активных центров) и взаимодействия с антителом образует решетку. (IgM, IgG, IgA) Неполное антитело моновалентное и взаимодействуя с антителом связывает одну детерминанту и этот комплекс мы не видим поэтому они еще называются блокирующими антителами. Поэтому для выявления неполных антител требуется специальный метод Кумбса при котором используются вторичные антитела, и оно садится на первичное антитело и тогда этот антиген свяжется в макроагрегат.

Комплимент связывающие несвязывающие антитела. Связывающие взаимодействуют с комплментом с помощью FС-фрагменту и дальше идет реакция связывания комплемента. Несвязывающие не взамодействуют с комплементом.

Антитела абзимы - абзимология (антитела ферменты), катализаторы биохимических процессов. У мноих Ig есть ферментативная активность (протеазная, нуклеазная). Есть антитела ферменты и на другие разновидности веществ. Считают что эти свойства антител очень древние.

Бифункциональные антитела: обладают две специфичности фаг-фрагментов т.е могут присоединять два антигена разной специфичности.

Имунотоксины: гибрид молекулы Ig с токсином. Эти антитела получают методом биотехнологии. Присоединяя к Ig молекулу токсина такое антитело способно направленно доставить токсин к клетке мишени (опухолевой) и нарушить метаболизм этой клетки. Используют в лечении опухолей, аллергий.

Антигенные свойства антител.

Само антитело любой специфичности наделен антигенными свойствами и поэтому в молекуле Ig различают четыре антигенных детерминанты: видовые, изотипические, аллотипичесике и идеотипические.

Видовые: характерны для Ig всех особей. Определяются строением легких и тяжелых цепей.

Изотипические: являются групповыми и служат для дифференцировки иммуноглобулина на 5 классов (M, G, A, D, E) и множества подклассов G и А имеет подклассы. Локализуются детерминанты в тяжелых цепях.

Аллотипические: Являются индивидуальными присущими конкретному оргназму, они располагаются в легких и тяжелых полипептидных цепях и на основании их можно различить особи одного вида.

Идеотипические: располагаются в активных центрах. Обнаружение этого антитела послужило основание для создания теории антиидеотипа, которая лежит в основе регуляции биосинтеза антител. Этот антиген обладает регуляторными свойствами (когда идеотипов много→много антиидеотипа→прекращается синтез антител).

Основные свойства антител можно разделить на прямые эффекты (эффеторные свойства) т.е. способно нейтрализовать антиген, оказать ферментативное действие, IG является маркером антигена, эффекторные свойства направлены на участие или кооперативное действие антитела с фагоцитами, комплементами, с помощью этих взаимодействия и осуществляется прямое действие.

Непрямое действие связано с активацией комплемента, индукцией иммунного фагоцитоза и антителозависимой клеточная цито токсичность.

Генетика антител.

Образованию антител присуще своеобразное гентичекое кодирование. Структура кодируется ни одним геном, а большим числом генов эти гены находятся в фрагментарном состоянии которые располагаются в трех различных хромосомах и располагаются независимо. Молекулярно-генетическая теория происхождениея разработана Тонегавой 1983 году и основа этой теории состоят в следующем:

1.      Лимфогенез в нашем организме идет непрерывно

2.      В пределах одного оргнаизма существует или может возникнуть В-лимфоциты специфичные практически к любому антигену

.        Дифференцировка В-лимфоцитов возникает в результате первичного иммунного ответа, идет непреавно с размножением и одновременно дифференцировка сопроваждается перестройками в впередалх имуноглобулиовых генов этот процесс сопровождается последовательной сменой классов иммуноглобулинов. На первом этаме образуются IgМ, а потом на позних стадиях этот же В-лимфоцит продуцирует IgG этой же специфичности. Попутно идут точечные перестройки иммуноглобулина что привдит к тому что на повенрхности иммуноглобулина появляются специфические реценторы. Результат: рекомбинация генов иммунного ответа.

Динамика антитела продукции.

Выделяют латентную фазу: переработка антигена и представление его имунокомпетентной клетке→ пролиферация специфического клона клеток антител. Титры антител не появляются (3-5 дней).

Логарифмическая фаза: увеличение В-лимфоцитов которые пролиферируют и распространяют антитела (титр растет, 7 - 9 день).

Стационарная фаза максимальный уровень антител в крови 20-30 день

Первичный иммунные ответ. Снижение антител 2-4 месяц, образование иммунного ответа, образование IgM, D. В конце может быть в сыворотке Ig G, A т к наступает переключение синтеза в следствии образуются клоны В-лимфоцитов специфичные для конкретного антигена и образуются В-лимфоцита памяти. Повторный контакт приведет к образованию вторичного иммунного ответа.

Вторичный иммунный ответ: коротка латентная фаза равна я1-2 дням, высокий титр антител только IgG. В-лимфоцитов память будет больше.

Это используется в практике: вакцинация которая включает первичную вакцинацию и обязательную ревакцинацию. Получение иммунных сывороток.

Иммунологическая память - способность организма при повторной встрече с антигеном реагировать более активно (вторичный иммунный ответ), сохраняется годами за счет образование В-лимфоцита. ИП характрна как и для гуморального так и для клеточного иммунитета. Эти используется в вакцинации.

Иммунологическая толерантность (ареактивность) - форма иммунного ответа противоположная имуногогической памяти, отсутствие иммунного ответа на повторную встречу с антигеном. Бывает врожденной (отсутствие иммунной реакции на собственные антигены), приобретенной (после введения препаратов имунодепресантов снижающих иммунный ответ или введение в эмбриональном периоде, когда иммунная система еще не функционирует. ИТ была открыта в 1953 году Медаваром и Гашеком (Нобелевская премия). Механизм не расшифрован, нос считают связан с :

1.      Элиминацией клонов лимфоидных клеток реагирующих на антиген. Разрушение клона идет за счет апоптоза.

2. Блокада рецепторов В и Т клеток

3.      Быстрое связывание антигена и выведение его из организма.

Антиген который вызывает ИТ - толероген это чаще всего полисахарид, способны сохранятся. Явление ИТ используется для решения таких проблем как пересадка органов и тканей за счет облучение организма, приема имунодепресантов, для лечения аутоиммунных реакций, аллергической патологии и других состояний.

. Имунопаталогия

1.      Аллергические реакции

2.      Аутоиммунные процесс

.        Иммунодефициты

Аллергические реакции. Термин Аллергия был введен в 1906 году Пирке для обозначение состояний повышенной реактивности у детей, которую он наблюдал иногда при некоторых инфекционных процессв. Allos-другой, Ergos - действуя. А одна из форм иммунного ответа при которой формируется повышенная чувствительность к антигенам аллергенам.

Первая доза аллергена называется сенсибилизирующей. Вторая доза - разрешающей именно при ней возникает неадекватна реакция иммунной системы. Аллергия как и все формы иммунного ответа характеризуется скрытым периодом, высокой специфичностью на определенные аллергены, а так же появление м накоплением в организме антител или Т-лимфоцитов.

Механизмы можно разделить на до имунные механизма и эффекторные механизмы. Эффекторные механизмы не имеют защитного значения они патофизиологической аллергию рассматривают как форму патологии.

Аллергены - антигены способные вызвать аллергические реакции. Любой антиген может быть аллергеном. Аллергены физическими и химическими свойствами могут отличать от антигенов: меньше молекулярная масса, хорошо диффундируют через неповрежденные кожные и слизистые. Хорош растворимы, легко проникают в жидкости организма, химически стабильны. Проявляют действие в маленьких дозах. Легко вступают в химические связи с белками организма.

Чаще всего аллергенами бывают гаптены, полугаптены, которые приобретают антигенные свойства при взаимодействии с белками.

Экзогенны бытовые, эпидермальные, пыльцевые антигены, химические, косметические, пищевые аллергены, микробные антигены, вакцины.

Эндогенные аллергены: собственные ткани организма (ткани забарьерных органов) выступает как аутоаллерген - мозг, щитовидная железа, яичко, ткани измененные в результате патологических болезней, собственна микрофлора организма.

Общий механизм аллергических реакций.

Сводится к стадиям:

1.      Иммунологическая - происходит встреча аллергена с клетками и мунной системы и в ответ на первую встречу вырабатываются либо антитела (А, Е, G) либо Т-хелперы₁

2.      Патохимическая - развивается на вторую дозу (разрешающую) сопроваждается выделением биологически активных веществ - цитокинов.

.        Патофихзиологическая - происходит взаимодействия антигена с антителами или Т-хелперами₁ это взаимолдействие сопроваждается нарушением различных функций орагнов и тканей.

В 1930 году Р. Кук разделил аллергии на 2 типа: гиперчуствительность немедленного типа, гиперчуствительность замедленного типа. Первая развивтаеся через 30 минут после повторного введение антигена, вторая спусть 48-72 часа.

год Джелл и Кумбс в зависимости от патофизиологической фазы патофизиологической реакции классифицировали на 4 типа: Первые три носят гуморальный характер, связан с антителами, возможен пассивный перенос с сывороткой

Четвертый связан с образованием Т-хелперов₁ носит клеточный характер пассивный перенос с сывороткой невозможен.

. Реагиновый (анафилактический) - при первичном контакте с антигеном (в растворимой форме) образуются IgE (реагины) особенностью этих иммуноглобулинов является тропность к тучным клеткам, своим ФЦ фрагментом способны адсорбироваться на рецепторах тучных клеток. Такие же рецепторы есть и на базофилах и в таком виде эти антитела на тучных клетках сидят до тех пор пока не поступит антиген второй раз. Повторное введение антигена вызывает образование комплекса антиген-антигело сидящее на тучной клетке это сопровождается активацией тучных клеток и базофилов и активация тучных клеток сопровождается выбросом из тучных клеток вазоактивных веществ - гепарин, гистамин, лейкотриены, простогландины, ферменты (триптаза, химаза, катепсин), цитокины. Все эти вещества обеспечивают клинические проявления реагиновой реакции - спазмы гладкой мускулатуры бронхов, ЖКТ, ослабление сердечной деятельности, колляптоидное состояние, вызывают отек, повышение сосудистой проницаемости, зуд и др.

Примеры: реакции анафилаксии (шок), крапивница, отек Квинке (отек гортани, подкожной ткани, одышка), поллиноз (сенная лихорадка - аллергия к пыльце) - риниты, конъюнктивиты, бронхоспазмы; бронхиальная астма - воспаление, бронхоспазм, усиление секреции слизи в бронхах; пищевая - тошнота, диарея, сыпь, зуд. Все это входит в группу атопических болезней. Атопия - наследственная предрасположенность к развитию гиперчувствительности немедленного типа обусловленная повышенной выработкой IgE, повышенной проницаемостью тканевых барьеров.

Лабораторная диагностика: определение в крови больного иммуноглобулина класса Е, общих иммуноглобулинов и IgЕ специфических, определение уровня гистамина, триптазы, интерлейкинов. У больных поллинозом в мазках из носа определяют количество эозинофилов от 10 до 100% в норме 2%. Эозинофилия в крови. Кожные тесты - внутрикожное введение антигена и учет реакции через 15-20 минут (положительная реакция появление волдыря)

. Цитотоксический - развивается в ответ на повторное поступление как эндогенных аллергенов (аутоантигены) и на экзогенные аллергены (лекарственные препараты, химические косметические вещества, гаптены). Особенностью аллергенов является способность прикрепляться к мембранам клеток. В основе этой аллергии антитела класса G и комплемент, макрофаги, нормальные клетки киллеры. Время развитие реакции минуты, часы. Разновидности: цитолиз клетки к которой прикрепился антиген, котрые вызывает антитела с комплиментом; иммунный фагоцитоз клетки на которой сидит аллерген с антителом; антителозависимая клеточная цитотоксичность здесь участвуют клетки киллеры вместе с антителами и тогда нормальные клетки киллеры начинают продуцировать перфорины, кранзимы которые способны нарушить проницаемость клеточной мембраны и способны вызвать гибель клетки.

Клинические проявления: соответствуют некоторым аутоиммунным болезням - злокачественная миостения (аутоантиген ацетилхолин)- мышечная слабость, образуются аутоантитела против рецептора ацетилхолина и они адсорбируют на клетках мышц → мышечная слабость, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный гипертиреоидизм, лекарственная анемия, тромбоцитопения.

Лабораторная диагностика: определение противотканевых антител методом ИФА. Определение с помощью РИФ наличие антител и комплементов поврежденных участков.

. Имунокомплексный - основан на образовании в организме пациента иммунологического комплекса антиге-антитело, который соединяется с комплементом и циркулируют в крови и имеет склонность откладываться, фиксироваться на базальных мембран эндотелия кровеносных сосудов. В качестве антитела выступают IgG, IgM, базальные мембраны сосудов имеют рецепторы для ФЦ фрагмента иммуноглобулина и поэтому это комплексы способны прикрепляется к эндотелию сосудов, что позволяет прикрепится к стенке, агрегировать тромбоциты, активно фагоцитировать.

По этому типу развиваются следующие патологии: сывороточная болезнь - развивается при введении сывороточных препаратов содержащих антитела (в качестве антигенов белки сыворотки) например лошадиные антитоксические сыворотки или при введении нормальной плазмы крови при большой кровопотери т.е. белковые препараты. Во всех случаях на первое введение образуются антитела IgG, которые при повторном поступлении белка связываются с этим белком и образуется комплекс антиген антитело к которому присоединяется антиген и дальше этот комплекс начинает циркулировать в крови и откладываться на базальных мембранах кровеносных сосудов развиваются васкулиты, нефриты, гиперемии, зуд. Сывороточная болезнь начинается на второй неделе после введение препаратов, системная красная волчанка, нефрит. В качестве аллергена выступают бактерии. Вирусы, паразиты, грибы или эндогенные аллергены.

Лабораторная диагностика: обнаружение циркулирующих иммунных комплексов, определение биоптатов тканей для выявление отложений с помощью РИФ

. Клеточно-опосредованный - проявляется после проникновения антигена в разрешающей дозе через 48-72 часа, специфические антитела в сыворотке отсутствуют на антиген, состояние нельзя передать пассивно с сывороткой. В основе ГЗТ Т-хелпер₁ и макрофаги, десенсибилизация невозможна. ГЗТ лежит в основе многих инфекционных заболеваний (туберкулез, сифилис, бруцеллез, туляремия, сальмонеллез, борелиозы, микозы, паразитозы, герпес) аллергеном выступают сами микроорганизмы. Аллергия такого типа лежит в основе реакции отторжения трансплантанта, противоопухолевого иммунитета, в ответ на вакцинацию некоторых живых вакцин (БЦЖ, туляремийную вакцину) на введение лекарственных препаратов, косметических препаратов, которые при попадании в организм соединяются с белками ткани образуя полноценный антиген на который развивается ГЗТ.

Различают три формы ГЗТ:

1.      Контактная - 48-72 часа, отвечают за нее Т-лимфоциты воспаления, макрофаги. Клинические проявления экзема, отек. Аллерген может быть: химические вещества, косметические вещества, лекарственные препараты.

2.      Туберкулиновая - в качестве аллергена туберкулин (полученный из микобактерий туберкулина), развивается на введения бруцелина, тулерина развитие 48-72 часа отвечают за нее Т-хелмеры₁, макрофаги. Клинически проявления: местные проявления. Выявить можно с помощью реакции манту (обнаруживая папулу).

.        Гранулематозная: развивается в течении 3-4 недель. Отвечают за нее макрофаги, эпителиоидные клетки соединительной ткани, гигантские клетки, Т-хелперы₁ (на первой неделе). Клинические проявление - образование гранулемы (уплотнения).

Во все случаях ГЗТ носит защитный характер и направлена на отграничение возбудителя от проникновения и распространения в другие ткани и органы. В воспалительном инфильтрате будут активно работать макрофаги и Т-хелперы воспаления, которые будут продуцировать интерлейкины, цитокины, γ-интерферон, фактор МИФ, должны работать макрофаги.

Лабораторная диагностика: внутрикожная проба с аллергеном - туберкулин 0,1 мл в котором 5 туберкулиновых единиц внутрикожно ч/з 72 часа определяют диаметр папулы (более 5 мм реакция +), тулярин, флюитин, антроксин. Эти пробы диагностическе т.к. позваляют выявить инфекционную аллергию сопровождающую заболевание; гистологическое изучение.

Имунодифициты.

И- морфологическая и функциональная недостаточность органов (маленький вес, недоразвие) и клеток иммунной системы (мало клеток, несбалансированность).

Имунодифициты делят на врожденные (наследственные этиология - дефект генов иммунного ответа). Различают дефекты Т и В звена иммунитета и комбинированные дефекты. Частота 1 на 10 000-100 000 новорожденных. Дефицит по иммуноглобулину А 1 на 500-1000. Главный первичный симптом состоит в частоте инфекционных заболеванию у таких детей. Подозрение возникают у врача когда ребенок болеет более 10 раз за год. У детей с ПИД инфекционное залевание может иметь персистирующий характер. При обследовании таких детей определяется уменьшение лимфатических узлов, отсутствуют миндалины, чаще регистрируют отиты, диареи, кандидозы, синуситы.

Классификация ПИД:

1.      Дефицит антител - агаммаглобилемия Брутона при данном забелвани нет В-лимфоциов, в сыворотке нет IgM, A нет G мало, Т-лимфоцитов норма. На вакцинные препараты антител нет.

2.      Синдромы с дефицитом Т-клеткок. Носит фатальных характер, детей нельзя иммунизировать живыми вакцинами, клиническая картина - на живые вакцины развернутая клиническая картина заболевания. Заболевания модет возникнуть из за нарушение гена → дефект аденазиндезаминазы.

.        Синдром голых лимфоцитов - на мембране лимфоцитов не будут образовываться рецепторы. У таких пациентов отсутсвуют СД _{8 - 4} , нет рецепторов для комплекса гистосовместимости, такеи лимфоциты не способны для кооперативного изменения в ответе.

.        Синдром Ди Джорджи - комбинированный порок развития тимуса - гипоплазия, аплазия. Клинические проявления - инфекции, гипокальцемия, тетания, кардиоваскулярные пороки.

.        Атоксия телеангиоэктазия - появляется на коже, слизистых телеангиоэктазы (сосудистые звездочки) снижел уровень иммуноглобулинов (А,Е,G). Связано состояние с мутацией в гене АТМ, сопровождается развитием новообразований.

6.      Иммунодефицит с дефектами фагоцитов - хроническая гранулематозная болзнь. Фагоциты могут окружать патоген, но переварит его не могут/вторичные (приобретионные) -СПИД, ожеговая болзнь, психическеи заболевнаия, химические вещества, радиация, плохая экод=логия. Человек может с ними жить.

ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ.

Возбудители гнойно-воспалительных болезней.

Стафилококки, стрептококки, энтеробактерии, песевдоманады, анаэробы: бактероиды, грибы. Большинство возбудителей гойно-воспалительных заболеваний входят в группу условно-патагенных микроорганизмов. Широко распространены среди людей обитают на коже, слизистых входят в состав нормальной микрофлоры.

Условия развития гнойно-воспалительных болезней:

1.      Снижение резистентности организма

2.      Период новорожденности

.        Попадание большой дозы возбудителя

.        Попадание условно-патагенных микроорганизмов в необычный эфитоп (при операции, при медицинском обследовании и др.)

Распространению внутрибольничных инфекций (ВБИ) большая роль отводится гнойно-воспалительным инфекциям. Способствует нарушение санитарного режима. Нарушение правил асептики, антисептики. Неэффективная дезинфекция, не эффективная стерилизация.

Госпитальная инфекция - группа гнойно-воспалительных заболеваний, которая развивается спустя 48 часков от момента поступления пациента в стационар или получения медицинской процедуры. ГИ регистрируется и среди медицинского персонала.

Особенности диагностики ВБИ:

1.      Разнообразный материал из которого можно выделить возбудители (гной, кровь, моча, мокрота, слизь)

2.      Бактериологическое исследование - посев с подсчетом микроорганизмов т.к. возбудители входят в состав нормальной микрофлоры

.        Определение нарастания титра антител в сыворотке больного

.        Это в основном смешанные инфекции

.        Носят гнойно-воспалительный характер

.        Возбудители хорошо сохраняются в окружающей среде, на предметах обихода, в лекарствах → являются санитарно-показательными микроорганизмами для оценки микробиологической частоты.

Кокки.

Входят в 2 больших семейства: микрокакации, стрептокакации. В семействе микрокакации, род стафилаккокос, стоматококкус, микрококус. Семейство стептококации рода стрептококус. Микрококки отличаются от срептококов отличаются прежде всего расположение кокков в препарате: микро-без порядочно, степто-в цепочке. Микрококки - каталаза +, стептококки - каталаза -

Род Stahhylococcus.

Количество видов внутри стафилококков 27 и более, самыми главными являются aureus (патогенный) , epidermiyis, saprophyticus (условнопатогенные), gominis, capiticus. Из 27 - 14 обнаружены на коже и слизистых человека.

Общая характеристика стафилококков: широко распространенные организмы, выделяются при гнойных поражениях, изучены Пастером. Небольших размеров, располагаются в мазках, при посеве гроздевидные, неподвижны спор нет, факультативные анаэробы. Культуруальные свойства: легко культивируютна на простых средах, для их дифференциации используются элективные питательные среды (с высоким содержанием NaCl) - ЖСА, продукция пигментов - белый, желтый, золотистый. На жидких средах диффузный рост, оптимальная температура роста 30-37 градусов. Биохимические свойства: ферментирую сахара до кислоты без газа, индол не образуют, уреазу - образуют желатин разжижают.

Факторы патогенности:

1.      Токсинообразование

Ø  Гемотоксины,

Ø  Термотоксины,

Ø  Лейкоцидины

Ø  Экзотоксины вызывающие синдром токсического шока

2.      Образование ферментов

Ø  Коогулазы у золотистого, у остальных нет

Ø  ДНК-аза

Ø  Лецитиназа

Ø  Протеиназа

3.      Факторы адгезии -связывают иммуноглобулина за счет Fc-фрагмента

4.      Антифагоцитарные факторы

Ø  Протеин клеточной стенки

Ø  Пептидогликан

Ø  Микрокапсула

5.      Антигенные свойства - не изучены, но выделено более 50

Дифференцировка aureus от epidermiyis, saprophyticus

	aureus	epidermiyis	saprophyticus
Плазмокоагулаза	+	-	-
Гемотоксин (токсинообразование)	+	-	-
Ферментация манита в анаэробных условиях	+	-	+
Лецитиназа и другие факторы патогенности	+	-	-
Продукция пигментов	золотистый	бурый	белый
Патогенность (ДНК-аза, фибринолизин, гиалуронидаза)	+	-	-
Отношение к нововиоцину (а/б)	S	S	R

Основные заболевания вызывающиеся стафилококками:

Ø  Поражение кожи и клетчатки: фурункулы, карбункулы, пиодермия, флегмона

Ø  Поражение слизистых оболочек: синуситы, фронтиты, бронхиты, пневмонии, отиты, циститы, холециститы

Ø  Пищевые токсикоинфекции: связаны со штаммами стафилококков продуцирующих энтеротоксин

Ø  Остеомиелиты, менингиты

Ø  Стафилококковые бактериемии, стафилококковый сепсис, эндокардиты

Ø  Раневая инфекция, послеоперационная инфекция

Группы риска:

Ø  Ослабленные больные

Ø  Младенцы (пупочный сепсис, пиодермия, симптом ошпаренной кожи - эритема, пузырьковые высыпания)

Ø  Новорожденные

Ø  Синдром токсического шока у женщин (температура, головные боли, сыпь)

Принципы лабораторной диагностики:

Бактериоскопия - информативен когда материал в норме стерилен (ликвор, крови, костный мозг)

Бактериологический - материал (гной, мокрота, моча, кровь) посев жидкого материала на сахарный бульон, комбинированную среду 1:10, инкубация в термостате в течении 7-10 дней с пересевом и просматриванием замутилась ли среда. Не жидкий материал на твердые элективные (ЖСА, кровяной агар, солевой бульон, солевой агар), рост в течении суток, колонии типичные для стафилококков, пигментированные на ЖСА положительная лецитиназа, на кровяном агаре - гемолиз+, отсеивание этой колонии на простой, косой агар. Идентификация культуры с помощью морфологии, реакции плазмокоогуляции, форментации манита в анаэробных условиях, патогенности. Выделенную культуру подвергают фаготипированию (необходимо эпидемиологам для установления источника) и чувствительность к антибиотикам (к β-лактанным не чувствительны).

Фаготипы золотистого стафилококка включают 23 типа и разделен на 4 группы. Культуру засевают на агар газонным методом, чашку переворачиваем и делим по секторам и в сектора капают фаги, на каждый ряд по одному типу фагов. После инкубации наблюдается литическое действие фага на культуру.

Иммунитета перенесенное заболевание не оставляет.

Основные источники инфекции: бактерионосители постоянные или транзиторные. Наиболее опазыние с наличием 10 миллионов в 1 мл материала. Больные, медрицинский работник выступает в роли переносчика, инструментарии, постели, посуда, катетеры.

Способствуют распространению: нарушение сан. эпид режима в ЛПУ

Специфическая профилактика:

Ø  Стафилококковый анатоксин - препараты полученные из экзотоксинов путем обезвреживания, лишены токсические свойства, но сохранившие антигенные свойства, служит для создания активного антитоксического иммунитета. Вводится беременным во время беременности, перед операцией, лицам страдающим фурункулезом.

Ø  Стафилококковая гипериммунная плазма - плазма полученная от гиперимунизации донорской крови. Препарат лечебный.

Ø  Стафилококковый бактериофаг - часто применяют местно, может применятся в комплексе с другими фагами (синегнойный, коли)

Ø  Стафилококковая вакцина - чаще аутовакцина - из собственного штамма, имеет стимулирующее воздействие от конкретного больного.

Семейство Coccacii

Рода:

Ø  Streptococcus

Ø  Enterococcus: S. fecalis, fecium, durans

Ø  Aeroccocus

Ø  Leuconostoc, - этот и далее сапрофиты, портят вино, лекарство

Ø  Pediococcus

Ø  Lactococcus

Ø  Gemtlla

Род Streptococcus.

Внутри рода выделяют более 20 видов, главные S. Pyogenus, pneumoniae, agalactiae имеют значение для медицины. S. salivarius, mutans, mitins - участвуют в стоматологических поражениях (кариес, пародонтит, гингивит). Энтерококки обитают в толстом кишечнике, входят в нормальную флору, могут быть возбудителями ВБИ.

Стрептококки были обнаружены в 1874 году при рожистом воспалении Бильротом. В 1884 году выделены в чистой культуре.

Общие свойства: правильной сферической или вытянутой формы, особенность их расположение в цепочку (длинную) неподвижные, спор не продуцируют, некоторые виды продуцируют постоянно капсулу, факультативные анаэробы, грамм +, каталаза -, растут на средах с глюкозой (сахарный бульон, сахарный агар), но лучше на кровяном агаре.

По характеру роста сделана классификация в 1903 году Штотмюлером:

Ø  α-гемолитический - зеленящие, неполный гемолиз, разрушение эритроцитов до образования метгемоглобина

Ø  β-гемолитический - дают полный гемолиз, зона вокур прозрачная

Ø  γ-гемолитический - негемолитические, визуально гемолиза нет

Основными возбудителями болезней человека являются β-гемолитические, α и γ условно-патогенные, входят в нормальную микрофлору.

Современная классификация по Ленсфид-Грифитсу, построена на основании антигенной структуры стрептококков. Разделены на 17 групп по поверхностному полисахаридному антигену клеточной стенки. Определятся антиген в реакции преципитации и группы называются по буквам А-V. Грифитс внутри группы по белковому антигену который определяется в реакции агглютинации все стрептококки разделил на серологические типы. В настоящее время только в группе А около ста. Группа А: S. Pyogenus, группа В: S. agalactiae; pneumoniae- не входит не в одну из групп. Идентификация идет по сывороткам групповым, типовым это в хороших лабораториях, в просто лабораториях идентифицируют А и D.

Патогенные факторы у стрептококков.

S. Pyogenus (группа А)

Ø  Фимбриллярный белок (антифагоцитарное действие, маскирует рецепторы комплемента, может связывать иммуноглобулины, суперантиген).

Ø  Капсульное вещество - антифагоцитарное действие, содержит гиалуроновую кислоту, запускает аутоиммунные процессы

Ø  Белки ферменты: С_3аС_5а-пептидаза - приводит к разрушению комплемента → воспалительный процесс развивается слабо.

Ø  Продукция экзотоксинов - гемотоксин (стрептолизин О - гемолиз эритроцитов, антиген; стрептолизин S - гемолиз на поверхности кровяного агара, без участия кислорода, не является антигеном, на него не вырабатываются антитела, участвует в нарушении проницаемости мембран, ведущий фактор ревматизма), пирогенные (пирогенная реакция - действуют на гипоталамус), эритрогенные (эритемы при скардатине, сыпи, рожа лица) - вызывают активацию Т-лимфоцитов и продукцию большого числа цитокинов (интерлейкин 1, факторнекроза опухоли) вызывают явление токчического шока. Кардиогепатический токсин.

. Энтеробактерии

Энтеробактерии.

Семейство: Enterobacteriacae, родов более 30, наиболее значимые: Escherichia, salmonella, shigella, klebsiela, proteus, lersinia - представители этих родов вызывают самостоятельные заболевания (сальмонеллез, шигелез, клебсиелез, мнее значимые рода вызывают как кишечную инфекцию, так и вне кишечную инфекцию. Медицинское значение энтеробактерий:

·        Возбудители общих кишечных заболеваний (диарейного синдрома)

·        Возбудители внекишечных заболеваний (гнойно-воспалительные, бактериэмии, менингиты, поражение урогенитального тракте, осложнения послеродовые)

·        Показатели фекального загрязнения (санитарно-показательные микроорганизмы), показатель коли-титра - минимальный объем вещества в котором содержится определенное количество бактерии семейства энтеробактерии.

Количества видов огромно, только в роде сальмонелла более 2500.

Общие свойства семейства:

·        Все палочки

·        Неспорообразующие

·        Средних размеров

·        Г-

·        В мазке находятся хаотично

·        Факультативные анаэробы

·        Легко культивируются на простых питательных средах

·        Капсулу не имеют

·        Оксидаза -

·        Ферментация глюкозу "+"

·        Переводят нитраты в нитриты

·        Место обитания - кишечник человека, животного, птиц, насекомых, земноводных

·        Выделяются в фекалиями

·        В организм попадают через рот водным путем, пищей или контактно-бытовым путем.

Дифференциация родов внутри семейства проводится по набору биохимических тестов и антигенным свойствам и другое:

	Escherichia	Salmonella	Shigella
Лактоза	+	-	-
Глюкоза	+	+
Газ	+	-/+	-/-
Н2S	-	+	-
Индол	+	-	-/+
Подвижность	+	+/-	-

Вообще эта галерея может включать до 30-40 тестов. Изучается с помощью индикаторных бумажек или диагностических тест систем. Антигенные свойства изучаются с помощью антигенных сывороток.

Наиболее важными тестами является: определение подвижности, капсулообразование, тест на сероводород, глюкозу, индол, образование газа, усвоение цитрата натрия, малоната натрия, отношение к мочевине, наличие реакции метилрот, лизина, орнитина, декарбоксилазная активность, разжижение желатины.

Род Escherichia

Внутри рода эшерихия 7 видов: Coli, helmani, pulntris, fergusoni, blatae. Общие свойства: такие же как у всех энетробактерий, дополнительно:

·        подвижность +,

·        лактоза +,

·        глюкоза +

·        индол +,

·        газ +

·        сероводород -

·        реакция метилрот +

·        цитрат натрия -

·        Ф/П -

Питательные среды для изучения, выделении и дифференциации: среды с лактозой, глюкозой, полиуглеводные с добавлением соли - среда Эндо, Клиглера (агар, лактоза, глюкоза, железо лимоннокислое, тиосульфат натрия, индикатор - феноловый красный в кислой среде желтый), Альгиницкого.

На этих средах изучают лактозный признак, отношение к глюкозе, тест на сероводород, выделение газа. На среде Эндо эшерихии растут разным цветом (синим, красным). На среде Клиглера - желтеет (лактоза +), и железо не дает черный цвет у основания (сероводород -).

Антигенные свойства разнообразны: внутри вида различают более 170 О-антигены, они являются групповыми, Н-антиген типоспецифический его вариантов 57, К-антигенов около 90. поэтому внутри вида E. Coli можно выделить большое количество сероваров. При лабораторной диагностике надо не только опрелить не только вид но и серовар. Установление Н-антигена проводится в реакции аглютинации, О-антиген с живими культурами.

Факторы патогенности:

·        Фактор адгезии и колонизации: фимбрии, ворсинки, белок наружной мембраны интимин. За счет этих факторов происходит прикрепление к клеткам и их колонизация. Эти факторы кодируются плазмидными генами. Изучают эти факторы с помощью способности адгезироваться на клеточных культурах ткани.

·        Факторы инвазии: с момощью них проникают внутрь клетки, размножаются и вызываю гибель. Эти факторы белки наружной мембраны, кодируются плазмидными генами.

·        Продукция экзотоксинов: энтеротоксин - обеспечивает избирательное действие на слизистую кишечника, стимулируют гиперсекрецию клетками жидкости, выход солей, с этим связано нарушение водно-солевого баланса. Другие токсины способны разрушить клетки эндотелия, капилляров и клетки слизистой кишечника, вызывают сыпь, диарею. Кодируется генами умеренного фага.

·        Продукция эндотоксинов: по химической природе липополисахарид клеточной стенки. Вызывает эндотоксический шок, оказывает действие при разрушении клетки Coli антибиотиками, макрофагами. С этими токсинами связывают повышение температуры.

Многие факторы патогенности кодируется плазмидами - Col-плазмида, F - плазмида, R-плазмидами. E. Coli входят в состав нормальной микрофлоры, но в них может проникнуть плазмида и они становятся возбудителями.

В зависимости от превалирования какого-то конкретного фактора E. Coli может быть:

Энтеротоксигенные (ЕТЕС) - главный фактор патогенности продукция токиснов, включают серогруппы О₆, О₈… заболевание сопровождается нарушением водно-солевого обмена и вызывают холероподобные заболевания, локализация тонкий кишечник, болеют дети и взрослые.

Энтероинвазивные (ЕIЕС) О_{124, 44}. локализуется в толстом кишечнике, передается пищевым путем, напоминает дизентерию, болеют дети и взрослые

Энтеропатогенные (адгезии) (ЕРЕС) О_{55, 111} поражает только детей первого года жизни. Адгезируются на ворсинках и нарушают функцию всасывания. Локализуются в толстом кишечнике, путь заражения пищевой, молочные смеси.

Энтерогемморагические (EHEC) О_{157, 145}. Вызывают эшерихиозы с гемолитическим синдромом из за токсина действующего на кишечник и эпителий почечных клубочков. Источник заражения КРС, МРС, путь заражения пищевой. Вспышки связаны с употреблением фарша, молочных продуктов, болеют дети и взрослые. Характерно тяжелое течение.

Лабораторная диагностика: бактериологический - посев материала (фекалии, толстый и тонкий кишечник) с целью выделения чистой культуры на среду Эндо → изучение лактоза+ колоний (красный) на второй день, она аглютинируется с поливалентными сыворотками (О_{111, 155}) → колония дающая положительную реакцию на стекле отвивается на среду Клиглера и биохимическую галерею для родовой идентификации → изучают морфологию, биохимию до рода, вида, серовара.

Иммунитет после перенесенного заболевания ненапряженный, видо специфичен имеет значение местный иммунитет, плазматические клетки кишечника продуцируют IgA, которые содержатся в слизи. Защитное значение имеет флора и биоценоз кишечника.

Лечение: антибиотики, препараты из микробов антагонистов

Профилактика: специфическая неразработана

Внекишечные эшерихиозы.

Не через рот, фекально-оральный механизм не работает. Пути операционные раны, травмы, бактериэмия попадают бактерии через инструменты, грязные руки, предметы обихода. Могут носить госпитальный характер. Клинически проявляются разнообразно в зависимости от локализации (гнойные воспаления, гемморагический синдром). Диагностика: см. выше. Автогенные серовары О1, О2, О4, О75 (уропатагенные) О1, О2, О18, О25 (бактериэмия) О6, О7 (менингиты). Распространение вызвано нарушением санитарно-гигиенического режима.

Род Salmonella.

Открыт в 1885 году Сальмоном возбудитель - сальмонеллеза. В 1880 Эбер открыл возбудителя брюшного тифа. 1885 Шотмюллер - паратифа.

В роду сальмонелл выделяется более 2500 сероваров. Современная классификация сальмонелл:

·        S. Enterica 6 подвидов, поражают человека и теплокровных

·        S. Bongori поражают холоднокровных

Внутри каждого подвида отделяют О-подгруппы (50 групп), которые обозначены латинскими буквами и цифрами. Типоспецифический Н-антиген, по нему устанавливают серовар (1367). Серовары называются: энтеритидис, сурис, инфантика. Названия могут быть географические, по клиническим проявлениям. Современная классификация предложена Кауфманом-Уайтом.

Вид	Серогруппа	серотип	"О"-антиген (групповой)	"Н"-антиген (типовой)
S. enterica	А	S. paratyphi A	O2
	B	S. parathyphi B S. typhimurium S. heideberg S. derby	O4
	C	S. parathyphi C S. cholerae suis	O6
	D	S. typhi S. anteridis	O9

Медицинское значение сальмонелл.

S. paratyphi A, В, С - возбудители брюшного тифа и паратифов. S. typhi - исключительно патогенна только для человека, А, В, С - патогенная и для человека и для животных. Остальные сальмонеллы вызывают заболевания домашних животных, птицы, грызунов, кошек. Свои названия сальмонеллы получают либо географически, либо по симптомам, а также от животных у которых встречается (S. Typhimurium - мышиный тиф). Все другие сальмонеллы выступают как возбудители токсикоинфекций или госпитальных сальмонеллезов. Сальмонеллы высоко патогенны для животных и представляют большую ветеринарную проблему.

Общая характеристика сальмонелл.

Палочки, Г -, мелкие, подвижные, спор не продуцируют, капсулы не имеют. Метаболизм в большей степени бродильный, ферментирует в анаэробных условиях углеводы. Растут при температуре +8 - +40 градусов, оптимальная температура +5. Растут на простых питательных средах, для их дифференцировки используют среды с углеводами: Эндо, Клиглера, Алькиницкого, элективные среды ЖБ, Раппопрт, висмут сульфид агар (колонии черного цвета в следствии продукции Н₂S).

В биохимическом отношении высоко активны, биохимическая галерея используется для родовой идентификации и подвидовой идентифткации.

Для рода:

·        Глюкоза +

·        Газ -/+

·        Лактоза -

·        Цитрат симонсона +

·        Индол -

·        Уреаза -

·        Сероводород +

·        Лизиндекарбоксилазная активность +

·        Подвижность +

Факторы патогенности связаны с островками патогенности (SPI) - генами в хромосомах и плазмидными генами.

SPI 1 - факторы инвазии контролируют проникновение сальмонелл в эпителиальную клетку, апоптоз

SPI 2- контролируют выживание сальмонелл внутри макрофагов, в связи с белками клеточной стенки.

SPI 3 - обеспечивают продукцию эндотоксинов, цитотоксинов

Плазмидные гены: устойчивость сальмонелл к бактерицидному свойству крови.

В общем есть факторы адгезии, колонизации - пили (на пейеровых бляшках, эпителии кишечника), факторы инвазии - обеспечивают внутриклеточный паразитизм, факторы продукции токсинов, факторы устойчивости.

Экология сальмонелл.

Естественный резервуар организм животных, птиц. Человек только для S. typhi, S. parathyphi B. В окружающую среду попадают с калом, мочой и длительно сохраняются в окружающей среде. В водоемах как во люду, так и в обычной воде около 4-6 месяцев, в морской воде до 1 месяца, в почве 9 месяцев, пыль в комнатах до 1,5 лет, в пищеых продуктах до 4 месяцев, в замороженном мясе более 1 года, в яйцах, яичном порошке 13 месяцев, на обощах до 2 месяцев, на бумаге до 1 года.

Сальмонеллами поражены до 20% домашних животных, гуси и утки 50%, кошки 10%, грызуны 40%. Сальмонеллы чувствительны к высокой температуре, кипячению, дезинфектантам. Эта устойчивость делает среду обитания накопителем. Основной путь передачи - пищевой (продукты животного происхождения). Затем водный (питьевая вода, хозяйственная вода. И контактно-бытовой. Госпитальные сальмонеллезы могут передаваться воздушно-капельным путем и медицинские инструменты.

S. thyphi (палочка Эберта, брюшной тиф).

Возбудитель брюшного тифа. Патогенез.

Стадии	Стадии болезни
Заражение: · Источник: больной человек, носитель · Входные ворота: рот · Инфицирующая доза 104 - 106 · Пути передачи: пищевой, водный, контактно-бытовой · Путь: рот→желудок (часть погибает)→кишечник → адгезируется на ворсинках в области лимфоидных бляшек → захватывается макрофагами→проникает внутрь энтероцита → не разможается	Инкубационный период (≈ 14 дней - 4 месяца)
Первичная кишечная стадия: · лимфоаденит
Бактериэмия: прорывает лимфатический барьер и попадает в кровь (10 дней), может частично погибнуть при этом выделяется эндотоксин.	Первые клинические симптомы
	Стадия интоксикации
Паренхиматозное обсеменение: попадает в печень, селезенку, частично гибнуть → больше интоксикация	2 - 3 неделя
Вторичная кишечная стадия. Попадание возбудителя в кишечник с желчью → гиперэргическая форма воспаления в кишечнике, возникновение язв (3 -4 неделя)	Стадия осложнений (3-4 неделя) · кровотечения · перфорация кишечника
Реконвалистенция формирование иммунитета, освобождения от возбудителя с помощью антител и лекарственных препаратов.	Стадия реконвалисценции (5 - 6 неделя)

Лабораторная диагностика.

Инкубационный период: не производится.

Первая неделя: посев крови на гемокультуру

Вторая (3,4,5) неделя: исследование кала на копрокультуру, мочи на уринокультуру

Шестая неделя: кал, моча + желчь

Перед выпиской: желчь

Питательные среды:

·        кровь: желчный бульон, Рапопорт

·        кал, моча: Эндо-Левина

Этапы:

1.      посев

2.      отбор лактозо + колонии

.        пересев на среду Клиглера, биохимическую галерею

.        дифференцировка по антигенной культуре: реакция агглютинации с О и Н сыворотками

Серологический метод: исследование сыворотки крови для определения антител. Используют не ранее 2-й недели. Реакции агглютинации с диагностикумами О, Н, Vi. Вначале появляются О-антитела 1:100, 1:200, затем после 2-й недели титр не повышается, но появляется Н-антиген и их титр нарастает 1:400, 1:800 - это показатель свежего заболевания. Vi - антитела имеют значение для диагностики бактерионосительства. Для формирования носительства имеет значение состояние желчного пузыря, состояние иммунитета, гельминтозы, особенно печеночные.

Диагностика хронического брюшнотифозного носительства.

Для диагностики берут переболевших, работников эпид важных объектов (в пищевой промышленности, детских учреждениях, медицинских учреждениях). Прежде всего исследуют кал, мочу для выделения чистой культуры, обязательно исследование желчи. Делают многократно 3-5 раз после приема слабительного. Так же используют исследование сыворотки крови для обнаружения Vi-антител в реакции непрямой агглютинации (Ви-эритроцитарным брюшным диагностикумом), носитель если 1:40.

Иммунитет.

После перенесенного заболевания стойкий пожизненный иммунитет. Заболевание тяжелое дает летальные исходы. Осложнения кровотечения, перфорация, инфекционный миокардит.

Брюшной тиф не путать с сыпным тифом (возбудитель рикеции), возвратным тифом (возбудитель спирохета)

Профилактика.

Не специфическая: контроль за водоснабжением, продуктами, выявление носителей, выявление больных, дезинфекция, соблюдение сан-эпид режима.

Специфическая: вакцинация по эпид показаниям в определенных регионах - спиртовая брюшнотифозная вакцина (только для взрослых), брюшнотифозная вакцина обогощенная Vi-антигеном, химическая вакцина содержащая один Vi-антиген (можно детям с 3-х лет), брюшнотифозный бактериофаг - жидкий или таблетированный, рекомендуется контактным, используется для профилактики.

Сальмонеллезы.

Заболевания вызываемые разными сальмонеллами:

·        Пищевые токсикоинфекции: гастро-энтериты

·        Генерализованная форма с бактериэмией, сепсисом по тифоподобному варианту

·        Госпитальные сальмонеллезы

Пищевая токсико-инфекция.

Заболевание связанное с употреблением пищевых продуктов в которых находятся живые микроорганизмы и их токсины. Причем они там могут размножаться и накапливаться (тушонка, колбасы, мясо).

Вызываются: сальмонеллами, эшерихиями, протеями, клебсиелами, энтеробактериями и другими представителями семейства энтеробактерий. Псевдомонадами, бациллами, клостридиями, вибрионами.

ПТЭ носят эпидимический характер или групповых поражений, имеют очень короткий инфекционный период, выраженные симптомы состороны ЖКТ, интоксикацию. Принципы лабораторной диагностики: исследование пищи и выделений больного для обнаружения возбудителя - посевы.

Профилактика: ветеринарный контроль пищи, термическая обработка пищи

Пищевые интоксикации.

Группа заболеваний связанная с употреблением пищи содержащей микробные токсины (сами микробы уже погибли). Возбудители: золотистый стафилококк, грибы, клостридии ботулина. Принципы лабораторной диагностики: обнаружение в пище или выделениях больного токсин методом биологической пробы, иммуноферментного анализа.

Род Shigella.

Название в честь японского ученого Шига, который описал в 1898 году, возбудитель открыт в 1888 году Шентемесом. В чистой культуре выделил Григорьев в 1891 году. Серовар 1 Sh. Disenteria - палочка Григорьева-Шига, серовар 2 - палочка Лард - Сакса, 3 - Штурца - Шмитца.

Серо-группа	б/х свойства (старая классификация)	Вид	серовар	подсеровар
А	Манит -	Sh. Disenteria	1-12	-
B	Манит +	Sh. Flexneri	1-6 X Y	1a1b 2a2b 3a 3b 3c 4a 4b
C	Манит +	Sh. Boydii	1-18	-
D	Манит + Лактоза +	Sh. Sonnei	Хемовары фаговары	-

Лактоза - (искл. Sh. Sonnei ч/з 48 часов)

Глюкоза+

Газ - (искл. внутри вида Sh. Flexneri серовар №6 - палочка Ньюкастль)

Сероводород-

Индол-

Уреаза-

Ф/А-

Цитрат натрия-

Молонат натрия-

Общие свойства рода.

Присущи все свойства энтеробактерий. Дополнительные свойства: палочки, Г-, неспорообразующие, маленькие, жгутиков нет, подвижности нет, растут на простых средах, факультативные анаэробы, в биохимическом отношении не активны.

Резистентнтность довольно значительна: на бумаге 30-36 дней, в сухих испражнениях 4-5 месяцев, в ночве 3-4 месяца, в воде до 3 месяцев, на овощах до 2 недель, молочные продукты до 2 недели. Погибают при температуре 60⁰ ч/з 15 -20 минут, при 100⁰ мгновенно. Чувствительны к дезинфектантам. Абсолютные патогенны для человека.

Механизм заражения фекально-оральный. Источник только люди которые выделяют их только с фекалиями и попадают в новый организм ч/з рот водным, пищевым и контактно-бытовым путем.

Факторы патогенности.

Факторы адгезии и колонизации: пили, ворсинки, белки клеточной стеник, которые способны разрушить слизь, муцин слизи. Ферменты: муциназы, нейроамидазы.

Факторы инвазии: проникают внутрь эпителиоцитов, макровфагов и размножаются там. Клетка погибает, наступает ее апоптоз. Факторы инвазии кодируются генами плазмид.

Факторы эндо- и экзотоксиноза: Экзотоксины продуцируют только палочка Шига, остальные эндотоксины. Палочка Шига вызывает тяжелую дизентерию с кровавым поносом. Экзотокисн сходен с гемотоксином эшерихий, сальмонелл. Ген отвечающий за токсинообразованиее входит в состав умеренного фага → передается из клетки в клетку. Эндотоксины - липополисахаридные комплексы оказывающие пирогенное действие, общетоксическое действие. Эндотокссинообразование кодируется плазмидными генами. В зависимости от эндотоксинообразования шигеллы зоне дают колонию двух типов 1 (с геном) и 2 (без гена).

Возбудители дизентерии.

Основные возбудители в настоящее время Sh. Flexneri и Sh. Sonnei, остальные встречаются редко.

Особенности патогенеза: источник больной человек (особенно опасены легкие формы), бактерионоситель.

Пути передачи: водный, пищевой, контактно бытовой

Входные ворота: рот

Инкубационный период: от 1 до 5 дней это необходимо что бы прошел слой слизи, гликокаликса и адсорбироваться на слизистой оболочке дистального отдела кишечника ( особенно в сигмовидной и прямой кишке) там идет стадия адгезии и колонизации → проникновение эпителиоцитов → размножение.

Клинические симптомы: воспаление, эрозии, язвы на слизистых оболочках кишки. Болезненные, спастические сокращения кишечника, болезненные позывы на стул (тенезмы), стул маленького объема (ректальный плевок), много слизи и прожилки крови. Явления общей интоксикации.

Иммунитет: не стойкий, не продолжительный, не напряженный, типо- и видоспецифический. Защитное значение имеет местный иммунитет связанный с образованием в кишечнике IgA - копроантитела. Гуморальный характер иммунитета большого защитного значения не имеют.

Лабораторная диагностика: только бактериологический. Материал: фекалии, слизь из прямой кишки в количестве 1 г. Посев делают быстро, лучше у постели больного т.к. во внешней среде гибнет. При заборе надо исключить контакта фекалий с дезинфектантами. В качестве консерванта: физ.рр + глицерин 3:1. Можно сразу сеять в среды обогащения (соляные среды). Посев делают на среды Эндо, Леви, Плоскирева (содержит соли желчных кислот и задерживается рост эшерихий). Растут лактозонегативными колониями. Колонии отвивают на среду Клиглера с последующий идентификацией. Виды определяют с помощью аглютинирующих сывороток. Все это идет 5 дней.

Серологический: исследование сыворотки больного в реакции пассивной гемагглютинации, ко-аглютинации, РИФ.

Аллергический: проба с дизентерином внутрикожная для определения инфекционной аллергии в предплечье ч/з 48 часов измеряют размер папулы (типичая реакция ГЗТ отвечают за нее лимфоциты) при положительном результате 10 мм.

Профилактика.

Неспецифическая: выявление больших, правильное содержание общественных и личных туалетов, мытье овощей и фруктов. Защита водоемов, хлорирование, кипячение воды.

Специфическая профилактика отсутствует. Дизентерийные бактериофаги для профилактики контактных.

Род Yersinia

Виды: Y. pestis (чума), Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica, Y. intermtdia (ирсиниозы кишечные).

Общая характеристика: палочки, Г-, нет спор, овоидной формы (бочоночки), биполярно красящиеся, неподвижные (pestis), подвижные (Y. pseudotuberculosis, Y. Enterocolitica), хорошо растут на простых средах, способны размножаться в почве, воде и накапливаться на окружающих растениях, психрофилы - растут при температуре от -2 до +40, оптимум +24, размножаются в холодильнике. Лактозо-негативные.

Биохимические свойства:

Лактоза-

Глюкоза+

Газ-

Сероводород-

Цитрат натрия-

Мочевина+

Индол-

Подвижность+/-

Экология: живут в организме грызунов, мышей, крыс, зайцев выделяются от грызунов с фекалиями, трупным материалом, мочой и загрязняют воду, почву и длительно там хранятся. Человек заражается алиментарным путем (поедая продукты питания).

Течение заболевания: протекает как гастроэнтерит, часто поражаются мезентеральные лимфатические узлы, может вызвать аппендицит. Иногда развиваются генерализованные варианты → бактериемия, скарлатиноподобная сыпь, боли в суставах. Заболевание может принять длительное течение.

Лабораторная диагностика:

Бактериологический: посев материала (фекалии, пищевые продукты, кровь, моча. Делают посев на среды Эндо, Левина. Плоскирева при 25⁰. Лактозонегативные колонии идентифицируют по б/х свойствам и антигенам.

Серологический метод: сыворотка больного исследуется на специфические антитела в реакции непрямой гемагглютинации для этого добавляют эритроцитарный иерсиниозный диагностикум на Y. pseudotuberculosis, Y. Enterocolitica в разведении 1:800.

Профилактика: специфическая отсутствует.

Вибрионы

Семейство Vibrionacae

Рода: Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas

Aeromonas, Plesiomonas высоко патогенно для гидробионтов, у человека вызывают гастоэнтериты.

Род Vibrio.

Вид V. Cholerae

Биовары:cholerae cholerae (classica)

сholerae eltorO₁

Вид V. cholerae (bengl)O₁₃₉

Все это вызывает холеру у человека и являются патогенными только для человека.

Вид V. parahaemoliticus, V. minicus, V. orientalis. Вызывают вибриозы которые могут протекать как гастроэнтероколит, раневая инфекция, отиты и сепсис.

Общая характеристика.

Изогнутая палочка в форме запятой, Г-, подвидная, имеет один жгутик, спор нет, капсул нет (искл. V. cholerae (bengl)), морфологически нестабильны - могут превращаться в нитевидные и шаровидные формы, аэробы (факультативные анаэробы).

Растут на простых питательных средах (очень быстро). Элективные среды: 1% пептонная вода, щелочной агар рН 8-9. ТСВS (тиосульфат-цитрат-бром-сахарозный агар), среды с телуидом. На жидкой среде пленка, на твердой мелкие колонии. Диапазон температуры +14 - +40.

Биохимические свойства используются для родовой идентификации:

Оксидаза+

Глюкоза

окисление+

ферментация+

Индол+

Сероводород-

Лизин/орнитин декарбоксилазная активность +

Аргинин декарбоксилазная активность-

Антигенные свойства.

Связаны с наличием о-соматического антигена и Н-антигена. Для идентификации большое значение имеет значение О-антигена по которому внутри рода Vibrio и вида V. Cholerae различают от 1 до 139. О антиген термотстабилен. Возбудители холеры (classica, сholerae eltor) относятся к О₁ группе и bengl О₁₃₉. Другие вибрионы относятся ко 2,3,5,10 и т.д. группам т.е. non О₁ или НАГ-вибрионы (не агглютинирующие О₁ и О₁₃₉ сыворотке) они не возбудители холеры.

Н-антиген общий, термолябильный и большого значения для идентификации вибрионов не имеет.

О-антиген липополисахарид белковой приводы и имеет в своем составе три фракции А, Б и С и в зависимости от сочетания фракций V. Cholerae classica и V. Cholerae сholerae eltor делятся на три серовара, между собой они биовары.

Classica

·   inaba (АС)

·        agava (AB)

·        hikojima (ABC)

Eltor:

·   inaba (АС)

·        agava (AB)

·        hikojima (ABC)

Определение скеровара возбудителя имеет диагностическое значение если идентифицируется (в Индии) один серовар, а в Шри-Ланка тоже возбудитель, но другой серовар, то они друг с другом не связан. Серовары в bengae не выявляются.

История открытий возбудителей.

Первый возбудитель холеры - палочка Коха (classica) открыта в 1882 году из органов больного, второй возбудитель сholerae eltor в 1902 году из организма паломника на станции Эльтор в Индонезии, роль как возбудителя установлена в 1961 году, до этого не считался возбудителем холеры. В этом году установлено начало седьмой пандемии холеры. Это было связано со сменой классического возбудителя на холеру эльтор. Третий возбудитель (bengl) был выделен в 1992 году в Бангладеш. Он стал распространятся в юго-восточной Азии, индию. В 1993 году завезен в Россию в Ростов-на-Дону. Восьмая пандемия начавшись в 93 будет связана с этим возбудитетелем. Сейчас все случаи холеры связаны с Eltor, но его удельный вес уменьшается на Bengal. То есть возбудитель холеры постоянно меняется для него черезвычайно важна изменчивость морфологическая, патогенная. Поэтому среди возбудителей есть высоко патогенные штаммы (вызывают пандемии) и низко патогенные (вызывают легкие случаи).

Факторы патогенности у возбудителей.

Высокая подвижность, способность пробуравливать слизистый слой и адросбироваться на эпителиоцитов тонкого кишечника с помощью факторов адгезии и колонизации, продукция ферментов муциназа, нейроамидаза, лецитиназы, протеиназы.

Главный фактор патогенности продукция экзотоксина - холерогена уникального по свойствам. Другие токсины энторотокиснов, эндотоксинов тоже обеспечивают токсические свойства. Холероген продуцируется специальным геном в сосаве генома бактериальной клетки - Vct-ген. Управляет этими генами два регуляторных гена: tox-ген и r-ген в структуре которых могут быть мутации, рекомбинации, что отражается на функции гена и делает организм возбудителем и способен вызывать эпидемии. Если регуляторные гены подверглись другим воздействием и что то отщепнулость от гена, то он не будет работать "молчать". Таким образом есть высокотоксигенные возбудители и низкотокисгенные. Обнаружить холероген у возбудителя можно методами:

·        Биологический - проба на кроликах и котятах. Заражают → извлекают кишечник → смотрят на изменения.

·        Иммуноферментный анализ

·        Реакции непрямой гемагглютинации

·        Обнаружение холерогена на клеточной культуре ткани - повреждает клетки.

·        Генетический метод - ищут Vct-ген методом ПЦР или ДНК-зондов.

Патогенез холеры.

Источник: больной человек, бактерионоситель т.к. животные не болеют

Пути попадания: через рот

Пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой

Инфицирующая доза: 10⁹-10¹¹ (содержится в 1 г фекалий) т.е. надо несколько дней для заражения.

Путь инфекции: желудок (кислая среда губительна - может дальше не резвится, если низкая кислотность, с водой или натощак барьер не срабатывает) → тонкий кишечник (щелочная среда - ему хорошо) → адсорбируется на ворсинка тонкого кишечника и начинает размножаться и выделяет все факторы патогенности, особенно холероген. Холероген определяет типические признаки холеры т.к. это специфический экзотоксин. Холероген белок хорошо изучен, состоит из двух фракций (А и В). А - истинный токсин, а В не обладает токсическими свойствами она распознает рецепторы эпителия тонкой кишки, формирует поры в составе мембраны эпителиоцита и отвечает за проникновения А фракции. Затем А фракция имеет мишень аденилатциклазу (фермент отвечающий за переход АТФ в цАМФ) → накопление цАМФ → клетка теряет воду, соли Na, К бикарбонаты в просвет кишечника → нарушение водно-солевого баланса организма. Человек теряет много внутриклеточной жидкости, солей → жидкий стул (рисовый отвар), рвота → дегидратация (за сутки несколько литров, похудеть на 10 кг). Объем порянной жидкости и веса определяет степень дегидротации:

степень - 3%

степень - 5% (холерный гастроэнтерит)

степень - 10%

степень - 15% (стадия алгиды)

Основное лечение: срочная нормализация водно-солевого баланса (струйно, капельно вводят растворы).

В стуле нет лейкоцитов (нет воспаления), температура ниже нормы.

Микробиологическая диагностика холеры.

Основной метод диагностики: бактериологический т.к. входит в группу особенно опасных. Исследованию подлежат: фекалии, промывные воды кишечника, рвотные массы, секционный материал тонкого кишечника, желчного пузыря. Вода, пищевые продукты, смывы с овощей и фруктов, смывы с рук персонала, забор материала делается специально-обученным персоналом и специальными методами защиты. Исследования проводится в лабораториях спец. Назначния

час: засевания на слективные среды: 1% пептонная вода, щелочной агар, TCBS → термостат 37⁰ - 3-4 часа →пересев на вторую ПВ, ЩА → 2 часа.

Экспресс методы диагностики холеры:

·   Исследование материала в реакции иммунофлуоресценции с О₁-холерной сывороткой или О_139-й(первичного или вторичного).

·        Постановка реакции аглютинации в препарате висячая капля +

·        Иммобилизация холерного вибриона: висячая капля + О₁ сыворотка → прекращение подвижности.

часов: учет роста, отвивка подозрительной колонии на косой агар Клиглера, щелочного агара для выделения возбудителя.

- 24 часа: рост чистой культуры и идентификация культуры.

Идентификация: окраска по Грамму, изучение подвижности и установления принадлежности к роду по биотестам (оксидаза, ферментация глюкозы, проба на индол, сероводород).

Дифференцировка: возбудителя от холероподобных вибриов по тестам: Реакция агглютинации по 1 и 139 сыворотке, отношение к триаде сахаров Хейберга (арабиноза -, сахароза +, манноза +, у подобных все +), отношение к фагам.

-36 часов: устанавливается биологический вариант возбудителя (биовар):

	Холерный вибрион	Эльтор
Лизабельность	Лизируется с 4 типом Мукерджи	Лизируется фагом Эльтор2
Рост на агаре с полимексином В	Не растет	Растет
Агглютинация эритроцитов курицы	Не аглютинирует	Аглютинирует
Реакция фогес-проскауера	Отрицательная	положительная

Установление серовара с помощью сывороток: inaba, agava.

Серологический метод: определение парных сывороткам больного специфических антител в реакции пассивной гемагглютинации.

Профилактика.

Общаяя: выявление, изоляция, исследование воды, устройство туалетов, сан-просвет работа.

Специфическая: холерная моновакцина - убитая взвесь возбудителей, холерная вакцина+анатоксин - приготовлена из холерогена, холерные бактериофаги (через рот), химиопрофилактика - терациклином, фуразалидолом.

Зооантропонозы.

ЧУМА.

Возбудитель: Y. pestis

Особенности (для всех зооантропонозов):

Источники: природная очаговость, высокопатогенны для животных (суслики, тушканчики, крысы) → источник животное.

Распространение: воздушный, пищевой, контактно бытовой, трансмессивно.

Пути попадания: кожа, слизистые (ЖКТ, глаз), сразу в кровь

Клинические формы: кожная, кожно-бубонная, легочная, кишечная, септическая

Особенности профилактики: ветеринарная профилактика (домашних и диких) включающая комплекс: дезинфекция, дезинсекция, дератизация.

Свойства Y. Pestis: палочка овоидной формы, биполярноокрашиваемая (центр белый), Г "-", спору не продуцирует, жгутиков не имеет, есть капсула. Растет на простых питательных средах (питательный агар, среда Эндо-Левина) дает колонии с шероховатыми краями, психрофильные микроорганизмы (25-28⁰).

Факторы патогенности:

·        Антифагоцитарные: капсула, М-белок клеточной стенки блокируют фагоциты

·        Продукция эндотоксинов (мышиный токсин)

·        Выработка бактериоцинов - блокируют обменные процессы

·        Продукция пестицинов - это снижает гуморальные факторы защиты (комплемент, белки крови)

Б/Х свойства:

Лактоза-

Глюкоза+

Газ-

Сероводород-

Цитрат натрия-

Мочевина+

Индол-

Подвижность-

Антигенные свойства: антигены капсулы и клеточной стенки.

Патогенные свойства доказаны более чем на 200 видах животных. Особенно сурки, суслики, мыши, крысы, хомяки, белки.

Экология.

В природных условиях основным резервуаром являются грызуны. Выражена природно-очаговость. В организме грызунов возбудитель быстро размножается, передается трансмессивным путем (через кровососущих насекомых - блоха). Во внешней среде длительно сохраняется, длительно сохрашяется при низких температурах 0 градусов - 6 мес, в замороженном виде до 1 года, в почве до 5 месяцев. Подгибается при кипячении за 1 минуту, действуют сильные концентрации дезинфектантов за 5-10 минут.

Pestis (лат) - чума, по английски - plaque, schuy (китайсикй) т.е распространена во всех странах. Известные эпидемии чумы: Густинианова (525 год), чума в Европе, Китае 14 век (в Смоленске выжило 5 человек), чума в Москве 1774 год. Очаги чумы до сих пор регистрируются в индии, Индокитае, Мадагаскаре, в России (Тува, горно-алтайская республика, прикаспийский округ, забайкальский округ), Казахстан. В этих очагах постоянно регистрируются случаи заболевания населения.

Патогенез.

Источник: больные грызуны, блохи, больной человек

Пути передачи: воздушный, пылевой, пищевой, трансмессивный, контактно-бытовой.

Входные ворота: кожа, слизистые

Клинические формы: кожно-бубонная (некроз в лимфатическом узле), легочная форма (первичная, вторичная), септическая (первичная, вторичная)

Летальность: более 60%

Инкубационный период: 4-6 дней

Течение заболевания: начало: острое, лихорадка, интоксикация, мышечная слабость, сильная головная боль, лицо гиперемированна, на коже в месте укуса пятно → папула → везикула → пустула → выход микроорганизмов. При бубонной форме бубон болезнен, гиперемирован, отечен сразу вовлекается несколько узлов → возникает конгломерат. При легочной форме возбудитель выделяется с мокротой. При септической форме на теле сыпь, заканчивается кровотечениями.

Исследуемый материал - содержимое бубона, мокрота, кровь, трупный материал (человека, грызунов, блох), вода, почва, продукты.

Методы: бактериоскопия, РИФ, иммуноферментный анализ, РНГА, термопреципитация, методы генетической диагностики.

Бактериологический: посев на среды агар, Эндо-Левина, на среды с антибиотиками (для подавления другой микрофлоры), посев на среды с противочумным бактериофагом, на кровяные среды, среды с генциан фиолетом. Посевы инкубируют при температуре 25-28 градусов. На средах дает R и S - формы колоний.

Изучаются морфологические свойства, биохимические свойства. Выделенная культура проверяется в биологической пробе на морских свинках.

Профилактика.

Наблюдение за природными очагами чумы. Продедение дератизации, дезинфекции и десинсекции.

Специфическая профилактика у людей работающих в очагах, противочумных институтах, военных работающих с биологическим оружием - иммунизация живой противочумной вакциной из ЕV-штамма, химическая противочумная вакцина, в очагах чумы проводится химиопрофилактика с помощью антибиотика, противочумного иммуноглобулина.

СИБИРСКАЯ ЯЗВА (ANTHRAX)

Вызывает заболевание - B. anthracis. Зооантропонозное заболевание острой природы при котором на коже человека образуется карбункул в центре которого черная точка (уголек). Заболевание древнее. Этиологию изучали Кох, Пастер, Цинковский. Возбудитель описан в 1849 году Полендером. Заболевание распространено во всех странах, но чаще с развитым скотоводством (крупный и мелкий рогатый скот).

Животные заражаются пищевым путем с водой, травой в споровой форме. Основная клиническая форма - кишечная, возбудитель выделяется с фекалиями и переходит в спору и сохраняется десятки лет.

Спора устойчива к температурам, дезинфектантам т. о. почва и вода стновится резервуаром.

Свойства возбудителя: палочки объединенные в цепочку, по морфологии стрептобацила, неподвижен, продуцирует капсулу (в живом организме) и спору (во внешней среде). Грамм +, факультативный анаэроб, хорошо размножается на простых средах, темпратурный оптимум 12 градусов, колонии R-формы. На среде с пенициллинов переходит в L-форму - т.е. не продуцируют клеточную стенку Г- (форма жемчужного ожерелья). Эта способность используется для идентификации.

Антигенные свойства:

·        Капсульный антиген белковой природы

·        Антигены клеточной стенки - термоустойчивые, можно изучить в реакции термокольципреципитации (р. Аскори) для обнаружения антигена в исследуемом материале, который кипятится, измельчается и исследуется.

·        Экзотоксины на них образуются антитоксины.

Факторы патогенности:

·        Капсулообразование

·        Продукция экзотоксинов: летальный (вызывает выработку рядов цитокинов - ИЛ1, фактора некроза опухолей), отечный (имеет белки, которые проникают внутрь клетки → блокируют работу клеток).

Патогенез.

Источники: больное животное

Пути передачи: контактный, пылевой, пищевой, трансмессивный

Инкубационный период: 2-3 дня, для пылевого пути несколько недель

Клиническая форма: кожная - сибиреязвенный карбункул, кишечная, легочная, септическая форма

Лабораторная диагностика:

Бактериоскопия - исследование материала карбункула, мокроты больного, в препаратах окрашенных по Грамму

РИФ - для выявления стрептобактерии

Бактериологический: посев материала на простой питательный агар, сывороточный агар, кровяной агар, среды с пенициллином → колонии R-формы, L-формы, реакция термокольципреципитация - для обнарудения антигенов, нахождение факторов патогенности.

Биологическая проба - на кроликах

Серологический метод - обнаружение антигенов в трупном материале методом Асколи

Профилактика.

Ветеринарная профилактика - среди животных, для людей - вакцина СТИ (живые акапсульные штаммы), применяется накожно, иммунитет на 6 месяцев, вакцина инактивированная сибириязвенная (убитая), создана из токсигенных штаммах, вводится подкожно, курсом - пятикратно, иммунитет на 1 год. Сибириязвеный иммуноглобулин - снят с производства из за аллергических реакций, получен путем иммунизации лошади, использовался как лечебный, профилактический препарат, содержит готовые антитела, экстренная профилактика - антибиотиками (ципрофлоксацин, доксициллин, амоксициллин).

Род Brucella

1.      Классификация: аэробные палочки и кокки, роды с неясным систематическим положением, р. Brucella, B. melitensis, B.abortus, B.suis

2.      Морфология: Гр-, кокки, не образуют спор, не имеют жгутиков, есть капсула.

3.      Тип питания: хемоорганотрофы.

.        Биологические свойства:

а) требовательны к питательным средам

б) размножаются медленно

5.      Факторы патогенности и патогенез:

а) инвазивные факторы (капсула, гиалуронидаза)

б) эндотоксин

Проникновение различными путями в организм ® инвазия и проникновение в лимфу и кровь ® разносятся по всему организму ® достигают л. у. (генерализованная лимфоаденопатия), где размножаются и накапливаются, образуют гранулемы в печени и селезенки ® периодическое поступление в кровь.

6.      Клинические проявления: инкубационный период от нескольких недель до нескольких месяцев. Выраженная легко переносимая лихорадка, умеренная интоксикация. Лимфатические узлы мягкоэластической консистенции чаще безболезненные. Аппетит у больных снижен, отмечается сухость во рту, жажда, склонность к запорам. Язык умеренно обложен, печень (реже селезенка) увеличена.

7.      Иммунитет: стойкий, напряженный ГИО (IgM и IgG) и КИО (в форме ГЗТ)

.        Эпидемиология. Зоонозное заболевание. Источник - домашние животные. ОПЗ - алиментарный. Устойчивы к факторам окружающей среды, высокочувствительны к дезинфектантам, высокой температуре.

.        Профилактика: специфическая: живая вакцина, предупреждение рецидивов: инактивированная вакцина, специфический иммуноглобулин

.        Лечение: антибиотики широкого спектра действия

.        Диагностика:

Материал: кровь, реже грудное молоко, желчь, костный мозг.

а) Бактериологическое исследование.

б) Биопроба: заражение морский свинок или белых мышей. Вскрытие трупов через 20-30 дней после заражения. Мазки-отпечатки из органов по Гр, посевы на среды выделения.

в) Кожно-аллергическая проба по Бюрне для выявления ГЗТ к бруцеллам. Положительна у больных и вакцинированных людей.

Материал: сыворотка крови. Серодиагностика: реакция Райта (развернутая РА), реакция Хедльсона (пластинчатая РА), РСК, опсонофагоцитарная реакция.

Род Francisella

1.      Классификация: аэробные палочки и кокки, роды с неясным систематическим положением, р. Francisella, в. F. tularensis

2.      Морфология: Гр-, кокки, спор не образуют, жгутиков не имеют, есть слабовыраженная капсула.

.        Тип питания: хемоорганотрофы.

.        Биологические свойства:

а) аэробы, требовательны к питательному субстрату

б) ферментируют гл, мальтозу с образованием кислоты и глицерин

.        АГ структура: Vi-АГ и О-АГ.

6.      Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезивные факторы ( капсула и белки КС)

б) эндотоксин (ЛПС) - вызывает общую интоксикацию

Адгезия на кл респираторного и кишечного трактов ® воспалительный процесс, массивное размножение микробов ® проникают в регионарные л. у., вызывая воспаление ® размножение и частичная гибель МБ, выделение эндотоксина. При бактериемии происходит расселение в различные органы и ткани. Возникает множественное увеличение л.у., могут развиваться гранулемы в разных органах (печень, селезенка, легкие).

.        Клинические проявления: инкубационный период 3-7 дней. Заболевание начинается остро или даже внезапно, больные могут нередко указать даже час начала болезни. Температура тела повышается до 38-40°С. В зависимости от клинической формы наблюдаются боли в глазах, боли при глотании, боли за грудиной, боли в области развивающегося бубона. Клинические формы болезни определяются воротами инфекции.

8.      Иммунитет: стойкий, ГИО (напряженный), КИО, ГЗТ.

.        Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Резервуары - грызуны. ОПЗ - контактное, иногда алиментарно или трансмиссивно. МБ устойчив во внешней среде.

.        Профилактика: живая вакцина Гайского-Эльберта.

.        Лечение: антибиотики широкого спектра действия.

9. Облигатные анаэробы

Отличаются механизмом обменных процессов т.е. без участия свободного кислорода. Конечным акцептором в дыхательной цепи являются нитраты, сульфаты или органические соединения.

Спорообразующие	Споронеобразующие (17 родов)
Клостридии (грамм - палочки): · C. pefringes · C. septicum возб. газовой гангрены · C. hovyi · C. Tetani → возб. столбняка · C. Botulinum → возб. ботулизма · C. difficile → возбудитель мембранозного колита у получающих антибиотики Грамм + палочки: · actinomicetas	Грамм - палочки · Bacteroides · Fusobacterium · Porphynomonas · Prevotella Грамм - кокки · Veillonella Грамм + кокки

Род Clostridium.

Палочки, крупные, спорообразующие - диаметр споры больше диаметра палочки, подвижность +/-, форма веритиноообразная, положение споры имеет дифференциальное значение, капсулы не продуцируют (есть исключение). Растут на средах (безкислородных): Кита-Тороци, Вильсон-Блера, глубокий столбик сахарного агара, кровяной агар в условиях анаэростата.

Биохимически активны, обладают набором сахаролитических, протеолитических ферментов, разлагают вещества до газа ( аммиака, СО₂), масляных кислот.

Экология клостридий.

В норме входят в состав нормальной микрофлоры ЖКТ животных (особенно жвачных) и человека - переваривают пищу, усиливают перистальтику и одновременно с этим продуцируют токсины, которые тут же разрушаются протеазами соков.

С фекальными массами выбрасываются в среду и переходят в споровидную форму, и сохраняются там в течении десятков лет. Резервуаром клостридий является почва. Клостридиальная анаэробная инфекция имеет экзогенное происхождение - раневая инфекция. Входными воротами является рана в которой создаются анаэробные благоприятные условия для перехода споровой формы в вегетативную.

СТОЛБНЯК.

Тяжелое, острое инфекционное заболевание, которое имеет одного возбудителя C. tetani и проявляется неврологической симптоматикой.

Характеристика C. tetani

Палочка открыта в 1883 году Монастырским.

Морфологические особенности:

·        Подвижность +

·        Спора - на периферии

·        Форма - ракетки

·        Грамм +

·        Культивируется - на сахаро-кровяном агаге, Кита-Тороции

·        Б/Х - нет сахаролитических ферментов, мало протеолитических ферметов.

Условия для заражения столбняком: рана, роды, аборты (вне медицинских учреждениях), операция, нарушения кровотока в ране, занос палочки в раневую поверхность с почвой, пылью, мед. инструментами, перевязочным материалом, перевязочным, шовным материалом.

Патогенные свойства. Патогенез заболевания.

Продукция экзотоксинов - тетаноспазмина, тетанолизина. Это белок который действует дистанционно - по нервным отросткам через аксоны попадает в ЦНС и подавляет тормозные процессы нейромедиаторов в синапсах → нарушает передачу нервных импульсов → мышечный спазм разных групп мышц. В легких случаях наблюдается сокращение мышц вокруг раны.

Столбняк у новорожденных: болеют много детей в странах где женщины рожают без медицинской помощи и перерезание пуповины делается не стерильными предметами.

Клинические формы столбняка: учеловека нисходящий - первыми вовлекаются процессы головы, столбняка, верхних конечностей, затем нижных конечностей. У животных восходящий харакетер.

Лабораторная диагностика.

Бактериологический метод. На исследования берут шовный материал, перевязочный материал, препараты для парентерального введения, образцы почвы. Засевают в анаэробные среды (Кита-Тороции) культивируют в условиях анаэростата 2-3 дня, затем проверяют на стерильность (помутнение, газообразование). Материал от больного берут редко т.к. и так видно что это столбнях, но могут взять кровь, ликвор, содержимое раны. В материале ищут сам возбудитель, а могут искать токсины с помощью биологической пробы на мышах одновремнно водят противостолбнячный анатоксин → мышка выживет, и не вводят анатоксин → мышка умирает.

Профилактика.

Экстренная: проводится в случае травмы, ранений, криминальных абортов. Включает ПХО раны, затем вводится АС-анатоксина (для активной профилактики), введение противостолбнячной сыворотки, противостолбнячного иммуноглобулина (готовые антитоксины - для пассивной иммунизации), проводится избирательно под контролем антитоксического иммунитета - делается с помощью реакции пассивной гемагглютинации у пациента. У взрослых 0,2 мл крови из пальца. Если РПГА + в соотношении 1:20 означает нормальный защитный титр. Если титр снижен, вводят вторые два препарата.

Плановая: обязательная иммунизация всех детей с трех месяцев до 17 лет. У взрослых иммунизируются военнослужащих, работники МЧС, пожарники, шахтеры.

Столбняк управляемая инфекция и заболеть столбняком неприлично. Болеют им только те кто не обращается к врачам.

ГАЗОВАЯ ГАНГРЕНА.

(клостридиальный мионекроз, клостридиальный целлюлит)

ГГ - острое инфекционное заболевание полимикробной природы с тяжелой интоксикацией организма с некрозом ткани и образованием газов в мягких тканях.

Возбудители.. pefringes, C. septicum, C. hovyi. Г+ палочки, дифференцируются по положению споры, наличию жгутиков, капсулообразованию, и продукции типоспецифических токсинов. Перекрестного иммунитета нет.

Возбудитель в споровой форме попадает через раны глубокие, тампонированные, сдавлением мягких тканей, осколочные раны, при которых ПХО произведено после 2-х часов после получения.

Факторы патогенности: продукция экзотоксинов (12 штук) - имеют свойство форментов (фосфолипазы, протеазы). Носят названия по буквам греческого алфавита. Главным из них является токсин α - обладает свойством лецитиназы → действует на клеточную мембрану нарушая ее проницаемость. Другие токсины вызывают отек, третье некроз. Действуют местно на ткань. Интоксикация связана с распадом тканей.

Иммунитет.

Носит антитоксический характер (а не на возбудитель). Типоспецифичен, ненапряженный.

Лабораторная диагностика.

Материал: содержимое раны, кусочки пораженных органов и тканей

Метод: бактериоскопия - Г+ палочки, бактериологический: посев среды, биохимические тесты (створаживание молока, колонии черного цвета). Дифференцировка внутри рода по биологической пробе с фильтратом культуры содержащей экзотоксин и антитоксической сывороткой соответствующего возбудителя. Это надо ни сколько для диагноза, сколько для лечения.

Лечение.

Специфическое: срочное введение противогангренозной сыворотки (поли или моновалентной).

Хирургическое: ведение раны открытым способом, помещение в барокамеру, антибиотики

Профилактика.

Плановая: секста-анатоксин (перфрингинс, септикум, нови, тетанис, ботулинум, дефицилле).

БОТУЛИЗМ.

Пищевая инфекция, факторы передачи - консервированный продукты мясного происхождения, рыбного происхождения, консервированные грибы.

Факторы патогенности: продукция ботулотоксина (самый сильный яд) разовая доза 0,001 мг. Действует исключительно на нервную систему, устойчив к действию пищеварительных ферментов, температуре. Есть 7 вариантов токсина (по буквам латинского алфавита), некоторые устойчивы к пищеварительным ферментам и бактериальным протеазам. Есть штаммы токсина которые разрушаются ферментами. У токсина высокие имуногенные свойства. Активируются трипсином желудочного сока, протеазами пищевых продуктов. Действуют в нервных синапсах где фиксируются и их раздражают. Чаще всего поражают глазодвигательный нерв, языкоглоточный нерв, зрительный нерв → куриная слепота, птоз, анизаккария.

Клинические формы: гастроэнтеритическая, нервно-паралитическая, неврологическая.

Лабораторная диагностика: обнаружение токсина в материале от больного (промывные воды желудка, крвоь) и пищевых консервированных продуктов в биологической пробе на мышах с помощью нейстрализации токсина.

Лечение: введение антиботулитической сыворотки

Профилактика: правильное консервирование пищевых продуктов.

Неклостридиальная анаэробная инфекция.

Вызывается представителями следующих родов:

Вид	Рода
Bacteroides	B. fragilis B. urealyticus
Porphyromonas	P. gingivalis P. endontales
Prevotella	P. melaninogenica
Fusobacterium	F. haerophorum

Носит эндогенный характер т.к. все представители входят в сосав нормальной микрофлоры тела человека (обитают в ЖКТ, ротовая полость).

Условия для возникновения инфекций:

·        Нарушение целостности слизистых оболочек и такней, при этом микробы из мест естественного обитания переходят в ткани

·        Нарушение кровоснабжения тканей → при синдроме сдавливания

·        Раковая опухоль, прорастание ее → повреждение оболочек

·        Диабет

·        Имунодефицитные состояние

·        Химиотерапия (цитостатики)

·        Лечение гормонами

·        Облучение

·        Дизбактериоз

Клинические особенности.

1.      Носит гнойновоспалительный характер и проявляется в виде абсцессов, инфильтратов

2.      располагается вблизи мест естественного обитания возбудителей

.        Гнилостный характер поражение, омертвение тканей. Гнилостный запах экссудата → продукции большого количества летучих жирных кислот

.        Экссудат окрашен в черный, красный цвет

.        Газообразование

.        Тяжелое состояние больного, не видно очага инфекции

.        Инфекция должна лечится особыми антибиотиками (пенициллинами не лечится)

Лабораторная диагностика.

Бактериологический - очень трудный, дорогой, трудоемкий результат через 7-14 дней. Забор материала берут методом аспирации или пункцией соблюдая правило - материал не должен соприкасаться с кислородом воздуха. Питательные среды - сложного состава сывороточные, кровяные среды + факторы роста + витамины + адсорбенты. Культивируют в анаэростатах в присутствии повышенного содержания СО₂, при температуре 37. Выросшая колония пигментирована (черный, серый), флюорисцируют, морфологическая идентификация не информативна (палочки, полиморфные, спору не образуют), исключение Fusobacterium - веретено. Основной метод - культуральные ососбенности: B. fragilis культивируются в присутвиии 40% желчи, в средах с антибиотиками (канамицин) растут B. Fragilis, а B. urealyticus не растут в среде с ванкомицином. По отношению к углеводам B. Fragilis - сбраживают углеводы с образованием жирных кислот, B. Urealyticus не сбраживают углеводы. Антигенные свойства изучить с помощью диагностических сувороток невозможно - их нет.

Лечение.

Химиотерапевтические препараты относящиеся к груме метранидазола или препараты нитроимидазольного ряда, из антибиотиков клиндомицин. Улучшение микроциркуляции тканей, создание аэробных условий, оксигенация раны.

Профилактика.

Специфической нет.

тема: Коринобактерии, общая характеристика. Возбудитель дифтерии.

Род Corynobacterum, отдельного семейства нет, порядок: Actinomecitales. Внутри рода видов более 20. Виды имеющие наиболее медицинское значение: C. Diphteriae, pseudodiphteriae, haemiliticum, xerosis, pseudotubercullosis, ulcerens и т.д.

Общая характеристика.

Палочковидные, имеют утолщение на одном или обоих концах неподвижные, имеют микрокапсулу, в клеточной стенке имеют специфические липиды (кориномиколовая кислота), кислотонейстойчивые. Широко распространены в окружающей среде. Существуют виды которые обитают на теле человека, входят в состав нормальной микрофлоры (кожа, носоглотка), животных, растений.

Среди коринобакетрий есть патогенные - дифтерия, условнопатогенные - язвенное поражение (ulcerens), конъюнкивиты (xerosis), циститы, сапрофитические.

C. Diphteriae

Возбудитель дифтерии - острого инфекционного заболевания, которое проявляется глубокой интоксикацией организма, свзанной с дифтерийным токсином и фиброзным воспалением в месте нахожденийния возбудителя. Название болезни от греческого diphtera - пленка. Возбудитель открыт Клебсом в дифтерийнфх пленках. Леффлер в 1884 году вывел в чистой культуре (BL - бактерия леффлера). Ру в 1888 году обнаружил экзотоксин и предложил питательную среду для культивирования. Беринг в 1892 году получил антитоксическую сыворотку от больных и предложил для лечения (получил Нобелевскую премию). Рамон в 1923 году разработал метод получения дифтерийного анатоксина.

Вид	Биовары	Продукция токсина
C. Diphteriae	Gravis	+/-
	Mitis	+/-
	Intermtdius	+/-
	belfenti	-

Токсинообразование у возбудителя кодируется специфическим геном, который находится в составе плазмиды умеренного фага, а не в составе геном клетки → не является постоянным. Если культура лизогенная (в составе есть фаг) → токсигенная.

Морфологические особенности.

Палочки, Г+, располагаются под углом друг к другу, имеют зерна волютина по концам → для выяления зерен волютина красят по методу Нейсера (зерна черные, палочки желтые), простой метиленовой синькой (зерна красные, палочки синие).

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы. Среды - на простых не растет. Группы сред:

·        Сывороточные: среда Ру, среда Леффлера - рост коринобактерий опережает все другие бактерии.

·        Среды с теллуритом (элективная) - ингибирует рот других микробов - кровяно-теллуритовые среда Клауберга, шоколадный агар (агар + гемолизированные эритроциты) gravis дает R коллонии, mitis - дает гладкие среды

·        Среди с добавлением цистиина - среда Тинсдаля

Микроорганизмы растут в присутствии пептонов (не целого белка), аминопептонов с обязательными добавками факторов роста (соли железа, цинка, витамины).

Биохимические свойства.

Сахароза -

Мальтоза +

Глюкоза +

Крахмал +

Уреаза -

Цистиназа +

Сероводород +

Индол -

Факторы патогенности.

Продукция дифтерийного гистотоксина - оказывает ядовитое действие на многие типы тканей - специфически блокирует синтез белка в различных клетках особенно тех органов которые интенсивно снабжаются кровью (ССС, миокард, ПНС, ЦНС, почки, надпочечники) является истинным экзотоксин - имуногенный белок, термолябильны, высокотоксичный из гистотоксина можно получить анатоксин с помощью обработки 0,4% формалином при температе 40 в течении 4-х недель, теряет ядовитые действия, но сохраняет имуногенные свойства. Действие токсина обусловлено 2-мя фракциями А и Б. Фракция А - истинный токсин, способна проникать внутрь клетки и инактивировать фактор элонгации 2, который ответственен за удлинение полипептидной цепи на рибосомах, действует только внутри клетки → не может нейтрализоваться дифтерийной сывороткой → эффект действует на ранних стадиях (первые 3 дня). Фракция Б участвует в фиксации токсина на рецепторах клетки и выполняет трансмембранную фнкцию, сама токсином не является. На многослойном эпителии гистотоксин вызывает дифтеритическую (фибринозную) форму воспаления, которая проявляется в виде образования пленки из фибрина. Пленка плотно срастается с подлежащими тканями. На однослойном и циллиндричском эпителии вызывает крупозное воспаление.

Поверхносные структуры бактериальной клетки липидной и белковой природы - помагает прилипать к ткани и поэтому они называются факторами слияния.

Ферменты адгезии и инвазии - нейроамидаза, гиалуронидаза

Токсионообразование - гемотоксин, дермотоксин, некротоксин, нейротоксин.

Патогенез дифтерии.

Источник: больной человек, бактерионоситель токсигенных штаммов.

Пути передачи: воздушно-капельный, контактно-бытовой, сохраняется 15-20 суток, в аэрозольном виде до 6 месяцев, в воде в течении недели, пищевой, водный

Входные ворота: слизистые зева, носа, глаз, половых органов, раневая поверхность.

Инкубационный период: 2-10 дней (продукция токсинов → фибринозное воспаление у входных ворот → сужение дыхательный путей → одышка)

Клинические формы: дифтерия зева - локализованная, распространенная, токсическая (отек от шеи до ключиц). Дифтерия гортани (круп) - стеноз, асфиксия.

Осложнение: миокардиты, невриты, нефроз

Лабараторная диагностика.

Основной метод: бактериологический.

Материал: двумя стерильными тампонами из зева и носа

Первичный посев: среда Клауберга, сывороточные среды

Идентификация:

·   По морфологии: форма, зерна волютина

·        По б/х свойствам: глюкоза, сахароза, цистиназа, уреаза …

Определение токсигенности: реакция преципитации в агаре, геле с помощью антитоксической противодифтерийной сывороткой, ИФА, на клеточной культуре тканей, ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Лечение и профилактика: см. календарь прививок, методичка

10. Микобактерии. Общая характеристика. Возбудители туберкулеза, туберкулез, лабораторная диагностика, профилактика. Микобактерии лепры, лабораторная диагностика

Классификация.

Порядок: Actinimicetalis

Семейство: Micobacteriacae, Actinomicetae, Streptomicetae

Род: Micobacterium

Вид: M. tuberculosis, M. bovis, M. africanus (возбудители туберкулеза человека), M, leprae (возбудители лепры у человека) (более 160).

Другие микобактерии: не туберкулезные микобактерии (НТМБ) - xenopi, ulcerens, micoti, folturitum, avium (вызывают микобактериозы - кожи, с/о, суставов, лимфотических узлов), smegmatis (сапрофит).

Экология.

Широко распространены в окружающей среде - почве, среде, растениях. Есть высокопатогенные, условнопатогенные, сапрофиты.

Особенности микобактерий.

Особый химический состав микобактерий: много липидов, жиров, воска, жирных кислот (миколовая, фтиоидная, туберкулиностеариновая).

Биосвойства микобактерий:

·        Устойчивость к кислотам, щелочам, спиртам

·        Трудно окрашиваются обычными красителями, красятся концентрированными красками с подогреванием

·        Методы выявления - окраска по Циль-Нильсону

·        Высокорезистентны в окружающей среде (в мокроте до нескольких недель)

·        Особые патогенные свойства: нет адгезинов, истинных токсинов, ферментов патогенности. Сами компоненты клеточной стенки и цитоплазмы (миколовая, фтиоидная кислота, фракции липидов) оказывают токсическое действие на ткани и ткань образует специфическую гранулему. Главный фактор гликолипид или "корд-фактор", который является токсическим с помощью этого фактора микобактерии присоединяются к ткани и связывается с ней, защищаются от фагоцитоза, блокирует процессы окислительного фосфолирирования в митохондриях. КФ прежде всего поражает макрофаги т.к. в нем не переваривается. Микобактерии вызывают ответную реакцию иммунной системы в виде ГЗТ.

Классификация микобактерий по Району.

По патогенности:

·        Патогенные

·        Условно-патогенные

·        Сапрофитические

По скорости роста:

·        Быстрорастущие (колонии до 7 дня) - smegmatis и еще 17

·        Медленнорастущие (через 2 и более недели до 6 месяцев) - M. tuberculosis, M. bovis, M. Africanus и еще 17

·        Не растущие - M, leprae (культивируется только на броненосцах)

По способности к образованию пигментов:

·        Фотохромогенные (на свету)

·        Скотохромогенные (на свету и в темноте)

По способности к синтезу никотиновой кислоты:

·   Положительные - M. tuberculosis

·        Отрицательные - M. Bovis

Возбудители туберкулеза.

M. tuberculosis открыт Кохом в 1882 году. Носит название ВК - бактерия Коха.

Морфологические свойства.

Прямые или изогнутые палочки, M. Bovis - толстенькие короткие, M. Avium - длинные цепочкой. Напоминают мицелий гриба. Спор -, капсулы нет, жгутиков нет. Морфологически изменчив под действием лекарств - может переходить в кокковые формы. Кислото, щелоче - устойчивы. Хорошо красится флюорохромными красителями ауронином, родомином → можно обнаружить с помощью прямой флюоресценции.

Культуральные свойства.

Аэробы, факультативные анаэробы, размножаются медленно - скорость деления 14-18 часов → колонии мы увидим через несколько недель.

Питательные среды:

·        глицериновые, картофельно-глицериновые

·        яичные среды (Левейнштейна-Иенсена) + железо, фосфор, сера, факторы роста (биотин, никотиновая кислота, незаминимые аминокислоты)

·        синтетические, полусинтетические

Характер роста: единичные колонии, морщинистые, пигментированные, крошатся, трещат при прокаливании

Резистентность: быстро вырабатывается ко многим препаратам благодаря R-плазмиде. Устойчивость есть первичная (у микобактерий выделенных от больных которые никогда не лечились), вторичная (формируется в процессе лечения и составляет).

Патогенез. Клиника.

Источник инфекции: больные БК⁺ - открытой формы (очаг поражения дренируется черед дыхательные пути и выделяется с мокротой, больные животные (коровы, козы, овцы)

Пути передачи: воздушно-капельные, воздушно - пылевой (аэрогенный), алиментарный

Первичная встреча человека с микобактерией не вседа ведет к туберкулезу может быть инфицированность (благоприятный исход), а может быть болезнь

Ответная реакция организма: развитие первичного аффекта (первичного туберкулезного комплекса) - образование в месте внедрения туберкулезного бугорка → ответная реакция первичного лимфатического узла → образование дорожки соединяющий первичный эффект с узлом → первичная гранулема. → в месте образования гранулемы в центре развивается некроз, который в дальнейшем замещается фиброзной тканью с отложением солей кальция.

Строение туберкулезной гранулемы: центр некроз, периферия эпителиоидные клетки с микобактериями внутри, кнаружи лимфоциты (Т-хелкперы1, макрофаги, поазматические клетки), между ними клетки Пирагова-Ланханса. Гранулема является клеточной формой иммунного ответа организма направленной на отграничение микобактерий от других тканей. Гранулема защищает от реинфекции, возбудитель может в ней долго персистировать.

Процесс инфицирование происходит в детстве и в корнях легких есть очаги туберкулеза. Инфицированный ребенок становится Манту⁺ у части инфицированных наступает заболевание → возбудители дают первичные очаги отсева и дает клинические проявления болезни. У части пациентов из первичного очага может наступить реактивация бактерий - эндогенное развитие туберкулеза. Заболевание связывают либо с суперинфицированием либо снижением защитных сил организма (подростковый возраст, беременность).

Туберкулез - хроническая инфекция, которая проявляется кашлем, температурой, кровохарканьем, снижением массы тела. В тяжелых случаях развития милиарного туберкулеза (попадает в кровь) клинические симптомы появляется со стороны пораженных органов (легкие, мозг, кости).

Клинические формы туберкулеза.

1.      Туберкулезная интоксикация (детей и подростов - объектов первичного инфицирование) - выявляется реакцией манту.

2.      Туберкулез органов дыхания (первичный, поражение узлов, поражение плевры, очаговый, инфильтративный, кавернозный, фибрознокавернозный, циротический, туберкулема) - диагностируют рентгеном, томографией

.        Туберкулез жругих органов и систем - туберкулезный менингит, туберкулез глаз, брюшины, кожи, мочеполовой системы

Лабораторная диагностика.

Необходима для определения фазы процесса (БК⁺, БК^-) и определения чуствительности к противотуберкулезным препаратам.

·        Физикальное обследование - перкуссия, аускульаиця

·        Рентгеновское обследование

·        Микроскопия патологического материала мокроты окрашенной по Циль-Нильсену (бактериоскопия)

ü  прямая - позволяет обнаружить бактерии если их концентрация 10 000 и выше

ü  обогощение - гомогенизируют, центрифугируют → ↑ концентрация или добавление стерильной воды и ПАВ (ксилол)→трясут → на ксилоле адсорбируются микобактерии → отстаивают → красят

ü  люминесцентная микроскопия - добавляют родомин → трясут→микобактерии связываются с родомином → смотрим в люминесцентный микроскоп

·        Бактриологический: суточная мокрота + кислота (убиваются другие микробы) → +щелочь → засевание на среды (картофельно-глицериновый агар, Ливенштейна-Ленсана и т.д) → в термостат на несколько недель → идентификация: миациновая проба, культуральные особенности → проверка патогенности на морских свинках (tuberculosis) и кроликах (bovis) → проверка чувствительности к антибиотикам.

·        Ускоренная диагностика:

ü  Метод микрокультур по Прайсу - мазок опускают в цитратную кровь если есть микобактерии они дают микроколлонию на стекле → через 5-7 дней красят по Ц-Н

ü  РИФ с использованием моноклональных антител

ü  Лазерная флюоресценция

ü  Микробиочипы

ü  ПЦР

·        Аллергический метод: введение туберкулина строго внутрикожно в среднюю треть предплечья туберкулина. Положительный результат: лимонная корочка. Разновидности туберкулина: Коха, очищенный туберкулин сухой, очищенный туберкулин в стандартном разведении (в 0,1 мл 2 ТЕ), РРД (туберкулин-протеин-дериват). Пробы есть: внутрикожная манту, накожная пирке, градуированный тест.

Реакцию манту ставят для выявления инфицированных детей и подростков. Для отбора лиц ревакцинируемых БЦЖ, выявление состояния инфицированности у всего населения. Детям с 3-х летнего возраста.

Вирах туберкулиновой пробы - впервые выявленная положительная реакция - свидетельсвует об инфицированности.

Увеличение реакции на 5-8 мм является показанием для направления в тубдиспансер.

Учет результатов 48 часов. По диаметру папулы.

·        5 мм и более - реакция Манту положительна - у инфицированных лиц, больных туберкулезом, у лиц вакцинированных БЦЖ.

·        Менее 5 мм - отрицательная

Иммунитет: клеточный (ГЗТ). Вакцинация проводится вакциной БЦЖ - живая с ославбенными свойствами содержит бактерии Кольмет - Жерена, которые выращиваются на глицериновом бульоне с добавлением желчи. Вводится внутрикожно на 3-5 день от рождения в область левого плеча. На месте вакцинации образуется инфильтрат, через 2-3 месяца возрастает, на 8 месяц вскрывается и из нее выделяются некротические массы и образуется фиброз. Если это произошло то БЦЖ+ - реакция нормальная. Создается искусственный, клеточный, активный, нестерильный иммунитет - гарантии защиты от туберкулеза нет. Защищен от первичного инфицирования и от развития генерализованных форм у детей.

Лечение: спецйиальными противотуберкулезными препаратами - изобутон, изаниазид.

Род M. leprae

. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Actinomycetalis, гр. VI. Актиномицеты и родственные микробы, Mycobacteriaceae, р. Mycobacterium, M. leprae.

. Морфология: Гр+, палочка, прямая или слегка изогнутая. Внутри клеток образуют лепрозные шары ("пачка сигарет"). Кислотоустойчивые.

. Тип питания: хемоорганотроф, АЭР

. Биологические свойства:

а) на искусственных питательных средах не культивируются

. АГ структура: группоспецифический полисахаридный и белковый АГ

. Факторы патогенности и патогенез:

Структуры клеточных оболочек обеспечивают кислотоустойчивость, антифагоцитарные свойства, адъювантные свойства, вызывают ГЗТ (миколовые к-ты, воска КС, арабиногалактан, миколат трегалозы - корд-фактор).

Внедрение в кожу и слизистую ВДП ® попадают в нервные окончания, лимфатическую и кровеносную системы ® медленно диссеминируют.

. Клинические проявления: Формы: лепроматозная (наиболее тяжелая), туберкулоидная. Гипопигментация или очаги покраснения (леприды) с потерей чувствительности, невриты с неравномерным утолщением нервных стволов, положительные кожные мазки на кислотоустойчивость МБ.

. Иммунитет: У больных лепрой выявляется дефект КИО. Степень его поражения отражает реакция Мицуды (с лепромином).

. Эпидемиология. Антропонозная инфекция. Источник - больной человек. ОПЗ - длительный контакт с больным.

. Профилактика: вакцина отсутствует.

. Лечение: сульфоновые препараты, противотуберкулезные препараты (рифампицин), десенсибилизирующие средства и биостимуляторы.

. Диагностика:

Материал: соскобы с пораженных участков кожи и слизистых.

. Бактериоскопия: мазок по Цилю-Нильсену. В положительном случае - внутриклеточное расположение микобактерии в виде скоплений красных палочек ("пачка сигар"), коккобацилл и шаров.

. Биопроба: на броненосцах (в тканях образуются лепромы - множественные узелки)

. Постановка аллергической пробы с лепромином. Через двое суток после введения - эритема и небольшая папула. Характерна для больных туберкулоидной формой лепры.

11. Патогенные спирохеты. Медицинское значение

Порядок: Spirochitales

Семейство: Spirochitacie

Рода: Treponema, Borrelia, Leptospira

Виды: Tr. Pallidum (сифилис), B. burgdorferi (клещевого борелиоза), L.interogans (180 сероваров - L. grippotyphosia, Pomona)

Общая характеристика.

Извитые, нитевидной формы, имеющие завитки закрученные вокруг оси, подвижные за счет специального локомоторного устройства заложенного внутри тела.

Распространены в природе, хорошо выжывают воде, почве. Входят в состав нормальной микрофлоры тела человека рта (Tr. Danticola), животных (крупных, грызунов, насекомых).

Сложно культивируются в лабораторных условиях. Красят по Романовскому-Гимзе. Разные спирохеты красятся по разному (фиолетовый, розовый).

Методы изучения: темнопольная микроскопия, фазовоконтрастная, световая микроскопия.

Между собой дифференцируются по наличию и характеру завитков, по характеру движений, по методу окраски.

Tr. pallidum.

Открыт в 1905 году Шаудином и Гофманом. Заболевание известно с древних времен. Термин ввел Фрокастро в 1530 году. Термин Lues - зараза применил Рабле в 1558 году.

Имеет 8 - 12 равномерных завитков, красится бледно-розово, совершает плавные нежные движения (винтообразные, матникообразные, вперед-назад). Не культивируется на средах. Используют биологические модели (обезьяны, яички кролика - тестикулярная культура) используьт для получения ультраозвученного трепонемного антигена - для постановки диагностических реакций. Во внешней среде не устойчива, моментальная гибель при высушивании.

Сифилис - хроническое венерическое заболевание с циклическим течением.

Пути передачи: половой, вертикальный, трансфузионный

Патогенез.

Источник: человек во второй период заболевания (ну в другие периоды тоже)

Входные ворота: слизистые оболочки влагалища, рта, прямой кишки

Инкубационный период: 3 недели

Начало: в месте входя твердый шанкр - язвочка дефект ткани величиной с просяное зернышко, множественные шанкры (многократное поступление возбудителей). Язва чистая, безболезненная, температуры нет. Регионарный лимфоаденит. Продолжительность 2-6 недель, язвочки эпителизируются.

Второй период: гнерализованная форма инфекционного процесса. Микроб попал в кровь и лимфу и циркулирует по органам и тканям вызывая ответную реакцию орагнизма. Может быть латентным, рецедивным, бессимптомным. Продолжительность 3-4 года. Больной максимально заразен. Клинически ответная реакция кожи: сыпь, везикулярная сыпь на лице (корона Венеры), выпадение волос, нарушение пигментации кожи. Иногда бессимптомный вторичный период длится десятки лет.

Третий период: сопровождается образованием инфильтратов в различных органах и тканях (носовая перегородка, твердое небо, аорта, хрящи, головного мозга). Выздоровление не наступает. Гуммы склонны изъязвляется и это сопровождается носовой перегородки, развивается параличи, слабоумия

Лабораторная диагностика.

Бактериоскопический (1 период):

−       Материал: содержимое шанкра (тканевая жидкость)

−       Окраска: серебрение, Романовскому-гимзе

Серологический метод (2 период): обнаружение в сыворотке больного антител с помощью комплекса серологических реакций.

−       Профилактические реакции: МПЦ, реакция связывания комплемента (RW) - обследуются все госпитализированные, медработники, работники психушек

−       Диагностические: РСК с 2-3-мя антигенами, РИФ - со взвесью культуры выращенной на яичке, обрабатывают сывороткой пациента, что бы точнее поставить диагноз, РИБТ (реакция идентификация бледной трепанемы) - взвесь живой культуры+сыворотка больного+комплемент → висячая капля→смотрим количество обездвиженных трепонем, РНГА, ИФА - готовится с трепонемным ультраозвученным антигеном+сыворотка больного

Генетические тесты: обнаружение в исследуемом материале ДНК бледной трепонемы - ПМП (ставится с кровью на стекле + кардиолипиновый антиген (антиген полученный из ткани мышцы сердца - общий антиген с трепонемой).

Профилактика.

Безопасный секс.

Лаймоборелиоз.

Передается только клещами (иксодовыми). В месте укуса развивается клещевая мигрирующая эритема. Поражение ЦНС, ССС.

Лабораторная диагностика: РИФ

тема: Риккетсии, эрлихии, бартонеллы, косиеллы, ориенсии

Порядок: Rikketsiales

Род: bartonella, erlichia, ricettsia

Вид: B. henseale, E. phagocytophica, R. prowazeki, R. typhi

Порядок: Legionella

Род: Coxiella

Вид: C. burneti

Риккетсии.

Общие свойства.

Прокариоты. Маленьких размеров, абсолютные внутриклеточные паразиты, высокопатогенны для животных (диких и домашних), насекомых (клещи, вши, блохи). Передаются трансмессивным путем через укусы. Заболевания носят природноочаговый характер. Экология: возбудители сохраняются либо в организме животных либо насекомых. Во внешней среде устойчивы.

Род Rikketsia.

Имеет всего около 200 видов, наиболее важные R. Prowazeki, R. typhi

Общее положение.

Название от имени Рикетса, обнаружены 1909 при изучении "лихорадки скалистых гор". П. Ф Здродовский - основоположник учения о риккетсиах и риккетсиозов.

Морфологические свойства.

Маленькие полиморфные (кокки палочки, нитевидные), спор нет, капсул нет. По б/х неактивны. Методы изучения: окарска по Грамму (-), но лучше по Здродовскому и Романовскому-Гимзе. В природе имеют природные резервуары.

Риккетсиозы.

Группы:

1.      Сыпного тифа: вшивого, крысиного

2.      Группа лихорадок: пятнистая, скалистых гор, дальневосточная, цуцугамуши

Классификация вклучает наименование группы заболевания, возбудителя, особенности паразитирования, переносчик, источник и наименование заболевания.

Вшивый эпидемический сыпной тиф.

Имеет острую эпидимическую форму.

Переносчик: человеческая вошь (головная, лобковая, платяная)

Возбудитель: R. Prowazeki

Источник: больной человек

Путь передачи: трансмиссивный

Механизм переноса: больной человек → вошь → размножается в эпителии кишечника → заразна через 5 дней → здоровый человек (кусает) → фекалии в месте укуса → человек расчесывает место укуса → занос клеток кишечника вместе с риккетсиями

Инкубационный период: от 2 до 4 недель

Патогенез: риккетсии размножаются в эндотелии мелких сосудов (головного мозга) → развивается тифозный статус → ответная реакция сосудов → васкулит, сыпнотифозная гранулема, сужение просвета сосуда → гипоксемия тканей

Клинические симптомы: лихорадка, сыпь, гиперемия кожных покровов, головная боль, галлюцинации, неадекватные поступки, некротические изменения (гангрена кончика языка, пальцев, ушей), миалгия.

Лабораторная диагностика.

Серологический: берется сыворотка → ищут антитела

·        Реакция Вейля-Феликса - РА с сывороткой больного и proteus ОХ₁₉ (имеют общие антигены с риккетсиями

·        РА с сывороткой больного и специфическим риккетсиозным антигеном

·        РСК должна быть положительная в разведении 1/160 и выше

·        РНГА с эритроцитарным риккетсиозым диагностикумом, положительный титр 1/1000

·        ИФА

·        Генетические методы - ищут ДНК возбудителя

Бактериологический: культивируется на клеточной культуре ткани, курином эмбрионе, организме вшей (только в специальных лабораториях).

Профилактика.

Борьба с педикулезом. Сыпнотифозная живая вакцина, химическая сыпнотифозная вакцина - применяются по эпидпоказаниями.

Повторный сыпной тиф (болезнь Бриля)

Возникает у переболевших в прошлом (5-50 лет) сыпным тифом. Возбудитель способен длительно персистировать в чувствительных клетках. Возникает у лиц преклонного возраста. Педикулеза у них и окружающих нет. Носит доброкачественный характер. Имеет стертую картину. Лабораторная диагностика такая же, но при этом надо не только обнаружить нарастание титра антител, но и к какому классу иммуноглобулинов относятся эти антитела. Если относятся к IgМ - это первичный сыпной тиф, если IgG - это вторичный. Дифференцировать эти антитела можно путем обработки сыворотки меркаптоэтанолом (цистеин) - разрушает IgM.

Коксиелезы.

Род Coxiella

Лихорадка - Qu

В переводе - неясная лихорадка. Открыт в Австралии, вызывает зоонозную инфекцию, патогенен для животных (КРС, МРС, грызуны).

Возбудитель - C. Burneti.

Переносчик: клещи иксодовые, гамазовые, аргазовые

Пути передачи: трансмиссивный, пылевой, пищевой

Группы риска: работающие с шерстью

Формы: острая, хроническая, рецидивирующая

Острая - мышечные боли, кашель, потливость

Хроническая - поражение ССС, миокардиты, сыпь, поражение суставов

Лабораторная диагностика.

Серологический:

·   РСК с сывороткой больного

·        РНГА - с сывороткой больного

·        ИФА

Профилактика.

Выявление больных животных. Живая коксиелезная вакцина (из C. Burneti) - дают по эпид.показаниям.

12. Хламидии

Семейство: Chlomidiacae

Род: Chlamidia, chlamidophilae

Вид:

Ch. Trachomatis (18 сероваров) А, В, В_α, С - трахома, конъюнктивит новорожденных; Д, К - урогенитальный хламидиоз, конъюнктивы новорожденных, пневмония новорожденных, поражение сусавов; L - вкнерическая лимфогранулема.)

Chlamidophilae pneumonia - заболевания ВДП, атеросклероз, бронхиальная астма

Chlamidophilae psittaci - орнитоз (гриппоподобная пневмония у человека и животных)

Общие свойства.

Прокариоты, маленьких разеров, облигатные внутриклеточные паразиты, спор не образуют, капсулы нет, жгутиков нет, на средах не культивируются, обладают уникальным циклом развития.

Пути передачи: контактно-бытовой, перинатальный, половой; Chlamidophilae - воздушнокапельный

Проявления: специфическое воспаление (некротизирование и замещение рубцовой тканью)

Цикл развития.

Элементраное тельце адсорбируется на клетках эпителия → погружается в клетку → начинает размножаться → превращается в ретикулярное тельце → делится и образует внутри эпителия колонии → происходит накопление гликогена в клетки (продукты метаболизма хламидий у других не будет) → клетка разрывается и ретикулярные тельца преаращаются в элементарные.

Лабораторная диагностика.

Бактериоскопический:

Материал: соскоб пораженных с/о

Окраска: по Романовскому-Гимзе

Серологический:

·        ИФА - обнаружение специфических антигенов

·        РИФ

·        РНГА

Генетический:

·        ПЦР

Бактериологический: заражение клеточной культуры тканей (Мак-Кое)

Лечение.

Фторхинолоны, к пенициллинам не чувствительны.

Профилактика.

Гигиена, безопасный секс, обследования.

13. Микоплазмы

. pneumonae, M. genitalium, M. Hominis, M. fermentalis urealiticum

Широко распространены в природе. Входят в состав норматной микрофлоры человека, животных, имеют медицинское значение. Всего видов около 70. Способны вызывать заболевание у человека, животных, растений. Заражают клеточные культуры тканей.

Общая характеристика.

Очень маленькие прокариоты. Не имеют клеточной стенки - их относят к классу malicutaes. Морфология полиморфная - сферическая, вытянутые, нитевидные. Цитоплазматическая мембрана трехслойная. Способны размножаться на искусственных питательных средах, но там должен быть холестерин, витамины, факторы роста, белок. Дают маленькую колонию в виде яичницы. Мембранные паразиты - способны адсорбироваться на клеточной мембране из этой клетки получать холестерин, другие стеролы.

Во внешне среде неустойчивы, легко погибают, сохраняются в изотонических растворах, устойчивы к антибиотикам пенициллинового ряда. Красятся по Романовскому-Гимзе, Грамму (-). Нет спор, жгутиков, но могут скользить.

Передаются воздушно-капельным путем, через плаценту, половым путем. Вызывают острую инфекцию и хроническую.

M. pneumonae - респираторные заболевания, атипичную пневмонию, главный фактор патогенности адгезины, гемотоксины, эндотоксины, нарушают клеточные мембраны. Вызывает артриты, кожные поражения - за счет ГЗТ и аутоиммунных поражений. Гемолитическая анемия - аутоиммунная, нарушение оболочки эритроцитов. Проходят через ГЭБ

M. genitalium, M. Hominis, M. Fermentalis, Ureaplasma urealiticum - поражение урогенитального тракта, поражают сперматозоиды → нарушение андрогенной функции. Вызывают циститы, вагинозы.

Лабораторная диагностика.

Забор материала: соскоб

Бактиериологический метод

Методы быстрой диагностики:

·        Тест на уреазу: все "-", кроме Ureaplasma urealiticum

·        Тест на углеводы: M. Fermentalis ГЛЮ+, остальные нет

·        РИФ

·        ПЦР

тема: Возбудители ОРВИ

Возбудителями ОРВИ является более 200 вирусов. Они относятся как к ДНК-вирусам - adenoviridae, и РНК - orthomyxviridae, paramyxoviridae, reovirus, coronoviridae, picormaviridae. Все вирусы тропны к клеткам продуцирующим муцин.

Вирусы гриппа.

Семейство: orthomyxviridae

Род: Influencae

В 1933 году Смитом и Эндрюсом открыт вирус гриппа А. 1940 Френсисом грипп В, в 1949 Тейлором грипп С. До этого считалось что возбудитель гемофильная палочка. Сейчас извествно три типа вирусов гриппа и несколько подтипов вируса А и В, которые способны вызывать заболевания с названием грипп. Грипп регистрируется у животных, людей. В нашей стране впервые выделен 1936 году Зильбер и Смороденцев.

Строение вириона.

Внеклеточная форма вируса - вирион. Геном вируса представлен РНК, состоящей из 8 фрагментов, которые кодируют 11 вирусных белков. РНК-минуснитевая (негативный). РНК связана с капсидными белками вокруг белков М₂-белок. Далее суперкапсид - внешняя оболочка, которая имеет выступы, которые образованы гемагглютинином (Н) и нейроамидазой (N) именно они являются антигенами. Внутренние белки определяют типоспецифичность и по нему различают А, В и С, они определятся в РСК, антитела на них не носят защитного характера. Номенклатура вируса гриппа включат: название типа вируса, основного хозяина, год выделения, географическое место выделения, антигенная форма вируса. Например вирус гриппа А (Гонконг) 1/68, Н-3, N-2.

Грипп А патогенен для человека, животных птиц. Вызыват эпидемии, пандемии. Поддипы определны по гемагглютинину и нейроамидазе. Основное биологическое свойство - выраженная антигенная изменчивость они имеет 2 механизма: 1) антигенный дрейф и в основе лежат выраженные мутации. Это не сопровождается изменением номера геммаглютинина. Длится 2-4 года 2) антигенный шифт - связан с рекомбинациями у вируса при встрече в одной клетке двух вирусов, затрагивает и гемагглютинин и нейроамидазу длится 10 лет

·  По геммаглютинину: 1-17

·        Нероамидазе: 1-10

Грипп В - патогенне для человека и животных, эпидимичен

Грипп С - только у человека регистрируется спорадически

Смена подтипа вируса сопроводжается появлением новой разновидности и это приводит в пандемическому распространению вируса грипп. Например пандемия гриппа А (Н₁ - N₁) 1918 -20 - погибло 20 млн. человек. 1957 -58 - азиатсикй грипп А (Н₂-N₂) переболело 2 млрд. человек. 1968-70 - грипп А (Н₃, N₂) переболел 1 млрд. человек. С 1977 года на территории России циркулируют два подтипа вируса гриппа А (H₃N₂), A (Н₁ - N₁), в настоящее время появился птичий вирус гриппа - возникла угроза появления нового варианта гриппа (H₅, N₁).

Изменчивость вируса связана с фрагментарным характером его генома, и легко изменятся. Мы не можем предвидеть появление нового варианта вируса гриппа. На антигенную изменчивость влияет иммунная прослойка населения - она является вариантом отбора (одни варианты уничтожаются, другие выживают). Антигенную изменчивость вируса гриппа следует учитывать в конструировании современных вакцин. Современные вакцины включают разные антигенные структуры. Вакцины создаются из свежих вирусов.

Функции гемаглютинина:

·        Рецепторная - распознает клеточный рецептор, который имеет сиаловую кислоту и соединяется с этим рецептором

·        Агглютинирующая - агглютинирует эритроциты человека (животных, птиц) спонтанно

·        Обеспечивает слияние мембраны вириона и мембраны клетки, отвечает за проникновение вириона в клетку

·        Пандемичность

·        На него вырабатываются защитные антитела

Нероамидаза - населен свойством фермента -

·        способен отщеплять нейроминовую кислоту от мембраны клетки → отвечает за разнос вируса.

·        Совместно с гемагглютинином определяет пандемичность и эпидимичность

·        Обладает проективными свойствами

Патогенез гриппа.

Источник: больной человек, животное, птица

Пути передачи: аэрозольный

Вирус внедряется в клетку продуцирующие муцин и идет в несколько этапов и для "-"нитевых вирусов харакетрно образование иРНК за счет транскриптазы → подача сигнала на рибосомы клетки хозяина → хазяин начинает продуцировать вирусные белки. Все это требует 4-8 часов → маленький инкубационный период.

Вирус кроме ВДП может поражать альвеолы и тогда развивается острая вирусная пневмония. Из ВДП вирус легко проникает в кровь - вирусемия, дальше поражает эндотелий кровеносных сосудов и вызывает кровоизлияния в паренхиматозные органы (если в это мозг - отек - смерть).

Клинические проявления: температура, головная боль, мышечные боли, симптомы со стороны ВДП

Осложнения: характерны для ЛПВ и детей до 1 года. Пневмония, гемморагические пневмонии, отек легких, отек мозга

Вторичные осложнения: вторичная оппортунистическая инфекция → развитие вторичных иммунодефицитов

Лабораторная диагностика.

Материал: смыв из носоглотки → центрифугируется

Вирусоскопия

·        Риноцитоскопия - определение типа клеток - если много мертвых эпителиальных клеток → вирусная природа, если много фагоцитов это → бактериальная природа.

·        РИФ с момощью набора флюорисцирующих иммуноглобулинов

·        ИФА - с помощью тест системы

·        ПЦР

·        Электронная микроскопия

Вирусологический

1.      Заражение материалом человека - куриного зародыша, клеточной культуры ткани

2.      Идентификация вируса - через 3 дня

·   РГА аллантоизная жидкость + 1% эритроциты → 2 часа - склеивание в виде зонтиков

·        Обнаружение цитоподического действия на клеточную культуру ткани

3.      Идентификация вируса:

·        Нейтрализация вируса по ЦПД

·        Реакция биологической нейтрализации

Серологический - по парным сывороткам (в острый период и через 2 недели) - смотрят нарастание титра антител с помощью РСК…Во второй в 4 раза больше чем в первой.

SARS - вирус.

Тяжелый острый респираторный синдром - атипичная пневмония. Открыт в 2003 году. Относится к семейству Coronaviridae. РНК-овый вирус. Имеет суперкапсид, на нем шипики имеют форму короны. Имеет большой геном (32 000 нуклеатидных пар), не дает рекомбинаций, но мутации подвергается. Размеры вируса 50-220 нм. Вирус распространен от животных (собаки, свиньи, кошки) в 2003 году выделен от человека. Высокая контагеозность (достаточно 1 раза).

Заболевание начинает по типу ОРВИ: подъем температуры (до 2 недель) сопровождается ознобом, болями в мышцах, сухой кашель. Выздоровление наблюдается у 70%. У 30% начинаются тяжелые проявления - ТОРС.

Патогенез SARS.

Вирус способен поражать самые конечные участки бронхиального дерева. Воспалительный процесс вызывает к нарушению транспортной функции кислорода через мембрану возникает кислородное голодание. Возникает одышка, нехватки воздуха, стеснение в груди. Пациент серый. Будет атипичная интерстициальная пневмония.

Лабораторная диагностика.

Материал: смыв из бронхов, секционный материал, слизь из ВДП.

Тесты:

·        ПЦР

·        ИФА (не ранее 2 недель)

тема: Герпес - вирусы.

Семейство: Herpesviridae

Подсемейства: α, β, γ

Общая харакетристика.

ДНК-содержащие, крупных размеров (150-300 нм). Имеют суперкапсид, внешнюю оболочку, геном вируса - 2 нити ДНК, около 80 генов. В составе их капсида около 300 разных белков. Выделенно около 20 типоспецифических белков → все вирусы разделены на 5 типов.

Культивируются на курином зародыше, образую там бляшки. Культивируется на клеточной культуре ткани. Размножаясь внутри клетки оставляют включения. При культивировании на клеточной культуре образуют симпласты.

Вирусы полиорганнотропны: миксотропные, нейротропные, лимфотропные, эмбриотропные, тератогенное действие.

Вирус простого герпеса (ВПГ I). Вызывает стоматипы, поражение полости рта. Пути передачи: воздушно-капельный, перинатльный

Вирус простого герпеса тип 2 - возбудитель, полового генрпеса. Передается половым путем.

Вирус простого герпеса тип 3 (вирус ветряной оспы) - вызывает ветряную оспу у детей и зостер-инфекцию (опоясявающий лишай) сопровождается поражение по ходу нервов, передается воздушно - капельно.

Вирус Экштейн - Барра: вызывает инфекционный лимфонуклеоз, лимфому Беркитта, назофарингиальную карциному.

Вирус герпеса тип 5 (цитомегаловирус) - опасен для плода, вызывает выраженные пороки развития, вызывает поражение печени, почек, глаз, ЦНС. У взрослого может быть легкое, скрытое, течение. Клетка в которой он размножается становится гигантской клеткой с включением.

Вирус герпеса тип 6, 7, 8 - вызывают синдром хронической усталости. Поражает Т-систему иммунитета, часто сочетается с ВИЧ-инфекцией, способствует развитию злокачественных поражений.

Герпетическая инфекция склонная вызывать как острые процессы, так и хронические варианты герпетической инфекции т.к. способны длительно, латентно персистировать. Многие из вирусов (1,2 ) входят в сосав нормальной микрофлоры.

Лабораторная диагностика.

Материал: содержимое пузырьков (для всех), кровь (для 6,7,8), моча (для 5), секционный материал плода, биопсия

Методы:

·        Электронная микроскопия

·        Простая микроскопия

·        РИФ

·        Вирусологический (на курином зародыше, клеточной культуре ткани) - реакция нейтрализации, обнаружение включения вируса

·        ПЦР (для 5,6,7,8)

Профилактика.

Специфическая отсутствует. Специальные вакцины рекомендуются людям страдающим рецидивами герпетической инфекции.

Лечение.

Лечение аномальными нуклеазидами - нарушают синтез нуклеиновых кислот вируса встраиваясь в его ДНК. Это - зовиракс, ацикловир…

14. Энтеровирусы

Всего 11 семейств и более 230 представителей этой группы

Семейства: picornaviridae, flaviviridae …

Род: Enterovirus (более 70 антигенных газновидностей)

Общая характеристика.

Маленькие размеры (22-30 нм). РНК-содержащие + нитевые. Простые вирусы (нет суперкапсида), нет внешней оболочки.

Вирусы широко распространены в окружающей природе. Входят с состав нормальной микрофлоры. Паразитируют в кишечнике, выделяют с фекалиями. Являются санитарно-показательными вирусами. Во внешней среде устойчивы, устойчивы к пастерилизации, эфиру, кислоте, желчи. Передаются фекально - орально.

Культивируются на клеточных культурах первично перевиваемых тканей. Дают выраженный цитопатогенный эффект. Энтеровирусы обладают полиорганотропностью - эпителий ЖКТ, респираторный тракт, миксотропные, гепатотропные (HpА), миотропные, нейротропные.

Вирус полиомиелита I, II, III - вызывают полиомиелит - поражение серого вещества головного, спинного мозга.

Коксаки вирусы - всего 30 антигенных вариантов.

Вирусы ЭКХО - 34 типа вызывают полиомиелитоподобные заболевания селовека.

Вирусы полиомиелита.

Тип 1 патогенен для человека, обезьян, дает паралитические формы болезни. Тип 2 выделяется реже от человека, обезьян, грызунов. Дает легкие безклинические формы. Тип 3 патогенен для человека, обезьян, дает спорадические случаи. Типы отличаются по антигенам - перекрестного иммунитета не дают.

На территории США исключительно тип 1 циркулирует. Давал большой процент паралитических форм. После эпидемии выделена первая вакцина.

Патогенез.

Основной источник: больной человек, вирусоноситель

Пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой

Инкубационный период: 1-2 дня. Размножается в с/о зева (кольцо Пирогова) → РВИ (температура, кашель, раздражение)

Второй этап: проникновение в кишечник → размножение в эпителиальных клетках тонкого кишечника (боли в ЖКТ, диспепсия).

Генерализованная форма: только у 10%. Из кишечника в кровь → преодолевает ГЭБ → поражение двигательных нейронов передних рогов спинного мозга → выраженное цитопатическое действие → разрыв рефлекторной дуги → вялые параличи, нарушение движение в суставах, происходит мышечная атрофия, анкилозы → глубокая инвалидность.

Клиническеи формы.

.        Вирусоносительство

.        Гриппоподобная, кишечная форма99%

.        Менингиальная

.        Паралитическая

Лабораторная диагностика.

Материал: фекалии в течении 3 дней в стерильные флаконы, обрабатывают антибиотиками, центрифугируют, надосадочной жидкостью заражают клеточныю культуру тканей.

Идентификация: по выраженному ЦПД на культуре тканей, РБН

Серологический метод: РСК, РНГА

Профилактика: вакцина живая, вакцина инактивированная

Вирусы коксаки.

Выделены в США от детей с полиомиелитоподобными заболеваниями на мышах сосунках зараженных субдурально. У мышек развивались параличи. Мышечные волокна этих мышек имели другую структуру → обладают миотропность избирательно поражают мышцу сердца. Поражают маленьких детей, подростков.

Вирусы группы ЭКХО.

Кишечные, цитопатогенные вирусы человека. Животные к ним не чувствительны имеют 34 сероварианта. Наибольшую опасность 11, 12. Страдают дети менингиты, энцефалиты, изменение в мышцах, гастроэнтериты, лихорадка, сыпь.

Лабораторная диагностика.

Заражение клеточной культуры тканей → реакция нейтрализации с помощью сывороток. Исследование парных сывороток для обнаружеие антител.

Ротовирусы.

Гепатиты.

Возбудители гепатитов: HAV, HBV, HCV, HGV и др.

Гепатит - хроническое полиэтиологическое заболевание печени. Делятся на вирусные гепатиты передающиеся энтеральным путем (фекально-оральный путь) - А, Е. Пути передачи: водный, пищевой, контактно бытовой. И друая группа гепатитов - парентеральные гепатиты: В, С, G и т д. передаются через биологические жидкости.

Гепатит А.

Вирус гепатита А относится к пикорновирусам, род энтеровирусы. Устойчив во внешней среде. В отличии от других вирусов имеет выраженную гепатотропность. Не культивируется на клеточных культрах тканей, единственная для неко ткань - культура с гепатокарциномы. ЦПД не дает. Вызывает заболевание гепатит - имеет эпидимичекий характер и сезонную форму. Это только острая форма, доброкачесвенное течение, в хроническую форму не перходит, человек выздоравлиевает, иммунитет стойкий.

В течении заболевания 3 периода - инкубационный, преджелтушный, желтушный период.

Лабораторная диагностика.

Обнаружение в сыворотке крови антител - анти HAV IgM - методом ИФА.

Обнаружение самого вируса или его антигенов, РНК с конца инкубационного периода, в преджелтушный период в фекалиях пациентов - электронная микроскопия, ПЦР.

Биохимические методы - исследование сыворотки крови пациентов на печеночные ферменты, билирубин.

Профилактика.

Меры защиты воды, пищевых продуктов от фекального загрезнения. Специфическая профилактика - вакцина ХАВРИКС, АБАКСИН содержат вирус гепатита А в инактиврованной форме. Вводят при эпидемии или угрозе эпидемии.

Гепатит Е.

В росси встречается редко. Чаще в странах юго-восточной азии. Калициновирус. РНК-овый вирус простого стронения, оболочки, суперкапсида нет. Очень опасен для беременных женщин т.к. вызывает острую почечную недостаточность. Н еперходит в хроническую форму, нен вирусоносительства. Диагностика - обнарущение антител, ИФА. Обнаружение в фекалиях, биоптате - ПЦР.

Гепатит В.

Является ДНК-овым вирусов. Сем: гепатовириде. Сложного строения, есть геном (2 гена), котрые кодируют образование вирусных белков. В составе генома есть обратная транскриптаза. Тело вируса образуют Кор-белки, гликопротеиновая оболочка с которыми связаны поверхностные антигены вируса.

Антигенные свойства.

НВs-антигены (поверхностные), НВс, НВе - являются маркерами вируса. НВх. НВs-гликопротеиновой природы обнаружен в 1963 году и назван автсралийским антигеном. Обнаруживается в крови у больных и вирусоносителей. Количесвто антигена может быть огромным. В его составе выделяют 2 фрагмента пре S₁ и пре S₂. 1 фрагнемт обладает имуногенными свойствми и его включают в вакцину. 2- фрагнемт отвечает за адсорбцию вируса на гепатоцитах и за связь с белками крови.

НВс-нуклеопротеид и содержится только в печеночной клетке. В кровь не поступает.

НВе-антиген обнаруживается в крови, появляется при прохождении вириона через мембрану гепатоцина.

Впервые вирус НВV -обнаружен в 1970 году Д. Дейном. Циркулирует в крови в двух вариантах: незрелый - имеет сферическую форму и в своем составе имеют НВS антиген. И линейный - имеет больший молекулярный вес имеет НВs, НВс антиген, но все равно является незрелым. Зрелый имеет в се три антигена. Эти частицы превышают в нескольок раз количество вирионных частиц. Это указывает на точ то репродукция вирусав печеночной клетке идет по особому циклу.

Этапы репродукции вируса.

Идет в ядре гепатоцина. Одна неполная нить ДНК достраивается и образуется двунитевая кольцевая ДНК.

Кольцевая ДНК попадает в ядро гепатоцина

В ядре клеточная ДНК-полимераза синтезирует иРНК и РНК прегеномную - она является матрицей для ДНК вируса с помощью обратной транскриптазы.

Кольцевая ДНК вместе с полимеразой включается в нуклеокапсид, формирается наружная оболочка и вирус в зрелой форме выходит из клетки.

Инфекционный процесс.

Особенности репродукции вируса гепатита Б позволили выделять 2 формы инфекционного процесса.

.        Продуктивная инфекция. При этом вирус проходит все стадии репродукции. Это сопровождается развитием острого гепатита Б.

.        Интегративная инфекция - при ней вирус непроходит все стадии репродукции, а например НВS антигена много, а вирусных нуклеиновых кислот меньше.

Исходы.

.        Выздоровление с образованием напряженного иммунитета.

.        Переход в хроническую форму.

.        Латентная форма с рецидивами.

.        Цирроз печени - смерть

.        Гепатоцеллюлярная карционома.

Лаборатоная диагностика.

Материал: кровь, биоптаты

Методы:

·        ИФА - ищут маркеры

·        ПЦР - ищут ДНК

Гепатит С.

Вирус гепатита РНК-овый вирус. Входит в семейство флявивириде, род: гепативирус. Изветсно 10-14 вариантов НСV, который циркулирует на разных территориях. Рспртсранент гепатит широко. Вирус пораает гепатоциты и макрофаги. Дает хронические формы. Переходит в цирроз или рак.

Лабораторная диагностика. Обнаружение в сыворотке антител методом ИФА, генетические методы: ПЦР

Гепатит Д.

Является дефектным вирусом т.е он самостоятельной репродукции не способен. Он может репродуцироваться только вместе с вирусом гепатита В или С. Это вирус сателлит. РНК-содержащий вирус. Его РНК спообна к репликации только вместе с ДНК-вирусом гепатита В или С. Для диагностики в сыворотке ищут антитела с помощью ИФА и ПЦР.

Профилактика гепатитов.

Контроль за препаратами крови.

Разовый медиуинский инструментарий

Правильная мойка, предстерилизационная обработка инструментария многразового пользования.

Контролько качесвта предстерилизационной обработки.

Специфическая профилактика (тольок для В) - специфическая рекомбинантная вакцина против гепатита В (Энжерик В, Эувакс)