Феназепам, 1,4-бензодиазепины

Вид работы:

Дипломная (ВКР)
Предмет:

Химия
Язык:

Русский
,
Формат файла:
MS Word

1,04 Мб
Опубликовано:

2012-10-28

Все дипломные работы по химии

Скачать дипломную работу Читать текст online Заказать дипломную
*Помощь в написании! Посмотреть все дипломные работы

Вы можете узнать стоимость помощи в написании студенческой работы.

Феназепам, 1,4-бензодиазепины

Тверской государственный технический университет

Кафедра Биотехнологии и химии

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА

на тему:

Феназепам, производные 1,4-бензодиазепина

Выполнила: Алексеева В.Н.

Дипломный руководитель:

Косивцов Ю.Ю.

Тверь 2012

СОДЕРЖАНИЕ

Перечень сокращений

Введение

. Характеристика производных 1,4-бензодиазепина

.1 Описание фармакологической группы

.2 Классификация анксиолитиков

.3 Производные 1,4 - бензодиазепина

.4 Физические и физико-химические свойства производных 1,4-бензодиазепина

.4.1 Липофильность производных 1,4-бензодиазепина

.4.2 Инфракрасные спектры производных 1,4-бензодиазепина

.4.3 Ультрафиолетовые спектры производных 1,4-бензодиазепина

.4.4 Масс - спектры производных 1,4-бензодиазепина

.5 Химические свойства производных 1,4-бензодиазепина

.5.1 Кислотно-основные свойства производных 1,4-бензодиазепина

.5.2 Реакция диазотирования и гидролиз производных 1,4-бензодиазепина

.5.3 Ацилирование производных 1,4-бензодиазепина

.5.4 Алкилирование производных 1,4-бензодиазепина

.5.5 Окисление производных 1,4-бензодиазепина

.5.6 Восстановление производных 1,4-бензодиазепина

.5.7 Нитрование производных 1,4-бензодиазепина

.5.8 Галогенирование производных 1,4-бензодиазепина

.5.9 Замещение атома кислорода на серу в производных 1,4-бензодиазепина

.6 Биохимия и механизм действия 1,4-бензодиазепинов

.6.1 Механизм действия производных производных 1,4-бензодиазепина

.6.2 Связывание 1,4-бензодиазепинов белками крови

.6.3 Фармакокинетика производных 1,4-бензодиазепина

.7 Показания к применение бензодиазепиновых анксиолитиков

.8 Связь между структурой и физиологической активностью 1,4-бензодиазепинов

.9 Феназепам

.9.1 Препарат «Феназепам»

.9.2 Пространственная форма феназепама

.9.3 Фармакокинетика феназепама

.9.4 Данные о безопасности препарата

.9.5 Синтез феназепама

. Анализ субстанции феназепама и препарата «Феназепам»

.1 Производство препарата «Феназепам»

.2 Метод прямого прессования

.3 Методики экспериментов

.3.1 Анализ субстанции феназепама на содержание основного действующего вещества и других показателей качества

.3.2 Методики определения готовой продукции препарата «Феназепама»

.4 Результаты и обсуждения

.4.1 Анализ субстанции феназепама по основным показателям качества

.4.2 Анализ готовой лекарственной формы «Феназепам» по основным показателям качества

. Экономическая часть

.1 Определение затрат на проведение исследования

.2 Материальные затраты

.3 Заработная плата исполнителей исследования

.4 Амортизационные отчисления

.5 Определение единого социального налога

.6 Определение накладных расходов

.7 Смета затрат на проведение исследований

.8 Заключение

. Безопасность и экологичность

.1 Идентификация опасных и вредных факторов

.2 Основные мероприятия и технические средства по обеспечению безопасности

.3 Мероприятия по осуществлению безопасности в опасных ситуациях

.4 Проектирование установки искусственного освещения для лаборатории

.5 Оценка экологичности проекта

Заключение

Список использованных источников

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ

В настоящей дипломной работе использованы следующие сокращения:

НТД - нормативно-техническая документация

ГОСТ - государственный общесоюзный стандарт

ГФ - государственная фармакопея

ОКК - отдел контроля качества

ФС - фармакопейная статья

ФСП - фармакопейная статья предприятия

ПДК - предельно допустимая концентрация

СОВС - стандартный образец вещества свидетеля

РСО - рабочий стандартный образец

ЦНС - центральная нервная система

ГАМК - γ-аминомасляная кислота

ГЭБ - гематоэнцефалический барьер

ВВЕДЕНИЕ

Первые современные психотропные препараты были созданы в начале 50-х годов ХХ века. Этот набор средств, применяемых для лечения психических заболеваний, был весьма ограниченным и малоспецифичным.

Транквилизаторы первого поколения (бенактизин, мепробамат и др.) с начала 60-х годов XX в начали вытесняться более эффективными препаратами ряда 1,4-бензодиазепинов. Сейчас хлордиазепоксид (либриум, элениум,) диазепам (валиум, седуксен), оксазепам (адумбран, тазепам), нитразепа (могадон, эуноктин). клоназепам, лоразепам, феназепам и другие производные 1,4-бензодиазепина занимают ведущее положение в арсенале транквилизирующих средств. Более того, за сравнительно короткий срок препараты 1,4-бензодиазепинового ряда во многих странах мира стали одними из самых распространенных лекарственных средств. По числу выписываемых на них рецептов 1,4-бензодиазепииовые транквилизаторы занимают сейчас второе место после аспирина среди всех лекарственных препаратов. Большим достижением отечественных ученых было создание оригинального мощного транквилизатора бензодиазепинового ряда - «Феназепама». Этот транквилизатор, содержащий в своей структуре бром, обнаружил в клинике широкий спектр успокаивающего, снотворного и противосудорожного действия. Он очень широко внедрился в современную клиническую практику не только психиатров, но и врачей всех специальностей.

Распространение транквилизаторов объясняется весьма широкой сферой их использования не только при лечении нервно-психических расстройств, но и в хирургии, акушерстве, гинекологии, педиатрии и других областях медицины в качестве вспомогательных средств.

Сегодня группа транквилизаторов насчитывает более 100 препаратов. Продолжается их активный поиск и совершенствование - разработка препаратов с наименее выраженными побочными действиями и в то же время достаточно эффективных. Только в наиболее популярном ряду производных 1,4-бензодиазепина, благодаря легкой замещаемости радикалов по различным положениям в молекуле, было синтезировано свыше 3 тысяч соединений, из которых более 40 используются в клинической практике.

Введение более жестких норм показателей качества таблетированных препаратов настоятельно требует постоянного поиска надлежащего качества действующих веществ, более эффективных и многофункциональных вспомогательных ингредиентов, а также внедрения в производство лекарственных средств новейших технологий и современного оборудования. При этом качественные и количественные изменения в составе вспомогательных веществ лекарственной формы могут существенно изменить растворимость и кинетику растворения, биодоступность лекарства (липофильность), его концентрацию в крови и длительность действия.

Кроме того определение примесей в фармацевтических препаратах является также важной и актуальной задачей, так как состав примесей определяет качество продукта и позволяет судить о производителе продукции и ее фальсификации. Необходимо отметить, что в ряде случаев примеси, присутствующие в препарате в следовых концентрациях, по своей токсичности намного превосходят токсичность основного компонента.

Целью данной дипломной работы является анализ действующего вещества в сырье (субстанции) феназепама и в препарате «Феназепам», контроль на производстве «Феназепам» таблеток (входной контроль субстанций, промежуточный контроль на производстве и контроль готовой продукции), а так же использование теста «Растворение» для оценки фармацевтической эквивалентности таблетизированных лекарственных форм феназепама изготовленных по разной технологии.

Для достижения этой цели ставились следующие задачи:

1) изучение химической природы, биологической и физиологической роли основного вещества, содержащейся в препарате «Феназепам»;

2) освоение методов и методик качественного и количественного анализа основного действующего вещества;

3) физико-химическое исследование, а так же установление основных показателей качества согласно ФС;

) проведение сравнительной оценки фармацевтической доступности таблетизированной формы феназепама с препаратом сравнения (таблетки, полученные методом прямого прессования из размолотой субстанции);

) заключение о пригодности данного препарата в клинической практике.

1. ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОИЗВОДНЫХ 1,4-БЕНЗОДИАЗЕПИНА

1.1 Описание фармакологической группы

Анксиолитики (от лат. anxietas - тревожное состояние, страх; греч. lytikos - способный растворять, ослабляющий), или транквилизаторы (от лат. tranquillo - успокаивать), или атарактики (от греч. ataraxia - невозмутимость) - психотропные средства, уменьшающие выраженность или подавляющие тревогу, страх, беспокойство, эмоциональное напряжение.

Появление первых транквилизаторов относится к 50-м годам XX века. До этого для коррекции тревожных состояний использовались алкоголь, опиум, бромиды (с начала XIX в.), барбитураты (с начала XX в.) и другие средства.

Исторически можно выделить 3 поколения анксиолитиков:

анксиолитики первого поколения (мепробамат, гидроксизин, бенактизин и др.);

анксиолитики второго поколения (препараты бензодиазепинового ряда);

анксиолитики третьего поколения (буспирон и др.) [1].

1.2 Классификация анксиолитиков

Существует несколько классификаций лекарственных средств, относящихся к группе анксиолитиков: по химической структуре, механизму действия, фармакокинетическим и фармакодинамическим особенностям.

По классификации М.Д. Машковского анксиолитики представлены несколькими классами химических соединений:

производные бензодиазепина (бензодиазепины);

карбаминовые эфиры замещенного пропандиола (мепробамат);

производные дифенилметана (бенактизин, гидроксизин);

транквилизаторы разных химических групп (бензоклидин, буспирон, мебикар и др.).

Согласно классификации Д.А. Харкевича, по механизму действия анксиолитики можно разделить на следующие группы:

агонисты бензодиазепиновых рецепторов (диазепам, феназепам и др.);

агонисты серотониновых рецепторов (буспирон);

вещества разного типа действия (бенактизин и др.) [2].

1.3 Производные 1,4 - бензодиазепина

Большинство анксиолитиков бензодиазепиновой структуры являются производными 1,4-бензодиазепина (рисунок 1.1, 1.2). Основа химической структуры бензодиазепинов состоит из бензольного кольца, соединенного с семичленным гетероциклическим кольцом, содержащим два атома азота (диазепин) в позициях 1 и 4. Все используемые в клинике производные бензодиазепина имеют также второе бензольное кольцо, присоединенное к углероду в позиции 5. Для проявления активности существенным является наличие галогена или нитрогруппы в 7 положении. Некоторые соединения группы бензодиазепинов содержат в молекуле остаток 1,5-бензодиазепина (клобазам) или 2,3-бензодиазепина (тофизопам) [3].

Рисунок 1.1 - 3Н-1,4-Бензодиазепин

Рисунок 1.2 - 1Н-1,4-Бензодиазепин

В структуре производных бензодиазепина имеется азометиновая группа - атом углерода C₅соединенный с атомом азота N₄ двойной связью.

В соответствии с заместителями в диазепиновом кольце бензодиазепины можно классифицировать следующим образом:

2-кето-бензодиазепины содержат кето-группу при атоме углерода в позиции 2 (диазепам, дикалия клоразепат, флуразепам и др.);

3-гидрокси-бензодиазепины содержат гидрокси-группу при атоме углерода в позиции 3 (оксазепам, лоразепам, темазепам);

триазолобензодиазепины содержат триазоловое кольцо, соединенное с диазепиновым кольцом через атом азота в положении 1 и атом углерода в положении 2 (алпразолам, триазолам, эстазолам) [2,3].

Возможно наличие и других дополнительных заместителей в структуре бензодиазепина, например, имидазо-группа (мидазолам) и др.

В таблице 1.1 приведены некоторые представители производных 1,4-бензодиазепина.

Таблица 1.1

Производные 1,4-бензодиазепина

Название

Структурная формула

Хлозепид (Chlozepidune)

7-хлор-2-метиламино-5-фенил-3Н-1,4-бензодиазепила-4-оксид

Диазепам (Diazepam)

7-хлор-1,3-дигидро-1-метил-5-фенил-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он

Феназепам (Penazepanum)

7-бром-5-(орто-хлорфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазетин-2-он

Оксазепам (Oxazepamum)

7-хлор-2,3-дигидро-3-окси-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он

Лоразепам (Lorazepam)

7-хлор-5-(орто-хлорофенил)-2,3-дигидро-3-окси-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он

Мезапам (Mezapamum)

7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин

Гидазепам (Gidazepamum)

7-бром-1-(гидразинокарбонил)-метил-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепина-2-он

В связи с легкой замещаемостью радикалов по различным положениям в молекуле бензодиазепина было синтезировано и исследовано более 3 тысяч соединений, из которых несколько десятков зарегистрированы в различных странах в качестве лекарственных средств [3].

.4 Физические и физико-химические свойства производных 1,4-бензодиазепина

.4.1 Липофильность производных 1,4-бензодиазепина

Коэффициенты распределения Р в системе вода - несмешивающийся в ней растворитель биологически активных веществ в определенной степени характеризуют способность последних проникать через биомембраны. Данные характеристики в сочетании с другими физико - химическими параметрами широко используются для установления связи между структурой и биологической активностью веществ и для математического прогнозирования активности новых соединений. На рисунке 1.3 представлена общая формула производных 1,4-бензодиазепина.

Рисунок 1.3 - Общая формула производных 1,4-бензодиазепина

Коэффициенты распределения 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепинов-2-онов определялись в системе н-октанол - фосфатный буфер (рН = 7.4) и представлены в таблице 1.2.

Таблица 1.2

Величина lg P 1,2 - дигидро-3Н-1,4-бензодиазепинов-2-онов

Номер соединения	R¹	R²	R³	R⁴	lg P
1	H	C₆H₅	-	H	2.28±0.01
2	CH₃	C₆H₅	-	H	2.71±0.01
3	Cl	C₆H₅	-	H	2.93±0.01
4	Br	C₆H₅	-	H	3.11±0.01
5	NO₂	C₆H₅	-	H	2.16±0.01
6	Br	о-ClC₆H₄	-	H	3.30±0.01
7	Br	м-ClC₆H₄	-	H	3.63±0.01
8	Br	п-ClC₆H₄	-	H	3.78±0.01

Из таблицы видно, что феназепам (соединение номер 6) имеют одно из наибольших значений lg P, что говорит о его высокой способности проникать через биомембраны.

Для некоторых групп и радикалов были найдены константы π - константа гидрофобности заместителя, значение которых представлены в таблице 1.3 [3,4].

Таблица 1.3

Константы π радикалов и групп

Радикал или группа	π	Радикал или группа	π
CH3 (в положении 7)	0.42±0.01	o-Cl	0.19
CH3 (в положении 3)	0.32	Br	0.81±0.01
C2H5	0.71±0.01	NO2	-0.12
C3H7	1.21	COCH3	-0.34±0.01
изо- C3H7	1.07±0.01	OH	-0.73
СН2	0.39±0.01	ON→O	-1.58
Cl	0.63±0.01	NH2	-0.74

.4.2 Инфракрасные спектры производных 1,4-бензодиазепина

Легко интерпретируемые спектры получаются при работе с растворами в четыреххлористом углероде. Однако низкая растворимость в нем многих бензодиазепинов не всегда позволяет получать такие спектры. Спектры кристаллических образцов 1,4 - бензодиазепинов, как правило, сложнее вследствие межмолекулярных взаимодействий. В них достоверное отнесение можно сделать только для некоторых характеристических полос.

В качестве примера можно описать ИК - спектры соединений, изображенных на рисунке 1.4.

аб
вг

Рисунок 1.4 - Производные 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепина:

-хлор-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он (а); 7-хлор-5-фенил-1,2,3,4-тетрагидробензодиазепин-2-он (б); 7-хлор-1-метил-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он (в); 7-хлор-1-метил-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин (г)

На рисунке 1.5 представлены ИК-спектры этих соединений.

Спектры этих соединений содержат полосу поглощения двойной связи С₅=N₄ в области 1600 - 1620 см^-1. Правильность отнесения этой полосы подтверждается ее отсутствием в спектре соединения (б).

Наиболее интенсивная полоса поглощения в спектрах 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов, располагающаяся в области 1690 - 1700 см^-1, соответствует валентным колебаниям связи С=О.

В спектрах наблюдаются полосы поглощения свободной и связанной NH - группы. Наиболее интенсивная из полос (в области около 3180 см^-1) отвечает колебаниям связи амидной группы, имеющей S-цис-конфигурацию.

Рисунок 1.5 - ИК-спектры:

-хлор-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он (а);

-хлор-5-фенил-1,2,3,4-тетрагидробензодиазепин-2-он (б);

-хлор-1-метил-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он (в);

-хлор-1-метил-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин (г) в четыреххлористом углероде

Интенсивная полоса в области около 1320 см^-1 может быть отнесена к валентным колебаниям связи С-N третичного амина. В спектре тетрагидробензодиазепина эта полоса отсутствует.

Серия полос в интервале волновых чисел 1300 - 900 см^-1, вероятно, отвечает деформационным колебаниям связей С-Н бензольных колец (1300 - 1000 см^-1 - плоскостные колебания, 1000 - 900 см^-1 - внеплоскостные колебания) [4-6].

.4.3 Ультрафиолетовые спектры производных 1,4-бензодиазепина

В электронных спектрах 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов обычно имеется три полосы поглощения с максимумами при 200 - 215, 220 - 240 и 290 - 330 нм. Две первые полосы соответствуют возбуждению ароматических хлороформов. Третью - длинноволновую - полосу относят к азометиновой связи, сопряженной с бензогруппой [4,6].

На рисунке 1.6 представлен УФ-спектр феназепама.

Рисунок 1.6 - УФ-спектр феназепама

.4.4 Масс - спектры производных 1,4-бензодиазепина

Значение метода масс - спектрометрии не ограничивается доказательством структуры новых соединений. Особую ценность метод приобретает в исследования биотрансформации (метаболизма) препаратов.

Основные пути распада 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов под электронным ударом представлены на рисунке 1.7.

Элиминирование водорода от молекулярного ион-радикала происходит в основном (примерно на 70%) из орто-положения арильного заместителя у атома С⁵. Отщепление радикала H₂CN от молекулярного ион-радикала приводит к ионам «F₂», дающим в спектрах весьма интенсивные пики. В случае когда R₃≠H, наблюдается элиминирование радикала R₃HCN. Дальнейший распад ионов «F₁» и «F₂» сопровождается отщеплением окиси углерода и атома водорода. Элиминирование молекулярными ионами молекулы HCN имеет место при фрагментации бензодиазепинов с электроакцепторными заместителями в положении 7.

Несмотря на то что 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепины-2-оны и 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-тионы весьма близки по структуре, в характере их фрагментации под электронным ударом имеются существенные различия. Характерные для бензодиазепинтионов пути распада заключаются в элиминировании молекулярным ион-радикалом атома водорода, потере радикала ∙SH молекулярными и [M-H]+ ионами, отщеплении HCN. Особенности распада бензодиазепинтионов, очевидно, связаны с лактам-лактимной таутомерией молекулярных ионов.

Особенностью распада 5-(галогено)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов является элиминирование радикала галогена молекулярными ион-радикалами, приводящее к образованию ионов «F₈», «F₉», «F₁₀» наряду с обычными для бензодиазепинов ионами, сохраняющими атомы галогенов в фенильном ядре [4,7].

Рисунок 1.7 - Схема основных путей распада 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов под электронным ударом

.5 Химические свойства производных 1,4-бензодиазепина

.5.1 Кислотно-основные свойства производных 1,4-бензодиазепина

,4-Бензодиазепины и их дигидропроизводные проявляют слабоосновные свойства (гетероатом азота N₄). При введении в ядро 1,4-бензодиазепинов карбонильных и оксигрупп основность их снижается. Феназепам, например, в среде метилэтилкетона ведет себя как слабое однокислотное основание. Основность азота в азометиновой группе сильно снижается за счет сопряжения с кольцом бензола при С₅.

Присоединение протона при взаимодействии с кислотой происходит за счет гетероатома азота N₄. Исключение составляет хлозепид, у которого положительный заряд при присоединении протона распределяется по триаде, между гетероатомом азота N₁ и атомом азота метиламиногруппы N₂.

Слабоосновные свойства бензодиазепинов лежат в основе их количественного определения методом кислотно-основного титрования в не водных средах.

Основность соединений данного типа увеличивается при наличии основных заместителей. При введении в ядро 1,4-бензодиазепинов карбонильных, окси- и карбоксильных групп основность соединений снижается.

Бензодиазепины как азотсодержащие основания могут давать реакции с осадочными реактивами. Например, сибазон образует розовый осадок с аммония рейнекатом в кислой среде.

,05 г препарата сибазона растворяют в 2 мл разведенной кислоты хлороводородной, прибавляют 2 мл раствора аммония рейнеката. Образуется розовый осадок, растворимый в ацетоне (рисунок 1.8).

Рисунок 1.8 - Реакция сибазона с аммония рейнекатом в кислой среде

С концентрированными кислотами (серной, хлороводородной, хлорной) 1,4-бензодиазепины образуют окрашенные соли, которые флюоресцируют в УФ-свете. Это испытание используется для идентификации препаратов.

К 1 мл раствора феназепама 3% для инъекций прибавляют 3 капли концентрированной кислоты серной и перемешивают. Раствор окрашивается в желтый цвет. В УФ-свете раствор дает ярко-зеленую флюоресценцию.

С концентрированной кислотой серной сибазон дает в УФ-свете зеленовато-голубую флюоресценцию, нитразепам - голубую флюоресценцию.

Соединения с лактамной группой (рисунок 1.9) проявляют слабокислотные свойства, образуя соли при действии сильных оснований.

Рисунок 1.9 - Лактамная группа

Наряду со слабоосновными свойствами сибазон, нозепам и нитразепам проявляют и слабокислотные свойства; они реагируют с сильными основаниями, например с диметилформамидом, образуя соответствующие анионы. Так, сибазон (слабая СН-кислота) и нозепам (слабая NH-кислота) образуют соответствующие депротонированные соединения (анионы) - рисунок 1.10 [4,6].

Рисунок 1.10 - Депротонированный нозепам

.5.2 Реакция диазотирования и гидролиз производных 1,4-бензодиазепина

Реакция диазотирования лежит в основе нитритометрического метода количественного определения производных данной группы, образование азокрасителя используется для их идентификации и фотоколориметрического количественного определения.

,02 г феназепама нагревают до кипения с 2 мл разведенной кислоты хлороводородной в течение 3 минут и охлаждают. Полученный раствор дает характерную реакцию на первичные ароматические амины. В качестве азосоставляющей применяют фенолы в щелочной среде: резорцин (рисунок 1.11), β-нафтол (рисунок 1.12) или ароматические амины в кислой среде (красная окраска).

Рисунок 1.11 - Реакция диазотирования феназепама с резоцином (красное окрашивание)

Рисунок 1.12 - Реакция диазотирования феназепама с β-нафтолом (оранжево-красный осадок)

Соль диазония, полученную из нитразепама, сочетают в кислой среде с N-1-нафтилэтилендиамином; образуется азокраситель красного цвета (рисунок 1.13) [4,7].

Рисунок 1.13 - Образование азокрасителя из нитрозепама

При нагревании нитразепама с цинковой пылью в кислой среде, кроме гидролитического разложения, происходит восстановление ароматической нитрогруппы до аминогруппы с образованием 2,5-диаминобензофенона (рисунок 1.14), который дает реакции диазотирования и азосочетания по обеим аминогруппам.

Рисунок 1.14 - 2,5-Диаминобензофенон

Несколько иначе протекает кислотный гидролиз хлозепида. 0,05 г хлозепида нагревают до кипения с разведенной кислотой хлороводородной в течение 2 мин и охлаждают. Вначале происходит присоединение воды по двойной связи 1-2, затем отщепление метиламина и образование амидной связи, а далее - гидролиз лактамной (амидной) связи (рисунок 15) [4].

Полученный раствор дает характерную реакцию на первичные ароматические амины с образованием оранжево-красного осадка.

Сибазон не дает реакции образования азокрасителя, так как при кислотном гидролизе образуется вторичная ароматическая аминогруппа.

Рисунок 15 - Схема гидролиза хлозепида

При щелочном гидролизе в жестких условиях (сплавление с натрия гидроксидом или кипячение с раствором щелочи) из амидной группы бензодиазепинов образуется аммиак или метиламин (сибазон), окрашивающие влажную красную лакмусовую бумагу в синий цвет. При этом нозепам образует на стенках пробирки налет изумрудно-зеленого цвета. Реакция сплавления со щелочью используется для идентификации 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бензодиазепин-2-онов [7].

.5.3 Ацилирование производных 1,4-бензодиазепина

При ацилировании 3Н-1,4-бензодиазепинов в зависимости от их структуры условий реакции получаются различные продукты.

Ацилирование хлордиазепоксида (рисунок 1.15) уксусным ангидридом при комнатной температуре приводит к N-ацетильному производному (I). При действии горячего уксусного ангидрида или ацетилхлорида в диметилформамиде образуется продукт перегруппировки Полоновского (II). Продолжительное нагревание хлордиазепоксида с уксусным ангидридом дает продукт N-ацетилирования и перегруппировки (III) [4,7].

Рисунок 1.15- Схема ацилирования хлордиазепоксида

.5.4 Алкилирование производных 1,4-бензодиазепина

,4-Бензодиазепины алкилируются по положениям 1 и 4, а иногда по положению 3 (рисунок 1.16). Кроме того, реакцией алкилирования различные группы можно ввести в качестве заместителей в уже имеющиеся заместители. Чаще всего алкилирование проводят в присутствии оснований (NaОH, NH₂Na, CH₃ONa, щелочи и т.д.) [4,8].

Рисунок 1.16- Алкилирование производных 1,4-бензодиазепина

.5.5 Окисление производных 1,4-бензодиазепина

-Окси-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепины окисляется хромовым ангидридом. Четырехокись рутения окисляет 2-окси-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-оны до нестабильных α-дикарбонильных производных (рисунок 1.17).

Рисунок 1.17- Окисление 2-окси-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепина

Озонирование 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов, незамещенных в положении 5, приводит к 2,5-дионам (рисунок 1.18) [4,9].

Рисунок 1.18- Озонирование 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов

.5.6 Восстановление производных 1,4-бензодиазепина

Разработанные методы гидрирования соединений данного класса позволяют проводить селективное восстановление того или иного фрагмента молекулы.

N-окиси 1,4-бензодиазепинов восстанавливаются до соответствующих дезоксидных производных треххлористым фосфором, водородом в присутствии никеля или железным порошком в среде уксусной кислоты. Так же может восстанавливаться и соседняя азометиновая связь (рисунок 1.19).

Рисунок 1.19- Восстановление N-окиси 1,4-бензодиазепинов

Хлордиазепоксид по-разному восстанавливается водородом на палладиевом и платиновом катализаторах: в первом случае восстановление идет с элиминированием атома хлора из положения 7 и атома кислорода аминооксидной группы, во втором - восстанавливается аминооксидная группа и примыкающая к ней азометиновая связь (рисунок 1.20).

Рисунок 1.20- Восстановление хлордиазепоксида на платиновом и палладиевом катализаторах

Несколько иные различия отмечены при восстановлении на палладиевом и платиновом катализаторах соединения с заместителями

R₁ = Cl, R₂ = C₆H₅, R₃=H

Если на палладиевом катализаторе, как и при восстановлении хлордиазепоксида, элиминируется атом хлора и атом кислорода из положения 7 и 4 соответственно, то гидрогенизация на платине данной N-окиси приводит к 4-окситетрагидро-1,4-бензодиазепин-2-ону (рисунок 1.21).

Рисунок 1.21- Восстановление соединения с заместителями R₁ = Cl,

R₂ = C₆H₅, R₃ = H на палладиевом и платиновом катализаторах

,2-Дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-оны и 3,4-дигидро-5Н-1,4-бензодиазепин-5-оны гидрируются водородом на платине по азометиновым связям (рисунок 1.22) [4,7,9].

Рисунок 1.22- Восстановление на платиновом катализаторе 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-она

.5.7 Нитрование производных 1,4-бензодиазепина

При нитровании 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов положение вступающей в ароматическое ядро нитрогруппы определяется ориентирующим влиянием отдельных фрагментов молекул веществ.

Бензодиазепины при R₁=H нитрируются в положение 7, что согласуется с пара-ориентирующим влиянием амидного фрагмента диазепинового ряда. При наличии в положении 7 заместителя (Cl или NO₂) нитрогруппа вступает в мета-положение кольца С, что также объясняется с позиций общих представлений об ориентирующем влиянии заместителей и групп. При дальнейшем нитровании вторая нитрогруппа, как и следовало ожидать, вступает в положение 9 (рисунок 1.23).

При действии дымящей азотной кислоты на бензодиазепины в среде уксусного ангидрида получаются 4-нитро-5-ацетилокси-1,2,3,4-тетрагидро-1,4-бензодиазепин-2-оны (рисунок 1.24) [4,9].

Рисунок 1.24- Нитрование дымящей азотной кислотой производных 1,4-бензодиазепина

.5.8 Галогенирование производных 1,4-бензодиазепина

Атом хлора может быть введен в 1,4-бензодиазепины реакцией электрофильного и радикального замещений. 7-хлор-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-оны образуются при действии хлора в присутствии хлорного железа на бензодиазепины в нитробензоле либо взаимодействием этих же веществ с N-хлорсукцинимидом (NCS) в среде метиленхлорида. Действие органических или минеральных гипохлоритов приводит к 1-хлор-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онам (рисунок 1.25).

Подвижный атом хлора в соединениях легко мигрирует по внутримолекулярному механизму, замещая атомы водорода у α-углеродного атома заместителя R₂.

Рисунок 1.25- Галогенирование производных 1,4 -бензодиазепина

Атомы хлора или брома могут быть введены в положение 3 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов действием N-хлор- или N-бромсукцинимидом. 3-хлорбензодиазепины получаются также при действии на 3-окси-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2оны хлористого тионила (рисунок 1.26).

Рисунок 1.26 - Галогенирование 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов в положение 3

-Галоген-1,4-бензодиазепины образуются при бромировании тетрагидро-1,4-бензодиазепинов (рисунок 1.27), а так же замещением карбонильного атома кислорода в дионах (рисунок 1.28) [4,7,9].

Рисунок 1.27 - Бромирование тетрагидро-1,4-бензодиазепинов

Рисунок 1.28- Замещение карбонильного атома кислорода в дионах

.5.9 Замещение атома кислорода на серу в производных 1,4-бензодиазепина

При кипячении 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов с пятисернистым фосфором в пиридине образуется соединение изображенное на рисунке 1.29.

Рисунок 1.29 - Реакция 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов с пятисернистым фосфором

Реакции нуклеофильного присоединения по связи С=S позволяют получать разнообразные 2-замещенные 1,4-бензодиазепинов. Некоторые из этих превращений представлены на рисунке 1.30 [4,9].

Рисунок 1.30- Реакции нуклеофильного присоединения по связи С=S производных 1,4-бензодиазепина

1.6 Биохимия и механизм действия 1,4-бензодиазепинов

Фармакологическая активность бензодиазепинов зависит от многих факторов, таких, как метаболизм, всасывание, распределение, выделение из организма и связывание с белками крови. Все это является главным звеном проблемы молекулярно-биологического поиска, направленного синтеза и изучения механизма действия данной группы лекарственных средств. Полученные результаты и обобщения служат основой, на которой строится и развивается научная и рациональная фармакотерапия заболеваний и фармакопрофилактика [4,5].

.6.1 Механизм действия производных производных 1,4-бензодиазепина

Электрофизиологические исследования, проведенные в 60-70-е гг. XX в., показали, что бензодиазепины усиливают ГАМКергическую передачу в ЦНС (центральная нервная система). Механизм действия бензодиазепинов стал понятен после того, как в 1977 г. с помощью радиолигандного метода в головном мозге человека и животных были обнаружены места специфического связывания бензодиазепинов, так называемые бензодиазепиновые рецепторы (БД-рецепторы). В дальнейшем в экспериментах in vitro и in vivo была выявлена корреляция между способностью различных бензодиазепинов связываться с этими участками и их фармакологической активностью. Методами авторадиографии и электронной микроскопии было показано, что БД-рецепторы локализованы главным образом в синапсах ЦНС, преимущественно на постсинаптических мембранах. Показана гетерогенность БД-рецепторов, которые представлены в мозге млекопитающих по крайней мере двумя подтипами - БД₁ и БД₂.

После обнаружения мест специфического связывания бензодиазепинов начался поиск эндогенных соединений, взаимодействующих с БД-рецепторами, так называемых эндогенных лигандов. В качестве эндогенных лигандов БД-рецепторов рассматривается большое количество соединений: пептиды, пурины, никотинамид, гипоксантин, бета-карболины, ингибитор связывания диазепама (DBI) и др., однако окончательно природа эндогенного лиганда БД-рецепторов не выяснена.

В настоящее время считается, что бензодиазепины взаимодействуют со специфическими бензодиазепиновыми рецепторами (являются агонистами этих рецепторов), входящими в состав постсинаптического ГАМКА-рецепторного комплекса в лимбической системе мозга, таламусе, гипоталамусе, восходящей активирующей ретикулярной формации ствола мозга и вставочных нейронах боковых рогов спинного мозга. Бензодиазепины повышают чувствительность ГАМК-рецепторов к медиатору (ГАМК), что обусловливает повышение частоты открытия в цитоплазматической мембране нейронов каналов для входящих токов ионов хлора. В результате происходит усиление тормозного влияния ГАМК и угнетение межнейронной передачи в соответствующих отделах ЦНС [2].

Бензодиазепины обладают широким спектром фармакологического действия, включающим анксиолитическое, седативное, снотворное, миорелаксирующее, противосудорожное, амнестическое и др.

По особенностям клинического действия бензодиазепиновые анксиолитики можно разделить на 3 группы:

) бензодиазепины с преобладанием анксиолитического действия (влияние на миндалевидный комплекс лимбической системы);

) бензодиазепины с преобладанием снотворного действия (влияние на ретикулярную формацию ствола головного мозга и неспецифические ядра таламуса, гипоталамуса);

) бензодиазепины с преобладанием противосудорожного действия (влияние на гиппокамп).

Выраженным анксиолитическим действием обладают феназепам (по анксиолитической активности превосходит многие бензодиазепины, в том числе диазепам), диазепам, лоразепам, алпразолам и др. Умеренно выражено анксиолитическое действие у хлордиазепоксида, бромазепама, гидазепама, клобазама, оксазепама и др.

Седативно-гипнотический эффект особенно выражен у нитразепама, флунитразепама, флуразепама, темазепама, триазолама, мидазолама, эстазолама и др. и они используются в основном как снотворные средства.

Противосудорожные свойства характерны для клоназепама, диазепама, а также (в меньшей степени) для нитразепама.

Миорелаксирующая активность характерна для диазепама, хлордиазепоксида, лоразепама, тетразепама и др.

Для некоторых анксиолитиков характерно выраженное анксиолитическое действие при относительно слабом миорелаксирующем и снотворном (тофизопам, медазепам и др.), в связи с чем они более удобны для применения в дневные часы (так называемые дневные транквилизаторы) [3,5].

.6.2 Связывание 1,4-бензодиазепинов белками крови

Биологическое действие 1,4-бенздиазепинов, как и других лекарственных средств, определяется физико-химическим взаимодействием вещества со специфическими молекулярными комплексами в организме, названными рецепторами. Продолжительность и интенсивность действия лекарства определяется действующей концентрацией препарата в биофазе, то есть в той микросреде, где осуществляется непосредственный его контакт с рецептором. Уровень действующей концентрации находится в прямой зависимости от диффузии препарата в плазму крови. Однако общее количество лекарства в плазме не всегда пропорционально интенсивности его действия, так как значительная часть его может взаимодействовать (связываться) с белками крови. Такое взаимодействие лимитирует нахождение соединения в кровяном русле и регулируют такие важные процессы, как метаболизм и распределение препарата в органах и тканях экспериментальных животных и человека. Только не связанный с белком препарат может взаимодействовать с рецептором.

Связывание лекарственных средств в плазме крови осуществляется преимущественно альбуминовой фракцией, составляющей 5% ее состава. Наиболее изученными и часто применяемыми для исследований взаимодействия макромолекул с эндогенными и энзогенными веществами являются бычий (БСА) и человеческий (ЧСА) сывороточные альбумины.

Взаимодействие между альбумином и лекарствами осуществляется за счет действия межмолекулярных сил, которые проявляются в изменении некоторых физических и физико-химических свойств молекул, образующих комплекс. Величина энергии связи комплекса не превышает 8-10 ккал/моль, что указывает на существование слабых связей между макромолекулами и лекарствами. К таким связям относятся водородные, гидрофобные и ионные (рисунок 1.31).

Рисунок 1.31- Связи, стабилизирующие комплекс белок-лекарство: 1 - ионная; 2 - водородная; 3 - ковалентная связи (дисульфидный мостик); 4,5 - некоторые типы вандервальсовых взаимодействий

Водородная связь образуется между полярными группами белка (- ОН, =NH и =NH⁺) и неподеленной электронной парой электроотрицательных элементов (N, О, S, Р) лекарств, если существуют достаточно благоприятные стерические условия. Это весьма прочная связь, поэтому для ее возникновения не требуется тесного соприкосновения между белками и лекарственными веществами. Она возникает только в том случае, если участвующий в ее образовании атом располагается на одной прямой с группой -ОН или -NH и на определенном расстоянии от нее. Прочность водородной связи зависит от степени протонизации атома водорода и донорных свойств атома лекарства.

Сывороточный альбумин и некоторые лекарственные средства, имеющие полярные группы, при взаимодействии образуют гидрофобные связи, которые обеспечивают создание комплекса, характеризующегося высокой стабильностью. Важнейшая особенность гидрофобной связи состоит в том, что боковые алкильные группы взаимодействуют с другой такой же группой и не взаимодействуют с водой. При взаимодействии альбумина и лекарства гидрофобные связи начинают играть заметную роль в тех случаях, когда атомные массы пар реагирующих атомов достигают величин 12-16. При взаимодействии ароматических колец (рисунок 1.31) гидрофобная связь дополняется переносом электронов.

Это обусловлено тем, что в молекулах с двумя или более сопряженными двойными связями часть электронов оказывается делокализованной и образует π-электронное облако, охватывающее всю систему сопряженных связей. В результате дальнейшей делокализации в π-электронном облаке может создаваться дефицит или избыток π-электронов. Соединения с большим дефицитом π-электронов (нитробензол, пиридин) способны образовывать непрочные комплексы с молекулой, содержащей избыток π-электронов. В такой системе происходит почти такой же свободный обмен электронами, как между двумя конденсированными кольцами в одной и той же молекуле.

Следует также указать, что взаимная ориентировка, число вступивших в контакт неполярных групп, их величина и форма связей зависит от конформации молекулы белка и лекарства.

Ионные связи возникают между ионами, несущими разноименные заряды. Наряду с ионным между атомами существует также взаимодействие за счет короткодействующих сил, поэтому связь оказывается более прочной. Например, катионы всех аминов, за исключением четвертичных, образуют с анионами карбоновых кислот одновременно и водородные связи. Далее две молекулы могут быть связаны друг с другом ионными силами в одной точке и гидрофобными - в другой. При этом значительно возрастают прочность связи и время ее существования.

Ковалентные связи лишь в редких случаях принимают участие в образовании связи лекарства с белками.

Способность альбумина связывать лекарственные препараты за счет образования тех или иных связей определяется химическими свойствами аминокислот и их расположением внутри макромолекулы.

Аналитические методы, используемые при изучении взаимодействия альбумина с молекулами лекарств, делятся на неспектроскопические и спектроскопические. Первая группа включает так называемые классические методы: равновесный и кинетический диализ, ультрафильтрацию, ультрацентпифугирование и электрофорез. Ко второй группе относятся ультрафиолетовая и видимая спектроскопия, флуоресценция, дисперсия оптического вращения и кругового дихроизма, ЯМР.

Сродство молекулы бенздиазепина к ЧСА зависит от величины заместителей, их ориентации относительно активных групп рецепторного участка белка, а также от донорно-акцепторных свойств вещества. Можно предположить, что при наличии объемного заместителя в положении 1 бенздиазепина (флуразепам, празепам) наблюдаются стерические затруднения для сближения белка и лиганда, чего нельзя сказать о незамещенных бенздиазепинах (дикалий хлоразепате, хлордиазепоксиде) и бенздиазепинах с небольшими заместителями (диазепаме, оксазепаме).

Галогензамещенные 1,4-бенздиазепинов по сродству к альбумину можно расположить в ряд Cl < Br < I. Вот почему бромазепам обладает меньшим сродством к ЧСА, чем диазепам и оксазепам.

Общее количество связавшегося c ЧСА бенздиазепина также зависит от типа заместителя, вводимого в разные положения молекулы. Наиболее сильное влияние на связывание бенздиазепинов оказывали заместители в положении 7. Производные, содержащие в положении 7 атомы галогенов или метильную группу, связывались на 97-99, а содержащие аминогруппу - всего лишь на 19,8%. Производное, имеющее в положении 7 гидроксильную группу и занимающее по липотропности промежуточное положение между галоген- и аминосодержащими соединениями, связывались с белком на 54,7%. Связывание 1, 2, 3, 4 и 7 замещенных 1,4-бенздиазепинов с белками плазмы повышалось с увеличением липотропных свойств заместителей [2,4].

.6.3 Фармакокинетика производных 1,4-бензодиазепина

Производные бензодиазепина различаются по особенностям фармакокинетики, что также учитывается при назначении этих препаратов. По продолжительности действия (с учетом эффекта активных метаболитов) бензодиазепины можно классифицировать следующим образом:

длительного действия (Т_1/2 - 24-48 ч): диазепам, хлордиазепоксид и др.;

средней продолжительности действия (Т_1/2 - 6-24 ч): алпразолам, оксазепам, лоразепам и др.;

короткого действия (Т_1/2 - менее 6 ч): мидазолам и др.

Все бензодиазепины являются липофильными соединениями. Липофильность разных веществ этой группы варьирует более чем в 50 раз, наиболее липофильными из бензодиазепинов являются диазепам и мидазолам.

При приеме внутрь бензодиазепины хорошо всасываются из ЖКТ, преимущественно из двенадцатиперстной кишки (абсорбция зависит от нескольких факторов, в том числе от липофильности). Наиболее быстро всасываются диазепам и триазолам, наименее быстро - оксазепам, лоразепам. Антациды могут понижать скорость (но не степень всасывания) некоторых бензодиазепинов, в том числе диазепама и хлордиазепоксида. После внутримышечного введения бензодиазепины всасываются медленнее, чем при приеме внутрь (исключение составляют лоразепам и мидазолам, которые при внутримышечном введении всасываются быстро) [2].

Время достижения максимальной концентрации в плазме крови после однократного приема для разных ЛС варьирует от 30 минут до нескольких часов. Равновесная концентрация в крови при курсовом приеме бензодиазепинов обычно достигается в течение нескольких дней после начала терапии (для бензодиазепинов с коротким и средним периодом полувыведения) или в течение 5 дней - 2 недель (для препаратов с длительным периодом полувыведения). Бензодиазепины и их метаболиты характеризуются высокой степенью связывания с белками крови, варьирующей от 70% (алпразолам) до 98% (диазепам).

Первичный метаболизм бензодиазепинов происходит в печени. Исключение составляют дикалия клоразепат и флуразепам, которые быстро метаболизируются в ЖКТ и не попадают в системный кровоток в клинически значимых количествах. Действие оказывают их активные метаболиты, которые в дальнейшем подвергаются биотрансформации в печени. Большинство бензодиазепинов подвергается микросомальному окислению в печени, в основном путем N-деметилирования или гидроксилирования до активных или неактивных метаболитов. Затем метаболиты подвергаются конъюгации либо дальнейшей биотрансформации.

В процессе метаболизма у многих бензодиазепинов образуются одинаковые активные метаболиты, некоторые из них применяются как самостоятельные лекарственные средства (оксазепам и др.). Длительность терапевтического эффекта для бензодиазепинов, имеющих активные метаболиты, определяется не Т_1/2 исходного вещества, а Т_1/2 активных метаболитов.

Некоторые бензодиазепины не образуют активных метаболитов - лоразепам, оксазепам, темазепам и др. и подвергаются только процессу конъюгации под действием глюкуронилтрансферазы с образованием глюкуронидов.

Бензодиазепины (и их метаболиты) выводятся преимущественно через почки в виде конъюгатов, менее 2% - в неизмененном виде, небольшая часть - через кишечник.

Некоторые фармакокинетические параметры бензодиазепинов зависят от возраста. Так, у пациентов пожилого возраста может повышаться объем распределения. Кроме того, у пациентов пожилого возраста и детей может быть удлинен период полувыведения.

Накопление бензодиазепинов с коротким или средним периодом полувыведения обычно минимально, и они быстро выводятся из организма после окончания терапии [3].

.7 Показания к применение бензодиазепиновых анксиолитиков

В психиатрической и неврологической практике анксиолитики применяются при лечении неврозов, психопатий, неврозоподобных и психопатоподобных состояний, сопровождающихся тревогой, страхом, повышенной раздражительностью, эмоциональным напряжением. Для купирования тревожно-фобических расстройств (панические атаки и др.) Эффективны препараты с максимально выраженным анксиолитическим и антифобическим эффектом - алпразолам, лоразепам, феназепам. Некоторые бензодиазепиновые анксиолитики применяют для купирования тревожного синдрома при эндогенных психических заболеваниях, в том числе при шизофрении (как вспомогательное средство в составе комплексной терапии) - диазепам, феназепам и др.

При острых состояниях, например с целью купирования выраженного психомоторного возбуждения, эффективно парентеральное введение бензодиазепинов (диазепам, феназепам и др.).

При острой алкогольной абстиненции анксиолитики (диазепам, оксазепам, феназепам, хлордиазепоксид и др.) применяют в составе комплексной терапии для облегчения таких симптомов как возбуждение, нервное напряжение, беспокойство, тревога, тремор, а также для уменьшения вероятности развития или признаков, в том числе галлюцинаций, возникшего острого делирия.

При нарушениях сна используют бензодиазепины, обладающие, наряду с анксиолитическим, выраженным снотворным действием (нитразепам, флунитразепам, триазолам, темазепам и др.). Они снимают эмоциональное напряжение, уменьшают тревогу, беспокойство и способствуют наступлению сна. Применение при нарушениях сна таких бензодиазепинов, как диазепам или феназепам, целесообразно в тех случаях, когда инсомния сочетается с дневной тревогой и желательно, чтобы анксиолитическое действие продолжалось в течение всего дня.

Бензодиазепины с выраженным противосудорожным действием могут быть эффективны при лечении эпилепсии, эпилептического статуса (клоназепам, диазепам и др.), нитразепам - при некоторых формах судорожных припадков, особенно у детей.

Бензодиазепины, как и другие анксиолитики, нашли широкое применение во многих областях медицины: в кардиологии, анестезиологии и хирургии, дерматологии и др.

Бензодиазепины используют для премедикации накануне и непосредственно перед оперативными вмешательствами и эндоскопическими процедурами, для вводного наркоза, при атаралгезии в сочетании с анальгетиками (флунитразепам, мидазолам, диазепам и др.) [3].

.8 Связь между структурой и физиологической активностью 1,4-бензодиазепинов

Изучение связи структура-активность в рядах биологически активных веществ - важный этап на пути целенаправленного «конструирования» молекул новых препаратов с необходимым комплексом фармакологических свойств.

Уже в начале 60-х годов в ходе интенсивных исследований в области химии и фармакологии 1,4-бензодиазепинов, развернувшихся вслед за открытием хлордиазепоксида и внедрением его в медицинскую практику, предпринимались попытки определения ключевой структуры, обеспечивающей фармакологические свойства нового класса транквилизаторов.

С течением времени было накоплено большое количество данных о связи между структурой и физиологической активностью 1,4-бензодиазепинов. Были выделены следующие особенности:

) Влияние заместителя в положении 7. Электроноакцепторные заместители в положении 7 приводят к повышению активности, а электронодонорные - к понижению. Роль заместителя в определении уровня активности по различным фармакологическим тестам (по различным видам действия) неодинакова, что, вероятно, обусловлено различием механизмов, лежащих в основе соответствующих эффектов.

) Влияние заместителя в положении 5. Наиболее активные транквилизаторы найдены среди 5-арил- либо 5-гетарил-(пиридил, тиенил, индолил и др.)-1,4- бенздиазепинов. Оптимальной активностью обладают соединения, содержащие у атома С₅ бензольное ядро с атомами галогенов или другими электроноакцепторными группами в орто-положении. Введение атомов галогенов в орто-положение кольца С приводит к существенному (в 2 - 5 раз) повышению активности бенздиазепинонов по тесту антагонизма с коразолом.

Мета- и пара-изомеры бенздиазепинов проявляют значительно более низкую активность по всем видам действия. Некоторые из соединений подобного типа практически неактивны как транквилизаторы. Интересно, что активность по тесту антагонизма с коразолом 5-(орто-галоген)фенил- 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов практически не зависит от природы галогена в орто-положении кольца С.

В то же время степень уменьшения активности бенздиазепинов при перемещении атомов галогенов из орто- в мета- и пара-положения, по-видимому, определяется природой атома галогена: чем более электроотрицателен атом галогена, тем менее активны пара-изомеры по сравнению с орто-изомерами.

) Влияние связи N₄→О. Окисление 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов до соответствующих 4-окисей сопровождается, как правило, снижением активности.

) Влияние двойной связи N₄→C₅. Переход от ЗН-1,4-бенздиазепинов к 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепинам, как уже указывалось, привел к более активным препаратам, нежели хлордиазепоксид и его аналоги. Эксперименты на животных показали, что тетрагидро-1,4-бенздиазепин-2-оны проявляют активность по тем же тестам, что и 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-оны, уступая последним по уровню активности. Однако в организме животных тетрагидро-1,4-бенздиазепин-2-оны окисляются до дигидро-1,4-бенздиазепин-2-онов. Поэтому окончательного вывода о роли двойной связи N₄-С₆ в определении активности 1,4-бенздиазепинов пока сделать нельзя, поскольку фармакологический эффект тетрагидробензодиазепинов может быть обусловлен в определенной степени или полностью действием на центральную нервную систему их метаболитов - дигидробенздиазепинонов.

) Влияние заместителей в положении 3. Спектр фармакологической активности 3-замещенных 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов качественно сходен со спектром 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиа-зепин-2-онов, незамещенных в положении 3. Природа заместителей у атома С₃ оказывает существенное влияние на уровень активности бенздиазепинов, причем иногда различное по отдельным видам действия. 3-Алкилпроизводные обладают значительно меньшей активностью по сравнению с незамещенными у атома С₃ веществами. С увеличением объема алкильного радикала активность убывает. Активность хиральных 1,4-бенздиазепинов зависит от их конфигурации. Так, левовращающий изомер (D-форма) 3-пропил-7-хлор-5-фенил-1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздизепин-2-она обладает большей по сравнению с правовращающим изомером активностью по тесту антагонизма с коразолом.

Введение гидроксильной группы в положение 3 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепиновой системы приводит к неоднозначному изменению активности по отдельным видам действия. По антагонизму с коразолом, по тесту максимального электрошока и угнетению ориентировочных реакций активность 3-оксипроизводных в ряде случаев ниже активности незамещенных в положении 3 аналогов. Однако по тестам потенцирования гексеналового сна и нарушения координации движений 3-оксипроизводные более активны. З-Ацил- оксипроизводные, как правило, менее активны, чем соответствующие 3-оксипроизводные. З-Арилиден- и 3-гетарилиденпроизводные менее активны, чем незамещенные в положении 3 бенздиазепиноны. Но некоторые представители данного типа производных 1,4-бенздиазепина, обладая достаточно высокой активностью по основным видам действия, проявляют низкую активность по тем видам действия, которые для транквилизаторов считаются побочными. Это делает перспективным изучение такого рода соединений с целью изыскания так называемых дневных транквилизаторов.

) Влияние группировки в положении 2. Замещение карбонильной группы в 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онах на тиокарбонильную либо метиленовую группу приводит к ослаблению активности, хотя характер действия препаратов на центральную нервную систему принципиально не изменяется.

) Замещение у атома N₁ на метальную группу чаще всего приводит к увеличению активности. Введение в это положение более объемных заместителей сопровождается снижением уровня активности. В некоторых случаях могут получаться практически неактивные производные. Замещение атома водорода в положении 1 на некоторые группы (карбамоильную, ацильные и др.) иногда дает эффект пролонгации действия таких производных 1,4-бенздиазепина.

) Влияние аннелированных циклов. Среди большого количества 1,4-бенздиазепинов с аннелированными циклами наибольший фармакологический и клинический интерес представляют системы с аннелированными гетероциклами в положениях 1, 2, и З, 4. Симметричные триазолобенздиазепины (триазолам, алпразолам и пр.) как транквилизаторы превосходят по активности диазепам [4,6].

.9 Феназепам

.9.1 Препарат «Феназепам»

«Феназепам»являетсяотечественнымвысокоактивным

транквилизатором анксиолитического действия, превосходит другие транквилизаторы; оказывает также выраженное противосудорожное, миорелаксантное и снотворное действие. Механизм действия феназепама связан с уменьшением возбудимости подкорковых центров головного мозга, торможением действия между ними и корой мозга. Феназепам является экзогенным лигандом специфических бензодиазепиновых рецепторов ЦНС. При применении вместе со снотворными и наркотическими средствами происходит взаимное усиление влияния на ЦНС. Феназепам назначают при различных невротических и психатоподобных состояниях, сопровождающихся тревогой, страхом, повышенной раздражительностью, эмоциональной лабильностью. Препарат эффективен при навязчивости, фобии, ипохондрических синдромах, показан также при психогенных психозах, панических реакциях и другие, так как снимает состояние тревоги и страха.

Феназепам применяют также для купирования алкогольной абстиненции. Кроме того, назначают как противосудорожное и снотворное средство. По силе снотворного действия приближается к митразепаму.

Назначают феназепам внутрь в виде таблеток. В амбулаторных условиях назначают взрослым по 0.00025-0.0005 г (0.25-0.5мг) 2-3 раза в день. В условиях стационара суточная доза может быть увеличена до 0.003-0.005г (3-5мг); при лечении эпилепсии суточная доза составляет от 0.002-0.01 г (2-10мг).

Следует учитывать, что в связи с высокой активностью феназепама чаще могут наблюдаться атаксия, сонливость, мышечная слабость, головокружение [10,11].

.9.2 Пространственная форма феназепама

Дигидро-3Н-1,4-бензодизепин-2-оны имеют ваннообразную пространственную форму (рисунок 1.32).

В гетероцикле имеются два практически плоских фрагмента, включающих кратные связи N(8)-C(5)-C(6)-C(13) и C(6)-C(13)-N(12)-C(11), и амидный фрагмент C(5)-N(8)-C(9)-C(11); плоским является также окружение атома углерода карбонильной группы. Атомы N(8), C(5), C(6), C(13) расположены практически в одной плоскости, от которой атомы C(9), C(11) и N(12) отогнуты в сторону.

Рисунок 1.32 - Геометрия молекулы феназепама и торсионные углы в семичленном гетероцикле

Длина связей и валентные углы в молекуле феназепама со стандартными отклонениями показаны на рисунке 1.33. Оба атома азота тригональные.

На рисунке 1.34 представлено расположение молекул феназепама в кристалле. За счет водородных связей между амидными группами молекулы образуют центросимметричные димеры. Длина Н-связи равна 2,9 Е [4].

Рисунок 1.33 - Длины связей и валентные углы со стандартными отклонениями в молекуле феназепама

Рисунок 1.34 - Расположение молекул феназепама в кристалле

.9.3 Фармакокинетика феназепама

Высокая биодоступность феназепама способствует быстрому достижению максимального уровня препарата практически во всех исследуемых субстратах (30 мин), после чего происходит быстрое снижение содержания во всех исследуемых органах и тканях животных. Высокое содержание отмечено в печени, почках и жировых тканях. Снижение логарифма концентраций содержания препарата в печени, почках, жировой ткани и плазме крови осуществляется параллельно. Более высокое содержание препарата в указанных органах обусловлено экскректорными функциями печени, почек и липофильностью препарата и, как следствие, сродством к жировой ткани. Изучение распределения препарата при однократном и длительном введениях продемонстрировало отсутствие депонирования препарата. При изучении распределения препарата и метаболитов в органах и тканях не обнаружено какого-либо органа и ткани, в котором элиминация препарата и метаболитов осуществлялась бы существенно медленнее, чем из плазмы крови. Распределение метаболитов феназепама, продемонстрировало также высокую скорость метаболизма препарата [10].

Одним из направлений биотрансформации феназепама в организме является процесс гидроксилирования, который осуществляется по третьему положению диазепинового цикла (рисунок 1.35). В результате этих превращений образуется 3-оксифеназепам, который является одним из метаболитов феназепама. Наряду с образованием гидроксилированного метаболита в процессе метаболизма феназепама предполагается образование продукта биотрансформации с шестичленным диазепиновым циклом (6-бром-4-фенилхиназолинон) и метаболита с разорванным диазепиновым кольцом (бензофенон) [11].

Выделение феназепама из организма при однократном и длительном введениях происходит в результате нескольких параллельных парциальных процессов:

а) процесс выведения неизменного соединения и процессы образования продуктов окисления препарата (свободных метаболитов);

б) процессы выведения свободных метаболитов феназепама и процессы образования конъюгатов;

в) параллельное образование глюкуроновых и других конъюгатов [4].

Рисунок 1.35- Биотрансформация феназепама в организме

.9.4 Данные о безопасности препарата

Препарат не обладает мутагенными свойствами. Не выявлено токсическое действие феназепама на лейкоциты. Препарат не оказывает воздействия на бласт-трансформацию лимфоцитов крови. В ходе клинического изучения препарата, в основном, регистрировались побочные (или нежелательные) эффекты, характерные для всех транквилизаторов бензодиазепинового ряда и связанные с гипноседативным и миорелаксантным действием препарата. Все наблюдаемые нарушения обычно спонтанно исчезали или значительно уменьшались при стабилизации дозировок и по мере увеличения сроков лечения.

Исследование побочных эффектов при применении феназепама не выявило каких-либо неожиданных или опасных явлений, что дает основания отнести оригинальный отечественный транквилизатор - «Феназепам» - к высокоэффективным и безопасным средством [11,13].

.9.5 Синтез феназепама

Процесс получения фармокопейного феназепема состоит из следующих стадий:

1) подготовка оборудования;

) подготовка сырья, вспомогательных материалов;

) получение «бензофенона» из n-броманилина и о-хлорбензоилхлорида (рисунок 1.36);

n-броманилин о-хлорбензоилхлорид «бензофенон»

Рисунок 1.36 - Схема получения «бензофенона»

) получение технического феназепама:

ацилирование “бензофенона” (рисунок 1.37);

«хлорацетомид»

Рисунок 1.37 - Схема ацилирования “бензофенона”

аминирование «хлорацетомида» (рисунок 1.38);

«аминоацетомид»

Рисунок 1.38 - Схема аминирования «хлорацетомида»

получение феназепама (рисунок 1.39);

феназепам

Рисунок 1.39 - Схема получения феназепама

) получение фармакопейного феназепама (перекристаллизация технического феназепама из толуола);

) регенерация растворителей;

) обезвреживание отходов;

) обезвреживание выбросов в атмосферу [17].

анксиолитик феназепам биохимический фармакокинетика

2. АНАЛИЗ СУБСТАНЦИИ ФЕНАЗЕПАМА И ПРЕПАРАТА «ФЕНАЗЕПАМ»

В экспериментальной части данной работы описаны методы и методики анализа основного действующего вещества в субстанции и в препарате «Феназепам» и соответствие ФС по основным показателям качества, приведены расчеты по изложенным методикам и обсуждение полученных в ходе эксперимента результатов, а так же описан эксперимент по усовершенствованию технологии производства препарата. Анализу подвергались субстанция и готовая продукция препарата «Феназепам». ООО «РОЗФАРМ» не осуществляет самостоятельного производства субстанций феназепама, а приобретает его у других предприятий специализируемых на их изготовлении. В связи с этим входной контроль получаемого сырья очень важен. Исследования проводились в отделе контроля качества ООО «РОЗФАРМ».

.1 Производство препарата «Феназепам»

Производство препарата включает в себя стадии:

) Подготовка сырья феназепама.

Процесс подготовки сырья для производства таблеток включает в себя стадии:

- измельчение сырья;

- просев сырья;

- приготовление увлажнителя.

Измельчение сырья (стеариновой кислоты) производится на микромельнице. Предварительно отвешивают необходимое количество сырья на технических весах.

Просев сырья осуществляют с помощью вибрационного сита. Допускается использование ручного сита. Для просеивания сырья для производства таблеток «Феназепам» (феназепам, сахар молочный, крахмал картофельный) используется сито с диаметром отверстий (0,5±0,03) мм. Для просеивания сырья: кислота стеариновая (измельченная), кальция стеарат используется сито с диаметром отверстий (0,3±0,06) мм.

) Приготовление таблеточной массы.

Процесс приготовления таблетмассы для производства таблеток включает в себя стадии:

- получение гранулята;

- калибровка гранулята;

- опудривание гранулята

- переработка некондиционных таблеток.

В качестве вспомогательных веществ для производства «Феназепам» таблеток 1мг используются: сахар молочный как наполнитель, крахмал картофельный как связующее и разрыхляющее вещество, кальция стеарат как смазывающее вещество, кислота стеариновая как скользящее вещество.

Процесс получения гранулята включает в себя стадии:

- смешивание и увлажнение;

- сушка гранулята.

Для производства таблеток «Феназепам» используют влажное гранулирование, которое проводят в ротогрануляторе. В ротогранулятор загружают действующее вещество, затем добавляют необходимое количество увлажнителя. После смешивания на панели управления ротогранулятора устанавливают режим сушки гранулята. Сушку гранулята осуществляют под вакуумом с периодическим отбором проб для определения влаги, которая должна составлять 2.5+0.5%.

После охлаждения гранулята до температуры 25±5 ^оС продукт подвергают калибровке. Калибровку гранулята проводи на установке для калибровки гранул, на сетке с размером ячеек 1.5 мм.

Опудривание гранулята проводят на смесительной установке, последовательно загружая необходимые количества гранулята, крахмала картофельного с влажностью не более 20%, стеарата кальция или магния, некондиционные измельченные таблетки.

3) Таблетирование таблеточной массы

Процесс таблетирования таблетмассы таблеток включает в себя стадии:

- таблетирование;

обеспыливание таблеток.

Таблетирование таблеточной массы производят на таблетпрессе, предварительно отрегулировав параметры прессования (среднюю массу таблеток, усилие прессования, высоту таблетки). На этой стадии проводят отбор проб таблеток на соответствие по:

- описанию;

средней массе таблеток;

- распадаемости.;

- количественному содержанию.

Обеспыливание таблеток производят в обеспыливателе, который входит в аппаратную схему таблетпресса.

.2 Метод прямого прессования

Метод прямого прессования позволяет значительно сократить производственный процесс за счёт исключения таких стадий, как приготовление гранулирующего раствора, увлажнения, влажного гранулирования, сушки, сухой грануляции. Это позволяет повысить качество готовой продукции, особенно полученной на основе термолабильных и светочувствительных субстанций, увеличивает стабильность препаратов в процессе хранения.

Однако для производительной работы таблеточных машин прессуемый материал должен обладать оптимальными технологическими характеристиками (сыпучестью, прессуемостью, влажностью и др.) Такими характеристиками обладает лишь небольшое число не гранулированных порошков - вещества, имеющие изометрическую форм частиц приблизительно одинакового гранулометрического состава, не содержащих большого количества мелких фракций. Они хорошо прессуются.

Одним из методов подготовки лекарственных веществ к прямому прессованию является направленная кристаллизация - добиваются получения таблетируемого вещества в кристаллах заданной сыпучести, прессуемости и влажности путем особых условий кристаллизации.

Широкое использование прямого прессования может быть обеспечено повышением сыпучести не гранулированных порошков, качественным смешиванием сухих лекарственных и вспомогательных веществ, уменьшением склонности веществ к расслоению.

.3 Методики экспериментов

Анализу подвергалась субстанция феназепама, приобретаемая ООО «РОЗФАРМ» на других предприятиях. Контроль поступившей субстанции позволяет подтвердить подлинность, количественное содержание основного действующего вещества в сырье, которое в последующем используется для изготовления нестерильных лекарственных препаратов. Испытания проводились в соответствии с ФС 42-2411-04.

Таблица 2.1

Числовые показатели, влияющие на качество субстанции феназепама

Наименование показателей	Норма
Температура плавления	225^оС - 230^оС
Посторонние примеси	Не более 0.05%
Потеря в массе при высушивании (определение влаги)	Не более 0.5%
Сульфатная зола	Не более 0.1%
Количественное содержание действующего вещества (феназепама)	Не менее 99%

2.3.1.1 Описание внешнего вида субстанции феназепама

Рисунок 2.1 - Структура феназепама (7-бром-1.3-дигидро-5-(2-хлорфенил)-2Н-1.4-бензодиазепин-2-она)

Феназепам представляет собой белый или белый со слегка желтоватым или кремовым оттенком кристаллический порошок [17].

.3.1.2 Определение растворимости

Растворимость является физическим показателем подлинности субстанции.

Растворимость в фармакопейном анализе рассматривают, как свойство лекарственного вещества растворяться в различных растворителях. Растворимость при постоянной температуре является одной из основных характеристик, с помощью которой подтверждается подлинность лекарственных веществ.

В соответствии с ФС 42-2411-04 субстанция феназепама практически нерастворима в воде и эфире, мало растворима в этиловом спирте 95% и умеренно растворима в хлороформе.

Определение проводят в соответствии с ГФ XII, вып.1, с. 175.

Методика определения растворимости субстанции

Для определения растворимости субстанции феназепама применяют следующие растворители: этиловый спирт 95%, хлороформ.

г субстанции феназепама вносят в 100 см³ хлороформа и непрерывно встряхивают в течение 10 минут при 20±2°С. Предварительно навеска должна быть растерта.

г субстанции феназепама вносят в 1000 см³ этилового спирта 95% и непрерывно встряхивают в течение 10 минут при 20±2°С.

Субстанцию считают растворившейся, если в растворе при наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества [17].

.3.1.3 Определение подлинности

Испытание на подлинность - это подтверждение идентичности анализируемого лекарственного вещества (лекарственной формы), осуществляемое на основе требований ФС 42-2411-04.

Для определения подлинности феназепама разработаны следующие методики.

) Качественная реакция

Реакция на блокированную ароматическую аминогруппу является качественной реакцией на определение лекарственных средств бензодиазепинового ряда. Данная реакция протекает по схеме представленной на рисунке 2.2.

Рисунок 2.2 - Качественная реакция на феназепам

Методика эксперимента

.02 г субстанции феназепама нагревают до кипения с 2 см³разведенной кислоты хлороводородной в течение 3 минут и охлаждают. В полученный раствор добавляют нитрит натрия и проводят реакцию диазотирования. Затем в полученную соль диазония добавляют резорцин в щелочной среде и получают азокраситель красного цвета.

) Специфическая реакция.

При плавлении лекарственных веществ образуются плавы различного цвета, что является специфической реакцией на определении подлинности субстанции феназепама.

При плавлении субстанции феназепама образуется плав фиолетового или красно-фиолетового цвета. Раствор плава феназепама в этиловом спирте 95% имеет особенность, его окраска изменяется в зависимости от рН среды: при рН<7 окраска изменяется от сине-зеленой до желтой, а при рН>7 - в сине-фиолетовую.

Методика эксперимента

Небольшое количество субстанции феназепама нагревают в сухой пробирке над пламенем горелки до образования плава.

Затем к плаву добавляют этиловый спирт 95% и в полученный раствор добавляют раствор едкого натра или разведенную серную кислоту.

) Спектрофотомерия в инфракрасной области.

Инфракрасный спектр химического соединения является одной из его наиболее важных характеристик, так как получаемый ИК - спектр содержит ценную информацию о строении соединений.

ИК - спектры поглощения обусловлены переходами между двумя колебательными уровнями молекулы, находящейся в основном электронном состоянии. В ИК - спектрах проявляются (активны) колебания, которые сопровождаются изменением дипольного момента молекулы.

Методика определения

Инфракрасный спектр субстанции феназепама снимался на спектрометре ИнфраЛЮМ ФТ.

Для определения подлинности субстанции феназепама используются диски с КВr. Навеску твердого вещества (1-3 мг) тщательно смешивают в вибромельнице или в ступке со спектроскопически чистым бромидом калия (150-200 мг) и смесь прессуют при давлении 7.5-10 т/см² в течение 2-5 минут под вакуумом 2-3 мм рт. ст.

Спектр полученного образца снимают относительно воздуха или относительно диска, приготовленного из чистого КВr, помещенного во второй канал прибора [17].

.3.1.4 Определение температуры плавления

Под температурой плавления вещества подразумевают интервал температуры между началом плавления - появлением первой капли жидкости и концом плавления - полным переходом вещества в жидкое состояние. Температура плавления - постоянная характеристика для индивидуального лекарственного вещества. В присутствии даже небольшого количества примесей она изменяется, что используется для подтверждения степени чистоты лекарственного вещества.

Методика определения температуры плавления

Для анализа субстанции феназепама используют прибор для определения температуры плавления с диапазоном измерений в пределах от 20 до 360°С с электрическим обогревом (рисунок 2.3).

Рисунок 2.3 - Прибор для определения температуры плавления

Прибор состоит из следующих частей:

) основание со щитком управления и номограммой;

2) стеклянный блок-нагреватель, обогрев которого осуществляется константановой проволокой, навитой бифилярно;

3) оптическое приспособление;

4) приспособление для установки термометров;

5) приспособление для установки капилляров;

6) термометр укороченный с ценой деления 0.5°С;

7) источник нагрева (электрический обогрев);

8) капилляры длиной 20 см.

Колбу наполняют на ѕ объема шара концентрированной серной кислотой. Тонко, измельченную субстанцию феназепама сушат при температуре от 100 до 105°С в течение 21 ч. Высушенную субстанцию помещают в капилляр, имеющий диаметр от 0.9 до 1 мм и толщину стенки от 0.1 до 0.15 мм, запаянный с одного конца.

При плавлении в приборе длина капилляра должна быть 20 см. Для уплотнения вещества капилляр многократно бросают в стеклянную трубку высотой не менее 50 см, поставленную вертикально на стекло. Высота слоя вещества в капилляре должна быть около 3 мм. Капилляр с веществом сохраняют до начала определения в эксикаторе.

Во внутреннюю пробирку прибора помещают термометр так, чтобы конец его отстоял от дна пробирки на 1 см.

Нагревание в приборе проводят сначала быстро, а затем регулируют его так, чтобы за 10°С до начала плавления была достигнута необходимая скорость подъема температуры, указанная ниже.

За 10°С до ожидаемого начала плавления капилляр с веществом вносят в прибор таким образом, чтобы запаянный конец его находился на нижней части столика, расположенной на уровне середины ртутного шарика термометра.

Продолжают нагревание со скоростью от 1.5 до 2°С в 1 минуту;

Проводят не менее двух определений; за температуру плавления принимают среднее арифметическое значение нескольких определений, проведенных в одинаковых условиях и отличающихся друг от друга не более чем на 1°С [17].

2.3.1.5 Прозрачность раствора

Прозрачность раствора является физическим показателем для определения чистоты лекарственного вещества.

Методика определения

Прозрачность жидкости определяют путем сравнения испытуемой жидкости с растворителем или эталонами.

.1 г навески субстанции феназепама растворяют в 10 см³ хлороформа и сравнивают с раствором хлороформа. Раствор субстанции феназепама не должен отличаться от растворителя.

Испытание проводят при освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40 Вт на черном фоне при вертикальном расположении пробирок (рисунок 2.4).

Рисунок 2.4- Схема просмотра прозрачности жидкости

На рисунке 2.4 приведены следующие обозначения: 1- источник света, 2 - экран, 3 - зона контроля, 4 - глаза.

Жидкость считают прозрачной, если при ее рассмотрении невооруженным глазом не наблюдается присутствие нерастворенных частиц, кроме единичных волокон [17].

.3.1.6 Цветность раствора

Цветность раствора является физическим показателем чистоты лекарственного вещества. Возможное появление окраски обусловлено присутствием посторонних примесей.

Методика определения

Берут точную навеску субстанции феназепама и растворяют в 10 см³хлороформа, затем сравнивают полученный раствор с раствором хлороформа.

Исследуемые жидкости берут для сравнения в равных количествах. Сравнение проводят в пробирках одинакового стекла и диаметра при дневном отраженном свете на матово-белом фоне.

Окраска исследуемого образца должна быть вполне идентична эталону или только приближаться к отмеченной окраске, не превышая ее по интенсивности, но несколько отличаясь от нее по тону. Жидкость рассматривают сверху через весь слой жидкости на матово-белом фоне. Исследуемый раствор считается бесцветным, если он не отличается от цвета растворителя [17].

.3.1.7 Посторонние примеси

Содержание примесей должно строго контролироваться, что бы исключить присутствие токсичных соединений или наличие индифферентных веществ в лекарственных средствах в таком количестве которые мешают их использование для конкретных целей.

Определение посторонних примесей в субстанции феназепама проводят при помощи тонкослойной хроматографии.

Методика определения:

.01 г препарата растворяют в 1 см³ ацетона (раствор №1). 0.02 см³полученного раствора №1 (200 мкг) наносят на линию старта пластинки Силуфол УФ 254 размером 5x15 см. Рядом, в качестве свидетеля, наносят 0.01 см³ 0.001% раствора феназепама (0.1 мкг) в ацетоне (раствор №2). Пластинку с нанесенной пробой высушивают на воздухе в течение 5 минут, а затем помещают в камеру со смесью растворителей этилацетат, гексан, кислота муравьиная в соотношении (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя пройдет расстояние 10 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин, а затем просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме раствора №1 должно быть одно пятно, совпадающее по интенсивности и расположению с хроматограммой раствора № 2.

Подготовка пластины: пластинку Силуфол УФ 254 помещают в камеру для хроматографирования со смесью растворителей этилацетат, гексан, кислота муравьиная в соотношении (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластины, ее вынимают из камеры и высушивают на воздухе в течение 30 минут. Смесь растворителей для элюирования должна быть свежеприготовленной.

Приготовление 0.001% раствора феназепама (раствор №2): 0.01 г феназепама растворяют в 10 см³ ацетона; из полученного раствора отбирают 1 см³, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора ацетона до метки. Раствор должен быть свежеприготовленным [17].

.3.1.8 Потеря в массе при высушивании

Под влагой субстанции понимают потерю в массе за счет гигроскопической влаги и летучих веществ, которую обнаруживают при высушивании субстанции до постоянной массы.

Содержание влаги в лекарственной субстанции служит одним из числовых показателей, характеризующий ее доброкачественность. Субстанция не должна содержать влаги выше допустимых норм, так как повышенная влажность при хранении создает условия, способствующие снижению качества субстанции.

Допустимый предел потери в массе при высушивании составляет 0.5%.

Методика определения

Точную навеску субстанции феназепама помещают в предварительно высушенный и взвешенный бюкс и сушат до постоянной массы. Если высушивание проводилось при нагревании, открытый бюкс вместе с крышкой помещают в эксикатор для охлаждения на 50 мин, затем закрывают крышкой и взвешивают. Первое взвешивание проводят после сушки в течение 2 ч. Последующие взвешивания проводят после каждого часа дальнейшего высушивания [17].

Определение проводят по формуле 2.1:

, (2.1)

где m₁ - масса навески до высушивания;

m₂-масса навески после высушивания.

.3.1.9 Определение сульфатной золы

Золой называют остаток неорганических веществ, получаемый после сжигания сырья и последующего прокаливания остатка до постоянной массы.

При определении содержания золы необходимо помнить, что результаты зависят от длительности и температурного режима всего процесса озоления. Первое, на что следует обратить внимание, - это полнота сжигания. При быстром сжигании и высокой температуре может произойти сплавление частичек золы, сплавленные частички захватывают и покрывают собой несгоревшие еще частички сырья, в результате чего озоление проходит не полностью. На результат анализа влияют также длительность и температура прокаливания остатка, полученного после сжигания сырья.

Если содержание сульфатной золы превышает норму 0.1%, то это может привести к побочному фармакологическому эффекту.

Методика определения

Точную навеску препарата около 1 г, помещают в предварительно прокаленный и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, смачивают 1 см³ концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают на сетке или песчаной бане до удаления паров серной кислоты. Затем прокаливают при слабом калении (около 500 °С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

В случае трудного сгорания прибавление концентрированной серной кислоты и прокаливание повторяют [17].

Содержание сульфатной золы определяется по формуле 2.2:

, (2.2)

где m₁ - масса навески до высушивания;

m₂ - масса навески после высушивания.

.3.1.10 Количественное определение действующего вещества в субстанции феназепама

Количественное определение проводят в соответствии с ФС 42-2411-04

Методику количественного определения феназепама проводят путем неводного титрования 0.1 н раствором хлороводородной кислоты в среде хлороформа и уксусного ангидрида (1:1). В качестве индикатора используют кристаллический фиолетовый. Титрование ведут до желтого окрашивания. Использование хлороформа повышает растворимость феназепама в растворе уксусного ангидрида, так как в нем субстанция не растворима.

Методика определения

Около 0.3 г препарата растворяют в смеси 20 см уксусного ангидрида и хлороформа и титруют 0.1 н раствором кислоты хлороводородной до желтого окрашивания (0.15 см³ ) [17]. Расчет ведут по формуле 2.3.

, (2.3)

где V - объем кислоты пошедшей на титрование;

х - концентрация раствора, используемого для титрования;

m₀ - масса навески;

W - потеря при высушивании.

см³ 0.1 н раствора кислоты хлороводородной соответствует 0.03496 г C₁₅H₁₀BrClN₂O.

.3.2 Методики определения готовой продукции препарата «Феназепама»

Анализу подвергался препарат «Феназепам», изготовленный на предприятии ООО РОЗФАРМ. Испытания проводились в соответствии ФСП 42-0284679805.

Препарат анализировался на подлинность, количественное содержание действующего вещества и другие показатели качества. В таблице 2.2 представлены основные числовые показатели, влияющие на качество готового препарата.

Таблица 2.2

Числовые показатели, влияющие на качество препарата «Феназепам» таблеток

Наименование показателей	Норма
Растворение	Не менее 70% за 45 минут
Посторонние примеси	Не более 0.25%
Количественное определение	От 0.0009 до 0.0011 г
Однородность дозирования	±15%

2.3.2.1 Определение подлинности препарата

Испытание на подлинность - это подтверждение идентичности анализируемого лекарственного препарата, осуществляемое на основе требований ФС.

Наиболее точным и высокочувствительным является спектрофотометрический метод анализа, который основан на способности 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-онов избирательно поглощать монохроматический свет в определенной области спектра. В их спектрах наблюдают три полосы поглощения с максимумами при 200-215, 220-230, 240-255 нм. Две первые полосы соответствуют возбуждению ароматических хромофоров, третью - длинноволновую полосу относят к азометиновой связи, сопряженной с бензольным кольцом [18].

Методика определения

Измерения оптической плотности проводят на спектрофотометре в диапазоне длин волн 200-255 нм, в кюветах с толщиной слоя 10 мм, относительно раствора стандартного образца (РСО).

Приготовление исследуемого раствора

Около 0.75 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.001 г или около 0.6 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, прибавляют 25 см³ спирта 95% и встряхивают в течение 10 минут.

Доводят объем раствора спиртом 95% до метки, встряхивают и фильтруют.

Приготовление раствора РСО феназепама.

.05 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, взбалтывают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор 1) [18].

.3.2.2 Определение растворимости препарата

Растворимость является физическим показателям подлинности полученного препарата.

Растворимость препарата «Феназепам» определяется спектрофотометрическим методом.

Методика определения растворимости

Приготовление раствора препарата проводят в соответствии с требованиями ОФС 42-0003-04, используя прибор типа «Вращающаяся корзина».

В корзину помещают одну таблетку. Через 45 мин раствор фильтруют через фильтр типа «Миллипор», с диаметром пор 0.45 мкм или бумажный фильтр, отбрасывая первые 15 см³ фильтрата. 10 см³ фильтрата для таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 25 см³ и доводят объем раствора 0.1 н раствором НСl до метки.

Для дозировки 0.001 г используется 25 см³ непосредственного фильтрата.

Определение оптической плотности раствора

Измерение оптической плотности полученного раствора проводят на спектрофотометре при длине волны 232 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора рабочего стандартного образца (РСО) феназепама.

В качестве раствора сравнения используют 0.1 м раствор НС1. Количество феназепама, перешедшего в раствор в % (X) вычисляют по формуле 2.4.

, (2.4)

где D₁ - оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора РСО феназепама;

а₀ - навеска РСО феназепама, грамм;

В - содержание феназепама в одной таблетки в граммах;- объем пробы, взятой для определения, в см³;

Р - содержание основного вещества в РСО феназепама в %.

В раствор через 45 мин должно перейти не менее 70% (Q) феназепама.

Приготовление раствора РСО феназепама

.08 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 200 см³, растворяют в 10 см³ спирта 95%, доводят объем раствора 0.1 н раствором хлороводородной кислотой до метки и перемешивают. 1 см³ полученного раствора вносят в мерную колбу вместимостью 200 см³, доводят объем раствора 0.1 н хлороводородной кислотой до метки и перемешивают.

Срок годности раствора 1 сутки [18].

.1.2.3 Определение однородности дозирования

Проводят для таблеток без оболочки с содержанием 0.05 г и менее лекарственного вещества и для таблеток, покрытых оболочкой, с содержанием лекарственного вещества 0.01 г и менее. От серии, подлежащей испытанию, отбирают пробу таблеток в количестве 30 штук. В каждой из 10 таблеток определяют содержание лекарственного вещества. Содержание лекарственного вещества в одной таблетке может отклоняться более чем на ±15% от среднего содержания, и ни в одной таблетке не должно превышать ±25%. Если из 10 испытанных таблеток 2 таблетки имеют отклонения содержание лекарственного вещества более чем на ±15% от среднего, определяют содержание лекарственного вещества в каждой из оставшихся 20 таблеток. Отклонение в содержании лекарственного вещества ни в одной из 20 таблеток не должно превышать более чем ±15% от среднего.

Для осуществления данного определения используют спектрофотомерический метод.

Определение проводят в соответствии с требовании ГФ XII, вып. 2, с.154.

Методика определения

Одну таблетку помещают в мерную колбу вместимостью 25 см³, прибавляют 1.5 см³ воды, встряхивают в течение 5 минут. Прибавляют 20 см³ спирта 95% взбалтывают в течение 5 минут, доводят объем раствора спиртом 95% до метки, перемешивают и фильтруют через плотный бумажный фильтр. 12.5 см³ фильтрата для таблеток с дозировкой 0.001 г или 5 см³ для таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 232 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО феназепама. В качестве раствора сравнения используют смесь спирт 95% - вода (1:10). Содержание феназепама в одной таблетки в граммах (X) вычисляют по формуле2.5:

, (2.5)

где D₁ - оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора РСО феназепама;

а_о - навеска РСО феназепама, г;- объем исследуемой пробы, взятой для определения, в см³;

Р - содержание основного вещества в РСО феназепама в %.

Приготовление раствора РСО феназепама

Около 0.05 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, взбалтывают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор 1).

Срок годности раствора 1 месяц при хранении в холодильнике [18].

.3.2.4 Определение посторонних примесей

Содержание примесей должно строго контролироваться, чтобы исключить присутствие токсичных соединений или наличие индифферентных веществ в лекарственных средствах в таком количестве которые мешают их использование для конкретных целей.

Определение посторонних примесей в препарате «Феназепам» проводят методом тонкослойной хроматографии.

Методика определения

.6 г порошка тщательно растертых таблеток для дозировки 0.01 г или 0.48 г для дозировки 0.0025 г взбалтывают с 2 см³ ацетона в течение 5 минут и фильтруют через бумажный фильтр.

На линию старта предварительной подготовленной пластинки Kieselgel 60 F254 размером 10x20 см наносят 0.05 см³ (100 мкг) и 0.01 см³ (20 мкг) полученного раствора. Рядом наносят 0.02 см (20 мкг) раствора стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) феназепама, 0.05 см³ (0.25мкг), 0.02 см (0.1 мкг) и 0.01 см³ (0.05 мкг) раствора СОВС 1 феназепама. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 минут, помещают в насыщенную камеру со смесью этилацетат - гексан - кислота муравьиная (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом.

Когда фронт подвижной фазы пройдет 15 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 15 минут и просматривают в УФ свете при длине волны 254 нм.

На хроматограмме препарата (100 мкг) кроме основного пятна допускается появление только одного пятна примеси, которое по величины и интенсивности не должно превышать пятно на хроматографе 0.25 мкг СОВС феназепама (не более 0.25%).

Проверка пригодности хроматографической системы.

Приготовление раствора СОВС феназепама: 0.05 г феназепама растворяют в 20 см³ ацетона в количественной колбе со спиртом вместимостью 50 см³.

Срок годности раствора 1 месяц при хранении в холодильнике.

Приготовление раствора СОВС 1 феназепама.

.5 см³ раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора ацетоном до метки.

Приготовление пластинки: Пластинку с закрепленным слоем силикагеля Kieselgel 60 F₂₅₄ раствором 10x20 см помещают в камеру для хроматографирования со смесью этилацетат - гексан - кислота муравьиная (15:5:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 30 минут. Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме СОВС 1 четко видно пятно (0.05 мкг) [18].

.3.2.5 Количественное определение действующего вещества в препарате «Феназепам»

Количественное определение основного действующего вещества в препарате определяется при помощи спектрофотометрического метода.

Методика определения

Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 232 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

.75 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.001 г или 0.6 г (точная навеска) порошка растертых таблеток с дозировкой 0.0025 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, прибавляют 25 см³ спирта 95% и встряхивают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки, встряхивают и фильтруют (раствор А).

см³ раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор Б).

, (2.6)

где D₁ - оптическая плотность исследуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора РСО феназепама;

a₁ - навеска порошка растертых таблеток в граммах;

а₀ - навеска РСО феназепама, грамм;

b - средняя масса таблетки, грамм;

Р - содержание основного вещества в РСО феназепама в %.

Содержание феназепама должно быть от 0.0009 до 0.0011 г для дозировки 0.001 г и от 0.00225 до 0.00275 г для дозировки 0.0025 г считая на среднюю массу таблетки.

Приготовление раствора РСО феназепама. Около 0.05 г (точная навеска) феназепама помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, взбалтывают в течение 10 минут. Доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор 1).

Срок годности раствора 1 месяц при хранении в холодильнике.

см³ раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят объем раствора спиртом 95% до метки и перемешивают (раствор А).

см³ раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, доводят объем раствора до метки и перемешивают (раствор Б) [18].

.3.2.6 Оценка фармацевтической эквивалентности таблетизированных лекарственных форм феназепама

Цель эксперимента - проведение сравнительной оценки фармацевтической эквивалентности (по профилям растворения) лекарственных форм психотропного лекарственного средства феназепама на примере таблеток, полученных по действующей технологии (1), таблеток полученных методом прямого прессования (3) и таблеток, с измененным составом и полученных с использованием размолотой субстанции (2).

Исследовались таблетки феназепама 0,001 г 3-х вариантов, соответствующих требованиям действующей ФСП (кроме качественного состава).

Испытание на растворение проводится по методике, описанной в ФСП на препарат «Феназепам» таблетки 1 мг", используя вместо одной временной точки отбора проб несколько точек.

Тест проводится на приборе SOTAX AT 7 smart (Швейцария), аппарат типа "Вращающаяся корзинка", скорость вращения 100 об/мин. В качестве среды растворения используется 0.1 М раствор кислоты хлористоводородной, объем среды растворения 500 мл, температура 37 °С.

Испытание проводится на 12 таблетках для каждого препарата. Отбор проб осуществляется через 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 и 45 мин после начала испытания. Объем пробы составляет 10 мл, после отбора среду растворения восполняют в том же объеме. Отобранные пробы фильтруются через мембранный фильтр типа "Millipore" с размером пор 0,45 мкм.

Содержание активного вещества, высвободившегося в среду растворения, определяется методом УФ-спектрофотометрии по интенсивности поглощения испытуемых растворов. Измерение оптической плотности проводится на спектрофотометре СФ-46 в кювете с толщиной слоя 10 мм в максимуме поглощения при длине волны 243 нм относительно раствора рабочего стандартного образца (РСО) феназепама.

Для каждого установленного промежутка времени процент высвободившегося лекарственного вещества (ЛФ) феназепама рассчитывается по формуле, учитывающей восполнение среды растворения.

Эквивалентность кинетики растворения исследуемых ЛФ оценивается с помощью коэффициента различия и коэффициента подобия.

Коэффициент различия (f₁) показывает процент ошибки между двумя кривыми по всем временным точкам и рассчитывается по формуле 2.7:

f₁ = (2.7)

где n - число точек времени;

R_j и T_j - процентное содержание лекарственного вещества, высвободившегося в среду растворения, в момент времени j.

Коэффициент различия равен нулю, если профили испытуемого и стандатного ЛС идентичны. По мере увеличения различия между двумя профилями растворения значение коэффициента возрастает.

Коэффициент подобия (f₂) - это величина, представляющая собой логарифмическое преобразование значения суммы квадратов ошибок, рассчитанных по разности между испытуемым T_j и стандартным образцом R_j во всех точках времени. Коэффициент подобия рассчитывается по формуле 2.8:

f₂ = (2.8)

где n - число точек времени;

Коэффициент подобия может принимать значения от 0 до 100. По мере уменьшения эквивалентности профилей растворения значение коэффициента подобия приближается к 0.

Профили растворения принято считать эквивалентными (подобными), если значение f₁находится в пределах диапазона от 0 до 15 и значение f₂находится в пределах диапазона от 50 до 100 [19,21,23].

.4 Результаты и обсуждения

Исследования проводились в контрольно-аналитической лаборатории отдела контроля качества (ОКК) ООО «РОЗФАРМ». В качестве объектов исследования были выбраны входное сырье (субстанция) феназепама и готовая форма препарата «Феназепам».

.4.1 Анализ субстанции феназепама по основным показателям качества

Исследования проводились с готовой субстанцией феназепама, поставщик ООО «Протек - СВМ» на соответствии ФСП 42-2411-04. Для объективной и достоверной оценки качества данной субстанции по всем проверяемым показателям проводились 3 параллельных опыта с пробами из этого образца.

2.4.1.1 Описание субстанции феназепама

По внешнему описанию все 3 пробы представляли собой белый кристаллический порошок с сероватым оттенком, что соответствует показателю качества субстанции.

2.4.1.2 Растворимость субстанции феназепам

Исследование проводилось в соответствии с методикой, приведенной в п. 2.3.1.2.

Проведение анализа показало, что субстанция феназепама мало растворима в этиловом спирте 95% и умеренно растворима в хлороформе, что соответствует норме, и доказывает подлинность субстанции феназепама.

.4.1.3 Определение подлинности

Испытание на подлинность субстанции феназепама проводилось несколькими методами, представленными в методике 2.3.1.3.

1) Качественная реакция на блокированную ароматическую аминогруппу: при прибавлении к 0.02 г субстанции феназепама 2 см³ разведенной кислоты хлороводородной, нитрита натрия и резорцина наблюдалось красное окрашивание, что свидетельствовало о присутствии вещества бензодиазепинового ряда. Таким образом, качественная реакция положительная.

2) Специфическая реакция: при плавлении субстанции феназепама образовывался плав красно-фиолетового цвета. При добавлении в плав раствора едкого натра красно-фиолетовая окраска раствора плава в 95%-ном спирте переходит в сине-фиолетовую, а при добавлении разведенной серной кислоты - в сине-зеленую, зеленую и желтую.

3) Спектрофотометрия в инфракрасной области: при исследовании ИК-спектра феназепама были рассмотрены характеристические частоты основных функциональных групп, входящих в его состав.

Для вторичных амидных групп характерно наличие поглощения в области валентных колебаний связей N - Н (3500 - 3100 см^-1). Так, в спектре наблюдаются интенсивные полосы поглощения при 3200 см^-1 и 3100 см^-1. Согласно литературным данным вторичные амиды могут давать две полосы.

Полоса деформационных колебаний NH-групп (вторичных аминов) расположена в области 1600-1500 см^-1, обычно слабая и сливается с поглощением ароматического кольца (1625-1440 см^-1).

В области карбонильных поглощений (1900-1580 см^-1) амидная группа имеет две полосы поглощения. Первая из них наблюдается при 1690 см^-1, эта полоса обусловлена сложными колебаниями карбонильной группы, в которых принимает большое участие связь N-H. Вторая при 1600 см^-1. Поглощение связи C=N (в цикле) отвечает полоса поглощения 1580 см^-1.

В области 1625-1440 см^-1 наблюдаются интенсивные полосы поглощения, отвечающие валентным колебаниям ароматического кольца.

Валентные колебания С - Н связи отвечают полосы в 3000 см^-1и 2910 см^-1, 1175-860 см^-1 отвечают деформационным колебаниям СН связи ароматического кольца.

ИК-спектр субстанции феназепама представлен на рисунке 2.5

.4.1.4 Определение температуры плавления

Исследования проводились в соответствии с методикой, представленной в п.2.3.1.4.

Температура плавления для вещества феназепам составляет от 225°С - 230°С. В ходе проведения эксперимента было получено, что субстанция феназепама плавиться от 225.5°С - 226°С, что подтверждает подлинность вещества.

Рис. 2.5

2.4.1.5 Прозрачность раствора

Определение проводилось в соответствии с методикой 2.3.1.5. Исследование показало, что раствор феназепама в хлороформе прозрачен, что говорит о том, что в нем нет ни каких посторонних частиц других веществ.

2.4.1.6 Цветность раствора

Определение проводилось в соответствии с методикой 2.3.1.6. Исследование показало, что раствор феназепама в хлороформе бесцветен, это говорит о чистоте субстанции, В ней не содержится посторонних примесей других веществ.

.4.1.7 Посторонние примеси

Наличие примесей определялось методом тонкослойной хроматографии согласно с методикой, представленной в п. 2.3.1.7.

Посторонние примеси в субстанции феназепама определяется тонкослойной хроматографией.

Рисунок 2.6 - Хроматограмма субстанции феназепама

При рассмотрении полученной хроматограммы при ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм мы наблюдаем пятна. Пятно исследуемого раствора феназепама совпадает по интенсивности и R_f с пятном свидетеля.

.4.1.8 Потеря в массе при высушивании

Определение проводились в соответствии с методикой 2.3.1.8., было рассчитана по формуле 2.1 процентная потеря в массе при высушивании; результаты представлены в таблице 2.3.

Таблица 2.3

Количественное содержание влаги в субстанции феназепама

Масса навески, г	Масса бюкса с навеской, г	Вес бюксов с навеской после сушки, г		Потеря в массе при высушивании W,%	Среднее значение из 3-х параллельных испытаний W,%	Допустимый предел значений, %
0.4846	32.3321	32.3318	32.3321	0.06	0.076	Не более 0.5%
0.5934	32.6647	32.6642	32.6647	0.08
0.5354	32.2554	32.2549	32.2554	0.09

Среднее значение равно 0.076%, оно удовлетворяет норме (не более 0.5%) по данному показателю качества субстанции.

.4.1.9 Сульфатная зола

Определение сульфатной золы проводилось по методике, описанной в 2.3.1.9, было рассчитано по формуле 2.2 содержание золы в субстанции феназепама; результаты приведены в таблице 2.4.

Таблица 2.4

Содержание сульфатной золы в субстанции феназепама

Масса навески, г	Масса прокаленных тиглей с навеской, г	Масса тиглей после прокаливания с навеской, г		Содержание золы в %	Среднее значение %	Допустимый предел значений, %
1.10700	17.51335	17.51332	17.51335	0.003	0.004	Не более 0.1%
1.00400	21.19495	21.19490	21.19495	0.005
1.00700	18.51245	18.51241	18.51245	0.004

Среднее значение содержания сульфатной золы составило 0.004%. Оно удовлетворяет норме (не более 0.1%) по данному показателю качества.

.4.1.10 Количественное определение действующего вещества

Количественное определение проводилось по методике, представленной в 2.1.1.11, расчет проводился по формулt 2.3, было рассчитано содержание действующего вещества в субстанции. Все результаты приведены в таблице 2.5.

Среднее значение содержания действующего вещества - феназепама составляет 99.58%. Оно удовлетворяет норме (не менее 99%) по данному показателю качества.

Таблица 2.5

Количественное содержание основного вещества феназепам в субстанции феназепама

Масса, г	Объем, см³	Содержание, %	Среднее значение, %	Допустимый предел значений
0.19725	5.74	99.32%	99.58%	Не менее 99%
0.27165	7.89	99.61%
0.26170	7.62	99.81%

Все числовые показатели, характеризующие качество субстанции феназепама, сведены в таблице 2.6.

Таблица 2.6

Сводная таблица результатов анализа субстанции феназепама

Числовые показатели	Норма	Результаты испытаний
Температура плавления	225°-230°С	225.5°С - 226°С
Посторонние примеси	Не более 0.05%	Менее 0.5%
Потеря в массе при высушивании	Не более 0.5%	0.076%
Сульфатная зола	Не более 0.1%	0.004%
Количественное определение	Не менее 99%	99.58%

.4.2 Анализ готовой лекарственной формы «Феназепам» по основным показателям качества

Исследования проводились с готовой лекарственной формой феназепама в соответствии с ФСП 42-0284679805.

.4.2.1 Описание лекарственной формы

Таблетки «Феназепама» - белого цвета плоскоцилиндрической формы с фаской.

.4.2.2 Испытание на подлинность

Испытание подлинности поводилось при помощи спектрофотометрического метода.

УФ спектр поглощения испытуемого раствора (п. 2.3.2.1) в области длин волн от 200 до 255 нм. Результаты трех параллельных измерений представлены в таблице 2.8.

Таблица 2.8

Значение оптической плотности

Длина волны X	Оптическая плотность D
	1	2	3
200	0.21	0.211	0.213
205	0.23	0.225	0.231
208	0.244	0.24	0.242
209	0.245	0.246	0.247
210	0.247	0.248	0.249
211	0.245	0.246	0.247
212	0.243	0.244	0.244
213	0.241	0.242	0.242
214	0.239	0.238	0.236
215	0.236	0.234	0.233
217	0.232	0.225	0.227
220	0.251	0.245	0.243
221	0.275	0.276	0.273
222	0.295	0.29	0.295
226	0.315	0.31	0.312
227	0.32	0.321	0.322
230	0.345	0.35	0.35
235	0.4	0.41	0.41
240	0.47	0.471	0.471
242	0.495	0.496	0.499
243	0.52	0.521	0.514
244	0.526	0.525	0.521
245	0.531	0.53	0.524
246	0.528	0.527	0.523
247	0.526	0.525	0.521
248	0.523	0.522	0.518
250	0.502	0.5	0.49
253	0.459	0.458	0.448
255	0.434	0.44	0.42

На основании экспериментальных данных, представленных в таблице, были построены графики зависимости оптической плотности от длины волны (рисунок 2.7)

Как видно из графиков максимум наблюдается при длине волны: 210 нм (D₁=0.247, D₂=0.248, D₃=0.248), 227 нм (D₁=0.32, D₂=0.34, D₃=0.322), 245 нм (D₁=0.531, D₂=0.530, D₃=0.524). Полученные значения λ_max удовлетворяют норме по данному показателю качества.

.4.2.3 Определение растворимости

Определение проводилось в соответствии с методикой 2.3.2.2, по формуле 2.2 была рассчитана растворимость таблеток «Феназепама»; результаты представлены в таблице 2.7.

Таблица 2.7

Определение растворимости готовой формы препарата «Феназепам»

№	Длина волны	Оптическая плотность, D	Растворимость препарата, %	Среднее значение оптической плотности, %	Допустимый предел значений, %
PCO	243 нм	0.174	-	-	-
Проба 1		0.159	92.41	92.31	Не менее 70% через 45 минут
Проба 2		0.166	96.48
Проба 3		0.151	87.76
Проба 4		0.153	88.92
Проба 5		0.164	95.31
Проба 6		0.160	92.99

Среднее значение растворимости препарата в пробах оказалось равным 92.31%. Оно удовлетворяет норме (не менее 70%) по данному показателю качества.

.4.2.4 Определение посторонних примесей

Наличие примесей в препарате определялось методом тонкослойной хроматографии, согласно с методикой 2.1.2.4.

При рассмотрении полученной хроматограммы при ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм мы наблюдаем пятна. Пятно исследуемого раствора совпадает по интенсивности с пятном свидетеля.

Рисунок 2.8 - Хроматограмма «Феназепама» таблеток

.4.2.5 Однородность дозирования

Определение однородности дозирования в препарате «Феназепам» проводилось по методике, указанной в п. 2.3.2.3. Для исследования было отобрано 10 таблеток.

Однородность дозирования в таблетке препарата представлена в таблице 2.8.

Таблица 2.8

Однородность дозирования в таблетке препарата «Феназепам»

№	Объем титранта, см3	Объем титранта в контрольном опыте, см3	Среднее содержание феназепам, г	Однородность дозирования, %	Предельно допустимое значение, %
1	5.46			-0.05643289
2	5.2			-0.5346789
3	5.36			-0.5328765
4	5.54			-0.8734087
5	5.67	0.06	0.0643897	2.04235679	±15
6	5.48			-2.5439076
7	5.65			-0.5389754
8	5.43			-0.3287653
9	5.73			0.9699756
10	5.43			-0.0436864

2.4.2.6 Количественное определение действующего вещества в препарате «Феназепам»

Определение проводилось в соответствии с методикой 2.3.2.5, по формуле 2.4 было рассчитано количественное содержание действующего вещества препарата «Феназепама»; результаты представлены в таблице 2.9.

Таблица 2.9

Количественное содержание действующего вещества в препарате «Феназепам» таблеток

	Масса, г	Оптическая плотность D	Количественное содержание X, г	Среднее значение, г	Допустимый предел значений, г
РСО	0.0506	0.520	-	-	-
Проба 1	0.7520	0.508	0.000977	0.000982	0.00090 - 0.00110
Проба 2	0.7533	0.514	0.000987

Среднее значение равно 0.00982 г, оно удовлетворяет норме (0.00090 г - 0.001 10 г) по данному показателю качества субстанции.

Все числовые показатели, характеризующие качество препарата «Феназепам», сведены в таблице 2.10.

Таблица 2.10

Сводная таблица результатов анализа готового препарата «Феназепам» таблеток

Числовые показатели	Норма	Результаты испытаний
Растворение	Не менее 70% за 45 мин.	92.31%
Посторонние примеси	Не более 0.25%	Не более 0.25%
Количественное содержание	От 0.0009 до 0.0011 г	0.00982г

.4.2.7 Оценка фармацевтической эквивалентности таблетизированных лекарственных форм феназепама

Таблетная масса феназепама (образец 3) на основе выбранной матрицы вспомогательных веществ имела небольшую сыпучесть (5.0 г/с), высокое значение прочности полученных из неё таблеток (150-170 Н), небольшое время их распадаемости (6-7 мин). Однако, таблетки не соответствовали требованиям ФСП 42-0017-47780-04 по показателю «Растворение» (40-60%). Размол субстанции на шаровой мельнице до размера частиц 50 мкм приводил к сильной электризации. Для равномерного распределения субстанции в массе было проведено предварительные смешивание и просев субстанции с аэросилом, крахмалом картофельным и лактозой (образец 2).

Таким образом, для прямого прессования таблеток феназепама оптимльным оказался следующий состав вспомогательных веществ: микрокристаллическая целлюлоза, лактозы моногидрат, магния стеарат, Коллидон 25, Примогель и аэросил.

Результаты сравнения профилей растворения исследуемых объектов с профилем растворения таблеток «Феназепам» таблетки 1 мг по вышеуказанной методике представлены в таблице 2.11 и 2.12.

На рисунке 2.9 представлены усредненные профили растворения феназепама.

Рисунок 2.9 - Профили растворения таблетизированных лекарственных форм феназепама:

- таблетки препарата «Феназепам» таблетки 1 мг; 2 - таблетки, полученные методом прямого прессования из размолотой субстанции; 3 - таблетки, полученные методом прямого прессования.

Таблица 2.11

Сравнение эквивалентности профилей растворения таблеток «Феназепама» 1 мг и таблеток, полученных методом прямого прессования из размолотой субстанции

Время, мин	Концентрация ЛС, высвободившегося в среду растворения, С (%)		Стандартное отклонение среднего значения, %		Значение коэффициентов		Подобие
	Таблетки феназепам 1 мг	Таблетки испытуемого образца (2)	Таблетки феназепам 1 мг	Таблетки испытуемого образца (2)	f1	f2
5	36	37	8	7	1,88	88,1	да
10	56	56	5	3
15	70	69	4	2
20	79	77	3	2
25	86	84	2	2

Таблица 2.12

Сравнение эквивалентности профилей растворения таблеток «Феназепама» 1 мг и таблеток, полученных методом прямого прессования

Время,мин	Концентрация ЛС, высвободившегося в среду растворения, С (%)		Стандартное отклонение среднего значения, %		Значение коэффициентов		Подобие
	Таблетки феназепам 1 мг	Таблетки испытуемого образца (3)	Таблетки феназепам 1 мг	Таблетки испытуемого образца (3)	f1	f2
5	36	13	5	9	33,6	32,7	нет
10	56	35	4	5
15	70	52	3	3
20	79	57	3	3
25	86	60	3	2

Как видно из рисунка, кривые растворения таблеток, полученных методом прямого прессования, и таблеток «Феназепама» 1 мг не являются эквивалентными, что доказывают также результаты расчета, представленные в таблице 2.12. В то же время, кинетику растворения таблеток, полученных методом прямого прессования из размолотой субстанции можно считать эквивалентной кинетике растворения таблеток «Феназепама» 1 мг.

Таким образом, использование теста "Растворение" позволило не только оценить качество лекарственных форм феназепама, полученных методом прямого прессования, но и провести сравнительную оценку их фармацевтической доступности с препаратом сравнения.

В экспериментальной части данной дипломной работы был проведен фармацевтический анализ субстанции феназепама и готовой продукции «Феназепама» таблеток на содержание основного действующего вещества - феназепама, и других показателей качества.

Проведение анализа субстанции феназепама на определение основного вещества показал, что во всех исследованных образцах содержание оставило 99.58%. А при исследовании готовой продукции количественное содержание составило 0.00982 г.

Определение содержания в лекарственной субстанции и в готовой продукции «Феназепама» проводилось при помощи спектрофотометрического метода. Преимуществами данного метода являются его высокая чувствительность, простота и воспроизводимость результатов.

Определены показатели качества и критерии подлинности, которые полностью удовлетворяют требованиям нормативно-технической документации на данную лекарственную субстанции и на готовую продукцию «Феназепама» таблеток.

Установлено, что таблетки феназепама, полученные из размолотой субстанции в результате оптимизации состава и замены традиционной технологии влажной грануляции на более экономичный метод прямого прессования, являются фармацевтически эквивалентными (по профилям растворения) таблеткам феназепама 1 мг, выпускаемым по действующей технологии.

3. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

В то же время внедрение новых технологий требует разработки новых методов контроля качества, которые были бы достаточно точные и по возможности простые в исполнении.

В данном разделе представлены затраты на проведение анализа субстанций феназепама и готовой продукции препарата «Феназепам» таблеток [25].

.1 Определение затрат на проведение исследования

Целью экономической части дипломной работы является составление сметы затрат на проведение данного исследования.

Смета затрат на проведение исследования включает следующие расходы:

) материальные затраты;

2) расходы на оплату труда;

) единый социальный налог;

) амортизационные отчисления;

) прочие накладные расходы.

.2 Материальные затраты

) Затраты на средства измерений и вспомогательные средства

Затраты на основные и вспомогательные материалы, израсходованные в процессе исследования определяются по формуле (3.1):

, (3.1)

где К_м - количество израсходованного (i) материала;

Ц - цена за единицу (i) материала;

n - количество видов материала.

Результаты представлены в таблице 3.1

Таблица 3.1

Затраты на основные и вспомогательные материалы

Наименование	Цена, руб. с НДС/кг	Израсходовано, кг	Затраты, руб.
1	2	3	4
Субстанция феназепама	635.00	0.35	222.25
Соляная кислота, х.ч.	56.00	0.72	40.32
Хлороформ	77.11	0.088	6.79
Ацетон	77.89	0.024	1.87
Спирт этиловый 95%	161.52	0.079	12.76
Всего			283.99

) Затраты на израсходованную электроэнергию

Затраты на израсходованную электроэнергию определяются по формуле (3.2):

(3.2)

где М- мощность использования электродвигателя;

К - коэффициент использования мощности (К=9);

Т_эф - эффективное время работы установки;

Ц - тариф за 1 кВт-час электроэнергии.

Расчет показан в таблице 3.2.

Таблица 3.2

Затраты на электроэнергию

№	Наименование установки	Мощность, кВт	Тэф, час	Тариф, руб.	Величина затрат, руб.
1	Весы аналитические электронные	0.001	1	2.87	0.0026
2	Весы технические ВЛК-500 г-М	0.001	1	2.87	0.0026
3	Сушильный шкаф ШС-80-01 СПУ	1.1	15	2.87	42.6195
4	Спектрофотометр СФ-46	0.5	6	2.87	7.749
5	Баня комбинированная лабораторная БКЛ-М	0.6	3	2.87	4.6494
6	Муфельная печь «Тулячка»	0.7	10	2.87	18.081
7	Спектрофотометр ИнфаЛЮМ ФТ	0.5	7	2.87	9.0405
Всего					82.14

.3 Заработная плата исполнителей исследования

Исследования проводились одним человеком в течении месяца. Исполнителем является студент - дипломник, поэтому принимаем к расчету его стипендию, равную 1100 руб. в месяц.

З_пл = 1100 1 =1100 руб.

Заработная плата руководителю начисляется с учетом количества часов и оплаты за час:

З_пл.рук. = 20 220 = 4400 руб.

Следовательно, оплата труда составляет З_пли З_пл.рук., равную 5500 руб.

Годовая сумма амортизации (А) устанавливается по проценту (Н_а) от стоимости установки (Ф) рассчитывается по формуле (3.3):

А = ((Ф Н_а)/100)(t_a/12), (3.3)

где Ф - стоимость установки, руб.;

Н_а - годовая норма амортизации, %: рассчитывается исходя из срока службы установки, ее принимают равно 20%;

t_a - длительность проведения исследований на данной установке студентом - дипломником;

- число месяцев в году.

Результаты приведены в таблице 3.3.

Таблица 3.3

Расчет затрат на амортизацию установки

№	Наименование	Стоимость установки, руб.	ta, месяц	Затраты на амортизацию, руб.
1	2	3	4	5
1	Сушильный шкаф	19000.00	1	316.67
2	Баня комбинированная лабораторная БКЛ-М	1850.00	1	61.67
3	Спектрофотометр ИнфаЛЮМ ФТ	16000.00	1	266.67
4	Весы аналитические электронные	18550.00	1	309.17
5	Весы технические	15500.00	1	258.33
6	Спектрофотометр СФ-46	25000.00	1	416.66
7	Муфельная печь «Тулячка»	27000.00	1	450.00
Всего				1762.50

.5 Определение единого социального налога

Размер единого социального налога составляет 34% от суммы заработной платы:

С_н = 55000.34= 1870 руб.

.6 Определение накладных расходов

Накладные расходы включают в себя разного рода расходы, связанные с обслуживанием установки (ремонт, смазка, освещение, вентиляция, уборка помещений и т.п.). они принимаются в размере 50% от суммы заработной платы.

Н_р = 55000.5 = 2750 руб.

.7 Смета затрат на проведение исследований

Таблица 3.4

Смета затрат на проведение исследований

№	Элементы затрат	Сумма, руб.	% к итогу
1	2	3	4
1	Материальные затраты: - сырье; - электроэнергия	283.99 82.14	2.32 0.67
2	Оплата труда	5500.00	44.91
3	Единый социальный налог	1870.00	15.27
4	Амортизационные отчисления	1762.50	14.39
5	Накладные расходы	2750.00	22.45
Всего		12248.13	100

Заключение

Как видно из таблицы 3.4, затраты на проведение исследования составили 12248.13 рублей. Методики эксперимента достаточно просты, что помогает исследователю экономить время, но при этом получать очень точные результаты по определяемым физико-химическим параметрам. И, хотя в эксперименте используется дорогостоящее оборудование, за счет малого расходования основных и вспомогательных веществ, достигается экономия средств.

В ходе исследования было установлено, что с использованием теста "растворение" можно не только оценить качество лекарственных форм феназепама, полученных методом прямого прессования, но и провести сравнительную оценку их фармацевтической доступности с препаратом сравнения. Установлено, что таблетки феназепама, полученные из размолотой субстанции в результате оптимизации состава и замены традиционной технологии влажной грануляции на более экономичный метод прямого прессования, являются фармацевтически эквивалентными (по профилям растворения) таблеткам феназепама 1 мг, выпускаемым по действующей технологии.

4. БЕЗОПАСНОСТЬ И ЭКОЛОГИЧНОСТЬ

.1 Идентификация опасных и вредных факторов

К производственным опасностям, с которыми во время работы может столкнуться работник лаборатории, относятся:

3) непосредственный контакт с химическими реактивами, которые могут привести к ожогам или отравлениям, во время подготовки и проведения анализов проб, а также во время розлива кислот и щелочей;

4) уборка рабочих мест и мытье лабораторной посуды после проведения анализов;

5) электроопасность при работе с электрифицированными приборами и оборудованием при проведении анализов;

6) возможность термических ожогов при работе с электронагревательными приборами;

7) возможность травмирования случайно упавшими предметами, деталями и т.п. на рабочих местах;

8) сосуды, работающие под давлением, в том числе баллоны со сжиженными или сжатыми газами.

Кроме того, в химическом производстве имеют дело с большим количеством разнообразных химических веществ - как исходных или промежуточных материалов для технологических процессов, так и побочных и вспомогательных продуктов, готовой продукции. Все они являются в той или иной мере вредными (токсичными) веществами, т.е. веществами, которые при контакте с организмом человека в случаях нарушения требований безопасности могут вызывать как производственные травмы, так и профессиональные заболевания, обнаруживаемые медицинскими методами, как в процессе работы, так и в отдаленные сроки жизни настоящего и последующих поколений.

Нормирование содержания вредных веществ заключается в установлении предельно допустимых концентраций (ПДК) в условиях производства [27].

ПДК в воздухе рабочей зоны называется такая концентрация, которая при ежедневной работе (но не более 40 ч в неделю) во время всего рабочего стажа не может вызвать заболевания или отклонений в состоянии здоровья, обнаруживаемых современными методами исследований, в процессе работы или в отдаленные сроки жизни настоящего и последующих поколений.

ПДК устанавливаются ГОСТ 12.1.005-88 и обязательны для использования при проектировании производственных зданий, технологических процессов, оборудования и вентиляции, а также для предупредительного и текущего санитарного надзора.

Согласно ГОСТ 12.1.007 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» при степени воздействий на организм вредные вещества разделяются на четыре класса опасности:

I класс - чрезвычайно опасные (ПДК <0.1);

II класс - высоко опасные (ПДК от 0.1 до 1.0);

III класс - умеренно опасные (ПДК от 1.1 до 10);

IV класс - малоопасные (ПДК>10).

Токсикологические свойства веществ, используемых в дипломной работе, представлены в таблице 4.1.

Таблица 4.1

Токсические свойства веществ, используемых в дипломной работе

№	Вещество	Токсичность	ПДК, мг/м³	Меры защиты
1	2	3	4	5
1	Субстанция феназепама	Раздражает слизистую полости рта	0.1	Меры индивидуальной защиты, вентиляция
2	Соляная кислота	Туман соляной кислоты вызывает болезненность кожи лица, раздражение слизистых при повышении концентраций, охриплость, чувство удушения, насморк, кашель	5	Герметизация емкостей для хранения и транспортировки, вентиляция рабочих помещений
3	Хлороформ	Анестезирующее средство: вызывает при вдыхании его паров сон, полную потерю движений и чувствительности	20	Индивидуальные средства защиты, вентиляция рабочих помещений, герметизация посуды, работа в вытяжном шкафу
4	Ацетон	Действует как наркотик, вдыхание в течение длительного времени сильно раздражает верхние дыхательные пути	200	Герметизация аппаратуры, вентиляция, индивидуальные средства защиты
5	Спирт этиловый	Наркотик, вызывающий сначала возбуждение, а затем паралич ЦНС	1000	Герметизация посуды, работа в вытяжном шкафу

.2 Основные мероприятия и технические средства по обеспечению безопасности

Общими требованиями охраны труда на химическом предприятии являются следующие требования:

8) К работе по проведению химического анализа допускаются лица не моложе 18 лет, прошедшие медицинское освидетельствование, теоретическое и практическое обучение, проверку знаний по охране труда в установленном порядке и получившие допуск к самостоятельной работе [27].

8) Химик контрольно-аналитической лаборатории обеспечивается спецодеждой и средствами индивидуальной защиты (резиновые перчатки, защитные очки).

8) Помещения контрольно-аналитических лабораторий необходимо оборудовать приточно-вытяжной вентиляцией и местной вентиляцией (тягой) из лабораторных шкафов и других очагов газовыделения.

8) В помещениях контрольно-аналитических лабораторий, где проводится работа с особо вредными и ядовитыми веществами, вентиляционная система выполняется индивидуальной, не связанной с вентиляцией других помещений.

Перед началом работы необходимо:

) Надеть предусмотренную соответствующими нормами спецодежду;

2) Осмотреть и привести в порядок рабочее место, убрать посторонние предметы, не требующиеся для выполнения текущей работы;

3) Проверить исправность вентиляционного оборудования, электрооборудования, включить вентиляцию;

4) Подготовить к работе приборы и лабораторное оборудование, убедится в их исправности. Не допускается пользование неисправными приборами и лабораторным оборудованием [26].

Во время работы в контрольно-аналитической лаборатории необходимо:

1) Помещения контрольно-аналитических содержать в чистоте и порядке. Не допускается загромождать коридоры и входы (выходы) какими- либо предметами, материалами, оборудованием.

2) Все работы, связанные с выделением токсичных или пожаровзрывоопасных паров и газов, выполнять в вытяжных шкафах при включенной местной вентиляции.

3) Не допускается пользоваться вытяжными шкафами с разбитыми стеклами или с неисправной вентиляцией, а также загромождать вытяжные шкафы посудой, приборами и лабораторным оборудованием, не связанным с выполняемой работой.

4) С разрешения руководителя контрольно-аналитической лаборатории допускается хранение в вытяжных шкафах дымящихся кислот, легкоиспаряющихся реактивов и растворителей, при этом проводить анализы в этих шкафах не допускается.

5) Для хранения проб и реактивов следует использовать только герметично закрывающую посуду. Не допускается хранение горючих жидкостей в тонкостенной стеклянной посуде. На каждый сосуд с химическим веществом необходимо наклеить этикетку с указанием продукта.

6) Емкости для хранения агрессивных жидкостей не следует оставлять даже временно на рабочих столах, в проходах и местах общего пользования.

7) В случаях перелива и порционном розливе агрессивных жидкостей, их необходимо нейтрализовать и место разлива хорошо промыть водой.

9) При работе с кислотами и щелочами следует надевать резиновые перчатки и защитные очки.

10) Пролитую кислоту следует засыпать мелким песком. Пропитавшийся кислотой песок деревянной лопаткой и засыпать это место содой или известью, после чего замыть водой и вытереть насухо [28].

11) Измельчение едких и ядовитых веществ производить в закрытых ступках под тягой в защитных очках и резиновых перчатках.

12) Необходимо вести строгий учет всех ядовитых веществ. Выдача их без разрешения руководителя контрольно-аналитической лаборатории не допускается. Каждое использование токсичных веществ должно быть записано в специальный журнал.

13) Сливать остатки щелочи, кислоты и воду в один сосуд не допускается.

14) При переносе стеклянных колб с жидкостью их необходимо держать двумя руками - одной за дно, а другой - за горловину.

15) Стеклянные трубки и палочки при разламывании, а также при надевании на них резиновых трубок и палочек перед надеванием на них резиновых трубочек следует оплавить и смочить водой или глицерином.

16) В помещении, где проводится работы с ядовитыми и агрессивными веществами, не допускается хранение и прием пищи. Не допускается употребление лабораторной посуды для личного пользования.

17) Не допускается натягивание, скручивание, перегиба и пережима шнуров электропитания, проводов и кабелей, не допускается нахождение на них каких - либо предметов и соприкосновения их с нагретыми поверхностями.

18) Не допускается работать при недостаточной освещенности рабочего места [30].

По окончанию работы работник контрольно-аналитической лаборатории обязан:

1) Отключить от электросети средства оргтехники и другое оборудование, за исключением оборудования, которое определено для круглосуточной работы (аппараты факсимальной связи, сетевые серверы и т.д.).

2) Закрывать водяные и газовые краны и вентили.

3) Закрывать банки с реактивами, легковоспламеняющимися веществами.

) Вымыть посуду, лабораторное оборудование и уложить на место хранения.

5) Привести в порядок рабочее место, обращая особое внимание на его противопожарное состояние.

6) Закрыть фрамуги окон.

7) Выключить светильники.

8) Обо всех недостатках, обнаруженных во время работы, проинформировать своего руководителя [30].

4.3 Мероприятия по осуществлению безопасности в опасных ситуациях

К опасным ситуациям при работе в контрольно-аналитической лаборатории относятся аварийные и пожароопасные ситуации.

Охрана труда при аварийных ситуациях:

1) При аварийном состоянии оборудования или установки немедленно прекратить работу и отключить электропитание.

2) В случае воспламенения горючей жидкости необходимо:

выключить электронагревательные приборы и вентиляцию;

вынести из помещения все сосуды с огнеопасными веществами и баллоны со сжатым газом;

- применять для данного случая наиболее эффективные средства тушения;

при возникновении пожара вызвать пожарную охрану по телефону 01, применять соответствующие средства тушения.

) Пламя необходимо гасить следующими средствами:

при загорании жидкостей: смешивающихся с водой - любым огнетушителем, струей воды, песком, асбестовым или суконным одеялом;

при загорании жидкостей, несмешивающихся с водой - углекислотными огнетушителями, песком, покрывалом (исключая воду), начиная с периферии.

4) Категорически запрещается применять воду при тушении горящих проводов, электроприборов, находящихся под давлением, напряжением, обесточить их и тушить углекислотным огнетушителем. [29]

К требованиям безопасности в аварийных ситуациях при использовании электроустановок в лаборатории относятся следующие требования:

1) При обнаружении какой-либо неисправности нужно немедленно сообщить о ней начальнику лаборатории или его заместителю.

2) В случае аварии (короткого замыкания) сотрудник должен:

а) отключить общий рубильник лаборатории;

б) вызвать дежурного электрика [32].

К требованиям безопасности в аварийных ситуациях при возникновении пожара в лаборатории относится следующее:

1) В случае возникновения пожара, первый заметивший его должен немедленно сообщить в пожарную часть по телефону 01с указанием точного места пожара.

) До прибытия пожарной команды приступить к тушению пожара всеми имеющимися средствами пожаротушения и применять меры к эвакуации людей, приборов, оборудования и имущества.

3) С прибытием пожарной команды применять меры к охране выносимого имущества лаборатории.

К требованиям по противопожарной безопасности относятся:

1. В помещении лаборатории должны быть: углекислотный огнетушитель, ящик с сухим песком, совок и кошма (асбестовая).

2. В помещении лаборатории запрещается:

курить;

- устанавливать электроплитки и электронагреватели для обогрева;

загромождать и захламлять проходы, а также проходы к средствам пожаротушения;

хранить легковоспламеняющиеся жидкости (бензин, керосин, гептан, ацетон, и др.) более суточного запаса;

оставлять без присмотра включенные электроприборы и др. оборудование;

проводить работы при неисправной электропроводке и без заземления приборов [31].

При несчастном случае необходимо оказать первую помощь пострадавшему, вызвать скорую медицинскую помощь или направить пострадавшего в лечебное учреждение, сообщить администрации организации.

Первая помощь пострадавшим от электрического тока:

1) Спасение пострадавшего от электрического тока в большинстве случаев зависти от быстроты освобождения его от тока, а также от быстроты и правильности оказания пострадавшему первой помощи.

) В лаборатории должна иметься аптечка с набором необходимых средств и приспособлений для оказания первой помощи.

3) Освобождение пострадавшего от электрического тока в случае, если он продолжает соприкасаться с токоведущими частями, должно быть произведено отключением установки.

Если отключение установки не может быть произведено, то для отделения пострадавшего от токоведущих частей ли провода следует воспользоваться сухой одеждой, канатом, палкой, доской или каким-либо другим сухим предметом, не проводящим электрический ток. Отталкивая пострадавшего, не допускать прикосновения к неприкрытым одеждой частям тела окружающим металлическим предметам.

При отделении пострадавшего от токоведущих частей рекомендуется действовать по возможности одной рукой.

) Меры первой помощи зависят от состояния, в котором находится пострадавший после освобождения его от электрического тока.

Для определения этого состояния необходимо немедленно произвести следующие мероприятия:

уложить пострадавшего на спину на твердую поверхность;

проверить наличие у пострадавшего дыхания;

проверить пульс на лучевой артерии у запястья или на сонной артерии на переднебоковой поверхности шеи;

выяснить состояние зрачка (узкий или широкий); широкий зрачок указывает на резкое ухудшение кровоснабжения.

5) Во всех случаях поражения электрическим током вызов врача является обязательно независимо от состояния пострадавшего.

6) Если пострадавший находится в сознании, но до этого был в состоянии обморока, его следует уложить в удобное положение (подстелить под него и покрыть его сверху чем-либо из одежды), до прибытия врача обеспечить покой, наблюдая за дыханием и пульсом.

7) Если пострадавший находится в бессознательном состоянии, но с сохранившимся устойчивым дыханием и пульсом, его следует уложить, расстегнуть одежду, создать приток свежего воздуха, давать нюхать нашатырный спирт, обрызгивать лицо водой и обеспечить покой. Если пострадавший плохо дышит: очень редко и судорожно (как умирающий), ему следует делать искусственное дыхание и массаж сердца.

8) При отсутствии у пострадавшего признаков жизни (дыхания и пульса) нельзя считать его мертвым. В таком состоянии пострадавшему следует немедленно оказать первую помощь в виде искусственного дыхания и наружного (непрямого) массажа сердца. Искусственное дыхание производить непрерывно как до, так и после прибытия врача. Вопрос о дальнейшем проведении искусственного дыхания решается врачом.

9) Прежде, чем приступить к производству искусственного дыхания необходимо:

1. быстро освободить пострадавшего от стесняющей одежды - расстегнуть ворот;

2. запрокинуть голову, открыть рот и освободить его от посторонних предметов и слизи.

После этого оказывающий помощь делает глубокий вдох и с силой выдыхает в рот пострадавшего. Вдуновение воздуха в рот и нос можно производить через марлю, салфетку или носовой платок со скоростью 10-12 выдохов в минуту. При выполнении искусственного дыхания избегать чрезмерного надавливания грудной клетки ввиду возможности перелома ребер.

10) При отсутствии у пострадавшего пульса для поддержания жизнедеятельности организма необходимо независимо от причины, вызвавшей прекращение работы сердца, одновременно с искусственным дыханием проводить наружный массаж сердца.

Надавливание двумя положенными друг на друга руками на подвижную нижнюю часть грудины с частотой 60-70 раз в минуту обеспечивает достаточное кровоснабжение в организме.

) В случае, если оказывающий помощь не имеет помощника и вынужден проводить искусственное дыхание и наружный массаж сердца один, следует чередовать проведением указанных операций в следующем порядке: после двух-трех глубоких вдуваний в рот или нос пострадавшего оказывающий помощь производит 15-20 надавливаний на грудную клетку, затем снова производит 2-3 глубоких вдуваний и опять повторяют 15-20 надавливаний с целью массажа сердца и т.д.

) При наличии помощника один из оказывающих помощь должен проводить искусственное дыхание путем вдувания воздуха, второй производит наружный массаж сердца, без перерыва.

Действие по оказанию первой помощи пострадавшим при травмировании, отравлении и других повреждениях здоровья:

Доврачебная (первая) помощь заключается в принятии обычных мер, применяемых при легких ранениях, ушибах, термических ожогах. Так при ранении края раны осторожно смазываются йодной настойкой и накладывают стерильную повязку. Нельзя промывать раны водой. При ушибах необходимо пострадавшему создать покой, к ушибленной части тела до прихода врача необходимо прикладывать холодные примочки или пузырь со льдом.

При венозном кровотечении следует накладывать давящую повязку. Если кровотечение не останавливается, накладывают жгут или закрутку.

При термических ожогах обожженную часть тела смазывают вазелином, растительным маслом или присыпают питьевой содой. При более сильных ожогах (появление пузырей) прикладывают марлю, смоченную 5% раствором марганцовокислого калия и делают повязку.

При химических ожогах необходимо тщательно обмыть кожу растворителем для данного вещества. При ожогах кислотами или едкими щелочами пораженное место промывают обильной струей воды и затем обрабатывают:

1) При ожогах кислотами - слабым щелочным раствором питьевой соды (можно присыпать, обожженное место чистым мелом или окисью магния);

) При ожогах щелочами - слабым раствором уксусной или лимонной кислоты [29].

Особенно опасно попадание химических веществ в глаза. При химическом ожоге веществами, растворимыми в воде, самым лучшим средством является немедленное обильное промывание струей воды.

При отравлениях химическими веществами пострадавшего необходимо вынести на свежий воздух, освободить от стесняющей его одежды. При остановке дыхания немедленно приступают к искусственному дыханию. Следует помнить, что от быстроты проведения искусственного дыхания и правильности приемов зависит жизнь пострадавшего.

Каждая лаборатория должна быть снабжена аптечкой с набором медикаментов, перевязочных средств и т.п., согласно указаниям медико- санитарной части предприятия.

.4 Проектирование установки искусственного освещения для лаборатории

В химических лабораториях ставятся разнообразные задачи. Одной из таких задач является расчет светового потока потребления количества светильников с ГЛ (люминесцентная лампа) для общего освещения химической лаборатории. [30]

1) Исходные данные

Минимальная освещенность - Е_min=200лк

Высота рабочей поверхности от пола - h_p=0.8

Коэффициент отражения света от потолка - Р_п=50%

Коэффициент отражения света от стен - Р_с=30%

Коэффициент отражения света от рабочей поверхности - Р_Р=10%

Размер помещения - 12x8x6

Тип лампы ДРЛ - ДРЛ - 80 Тип светильника ДРЛ - С34ДРЛ

Высота свеса светильника от основного потолка - Н_с=0.4 м

2) Расчет по заданию

1 Определим высоту подвеса светильника над рабочей поверхностью:

h = Н -h_p- h_c, (4.1)

где Н - высота помещения;

h_p - высота рабочей поверхности от пола;

h_c - высота свеса светильника от основного потолка.

h = Н -h_p- h_c =6 - 0.8 - 0.4 = 4.8 м

1. Определим освещаемую площадь помещения:

S = lb, (4.2)

где l - длина помещения; b - ширина помещения.

S = 228 = 96 м²

1 λ = f (KCC), где

КСС - кривая силы света, для С34ДРЛ КСС = Г (т.е. глубокая).

2. Определим индекс помещения:

, (4.3)

3. Определение коэффициента светового потока η в зависимости от индекса помещения, коэффициента отражения потолка (р_п), стен (р_с) и пола (р_р) и типа выбранного светильника с ДРЛ

η=f (i, светильник), η (1, ДРЛ) = 51%

4. Потребное количество светильников для помещения:

, (4.4)

где k_s - коэфициент запаса, k_s = 1.5; z - коэффициент неравномерности, z = 1.5; n_i - число ламп в светильнике, n_i = 1; k_i- коэффициент затемненности, k_i = 1; Ф_А - световой поток лампы (для ДРЛ 80 Ф_А=3400).

5. Экономический показатель для ГЛ:

С_Σ = 405 (8025) = 810000

6 Разработка рациональной схемы равномерного размещения светильников в помещении

7. Находим расстояние между рядами светильников (тип кривой силы света - глубокая):

h_max = λ h = 1.4 4.8 = 6.72 (м)

L = λ h = (0.8…1.2) 4.8 = 3.84…5.76 (м)

Рассчитаем число ламп по длине:

Рассчитаем число лапм по ширине:

Наименьшее, число светильников, необходимое для создания минимального равномерного освещения, рассчитаем по формуле:

N = п₁п₂ =21 = 2

N_c≥N

Рациональная схемаравномерного размещения светильников приведена на рисунке 4.1.

Рисунок 4.1 - Рациональная схема равномерного размещения светильников (N=4) в контрольно-аналитической лаборатории

.5 Оценка экологичности проекта

Контрольно-аналитическая лаборатория оснащена современной системой кондиционирования воздуха, вытяжными шкафами. Все химические вещества, применяемые при проведении анализов, используются в небольших количествах, поэтому испарения этих веществ не представляют угрозы для атмосферы. Слив химических веществ осуществляется в специально предназначенные для этого сливные емкости. Эти емкости затем вывозятся с территории предприятия на полигоны. Кислоты и щелочи перед сливом в канализацию нейтрализуются. Все вредные вещества хранятся в хорошо укупоренной стеклянной таре в вытяжном шкафу.

В соответствии свыше сказанным можно сделать вывод о том, что данное предприятие не наносит значительного вреда окружающей среде.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной дипломной работе проведен анализ субстанций феназепама и препарата «Феназепам» таблеток на содержание в них основного действующего вещества и основных показателей качества согласно фармакопейным статьям.

Исследования проводились в контрольно-аналитической лаборатории отдела контроля качества ООО «РОЗФАРМ».

В качестве объектов исследования были выбраны субстанция (сырье) феназепама и готовая продукция препарата «Феназепам» таблеток.

Обобщение результатов эксперимента позволяет сделать следующие выводы:

1. Спектрофотометрическим методом установлено количественное содержание основного вещества в субстанциях и готовом препарате.

2. С использование ИК-спектроскопии была установлена подлинность субстанций феназепама.

. Определены основные показатели качества субстанций и готового препарата, а именно растворимость, температура плавления, посторонние примеси, содержание сульфатной золы.

4. Установлено, что таблетки феназепама, полученные из размолотой субстанции методом прямого прессования, являются фармацевтически эквивалентными (по профилям растворения) таблеткам феназепама 1 мг, выпускаемым по действующей технологии.

Результаты, полученные в ходе эксперимента, дают основания для заключения о пригодности лекарственного препарата «Феназепам» таблеток для клинического использования.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Воронина, Т.А. Перспективы поиска новых анксиолитиков / Т.А. Воронина, С.Б. Середенин // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2002. - №5. - С. 4-15.

2. Бенькович, Б.И. Психофармакологические препараты и нервная система: Учебн.пособие - М.: Феникс, 1999. - 510с.

. Смулевич, А.Б. Транквилизаторы производные бензодиазепина в психиатрии и общей медицине / А.Б. Смулевич, М.Ю. Дробижев, С.В. Иванов,- М.: Медиа Сфера, 1999,- 64 с.

. Богатский, А.В. Транквилизаторы (1,4-Бензодиазепины и родственные структуры) / А.В. Богатский, С.А. Андронати, Н.Я. Головенко, - Киев: Наук. Думка, 1990, - 280 с.

. Воронина, Т.А. Фармакология соединений бензодиазепипового ряда: дис. д-ра. мед. Наук / Т.А. Воронина.- М., 1978.- 661 с.

. Солдатенков, А.Т. Основы органической химии лекарственных веществ / А.Т. Солдатенков, Н.М. Колядина, И.В. Шендрик - М.: Мир, 2007, - 191с.

. Богатский, А.В. Химия гетероциклических соединений / А.В. Богатский, С.А. Андронати, Ю.Ю. Самитов, - Киев: Наук. Думка, 1984, - 556 с.

. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: В 2 т. [Текст] / М.Д. Машковский - М.: Медицина, 1986 - Т. 1

. Беликов, В.Т. Фармацевтическая химия: учебник для фармацевтических институтов и фармацевтических факультетов медицинских институтов [Текст] / В.Г. Беликов. - М.: Высшая школа, 2007. - 768с.

10. Середин С.Б. Феназепам: 25 лет в медицинской практике / С.Б.Середин, Т.А. Воронина, Г.Г Незнамов и др.- М.: Наука, 2007,- 222 с.

11. Городничев, А.В. Феназепам в XXI веке: реальность и современность / А.В. Городничев // Современная терапия психических расстройств,- 2007,- №4.-С. 33-36.

. Регистр лекарственных средств. - М., 2011

. Дубницкая, Э.Б. Применение феназепама при терапии невротических состояний. / Э.Б. Дубницкая, А.М. Басов // Журн. невропатологии и психиатрии им. С.С.Корсакова.- 1978,- № 9.- С.132-138.

. Взаимосвязь между физико-химическими свойствами и фармакокинетическими параметрами производных 1,4-бензодиазепина / А.А. Литвин, Г.Б. Колыванов, В.П. Жердев, А.П. Арзамасцев // Химико-фармацевтический журнал. - 2004. - №11. - С. 3-5.

. Хабриев, Р.У. Анализ состояния качества отечественных лекарственных средств/ Р.У. Хабриев, Р.И. Ягудина // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - №8. - С. 41-43.

. Пахомов, В.П. Хроматография в химико-фармацевтических исследованиях // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - №8. - С. 55-56.

. ФС 42-2411-04 «Субстанция Феназепам» [Текст]

. ФСП 42-0284679805 «Феназепам» [Текст]

. Тюкавкина, H.A. Стандартизация и контроль качества лекарственных средств [Текст]: учеб. пособие / Н.А. Тюкавкина. - М.: Медицинское информационное агенство, 2008. - 384с.

. Казицина, Л.А. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопиив органической химии [Текст] / Л.А. Казицина, Н.Б. Куплетская - М., Высшая школа, 1998.

. ГОСТ Р 52537-2006 «Производство лекарственных средств. Система обеспечения качества. Общие требования»

. СТП 42-0284-002-04 «Система контроля качества исходных материалов, готовой продукции и межоперационного контроля предприятия»

. Использование теста «Растворение» для оценки фармацевтической эквивалентности таблетизированных ЛФ феназепама / С.В. Емшанова, Н.В. Гончарова, М.Е. Иванова, А.П. Зуев, Н.П. Садчикова // Химико-фармацевтический журнал. - 2008. - №1. - С. 50-52.

. Емшанова С.В. Промышленный контроль формы и размера частиц лекарственных субстанций // Фармацевтические технологии и упаковка. - 2007. - №10. - С. 48-57.

. Солодкова P.M. Методические указания по экономической части для студентов - исследователей (спец. «Химия»)/ ТГТУ, каф. Экономики и управления производством. - Тверь, 2001. - 5с.

. Прайс - лист «Русхим» на 13.03.2012 [таблица]

. Вредные вещества в промышленности. Справочник для химиков, инженеров и врачей / Под общей ред. Н.В. Лазарева, Э.Н. Левиной: В 3 т. - Ленинград: «Химия», 1976. - Т. 1. - 456 с.

. Вредные вещества в промышленности. Справочник для химиков, инженеров и врачей / Под общей ред. Н.В. Лазарева, Э.Н.Левиной: В 3 т. - Ленинград: «Химия», 1976. - Т.З. - 432 с.

. Инструкция по охране труда при работе с кислотами, щелочами и другими едкими химическими реактивами: Утв. ООО «РОЗФАРМ» 23.11.2002. - Тверь, 2002. - 6.

. Практикум по безопасности жизнедеятельности / С.А. Бережной, Ю.И. Седов, Н.С. Любимова и др.; Под ред. С.А. Бережного. - Тверь: ТГТУ, 1997- 165с.

. Инструкция по охране труда химика, микробиолога и контролера: Утв. ООО «РОЗФАРМ» 26.10.2006. - Тверь, 2006. - 5.

. Инструкция о мерах безопасности в аварийных ситуациях: Утв. ООО «РОЗФАРМ» 12.04.2004. - Тверь, 2004. - 8с.

. Инструкция о мерах противопожарной безопасности в отделе контроля качества: Утв. ООО «РОЗФАРМ» 26.06.2002.-Тверь, 2002.-4с.

Феназепам, 1,4-бензодиазепины

Феназепам, 1,4-бензодиазепины

Таблица 1.1

Производные 1,4-бензодиазепина

Процесс получения фармокопейного феназепема состоит из следующих стадий:

Похожие работы на - Феназепам, 1,4-бензодиазепины