Микробиологические лаборатории

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Оборудование в микробиологической лаборатории

Оборудование рабочего стола

Микробиологические лаборатории

Техника взятия и доставки материала в микробиологическую лабораторию.

Техника безопасности при работе в лабораториях

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

ВВЕДЕНИЕ

При выполнении лабораторных работ по биологии и микробиологии работают с различным биологическим материалом и культурами микроорганизмов. Изучают строение живых организмов и их основную структурную единицу - клетку. Клетки имеют небольшие размеры, поэтому невооруженным глазом их рассмотреть невозможно. Для их изучения готовят определенным образом препараты, которые рассматривают под микроскопом.

Микробиология изучает мельчайшие, невидимые невооруженным глазом существа - микробы. Они находятся повсюду: в почве, воздухе, воде, на сырье, различных материалах, оборудовании, продуктах питания и т. д. Одни из них безопасны для человека, другие могут вызывать различные заболевания. Увидеть микроорганизмы, так же как и отдельные клетки, можно только под микроскопом, приготовив соответствующим образом препараты. Поэтому работы на уровне клеток и микроорганизмов проводят в особых лабораториях, которые должны отвечать определенным требованиям.

В лаборатории должны быть созданы условия, обеспечивающие стерильность работы, при которых будет исключена возможность попадания как посторонних микроорганизмов извне, так и микроорганизмов из лаборатории в окружающую среду. Поэтому в микробиологической лаборатории необходимо строго соблюдать определенные правила работы и поведения, которые предотвращают возникновение заражения. В лабораториях применяются различные аппараты, приборы и оборудование. Неосторожное обращение с ними может явиться причиной травм. Общее и местное токсическое действие химических соединений на организм человека, пожароопасность и взрывоопасность, опасность заражения людей патогенными микроорганизмами можно предупредить при соблюдении специальных правил. Всем сотрудникам лабораторий необходимо повседневно уделять серьезное внимание мероприятиям по технике безопасности, санитарно-противоэпидемическому режиму и личной гигиене, обеспечивающим безопасность труда.

Оборудование в микробиологической лаборатории

ü  Микроскоп - для изучения формы и структуры клеток микроорганизмов.

ü  Термостат - прибор с двойными стенками, между которыми находится воздух или вода. С помощью терморегулятора в термостате поддерживается постоянная температура. Контролируют температуру термометром, установленным в верхней стенке термостата. Мезофилы выращиваются в термостате при температурах от 25° С (для большинства почвенных микроорганизмов) до 37°С (для патогенных микроорганизмов, микроорганизмов кожных покровов, кишечника человека и животных). Термофилы выращиваются на жидких средах при температурах от 45° С до 60° С. Облигатные психрофилы выращиваются при температурах от 5° С до 10° С в специальных холодильных камерах. Факультативные психрофилы развиваются при температурах, благоприятных для мезофилов, и выращиваются в термостатах.

ü  Автоклав - прибор для стерилизации питательных сред и посуды, используемой в лаборатории. Это самый эффективный в бактериологической практике способ стерилизации. В автоклаве стерилизуемые материалы нагревают чистым насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного на 0,2 - 2 атм. Обычно стерилизация в автоклаве проводится при 1 атм. (сверх нормального атмосферного), что соответствует 120,6°С. И только стерилизацию почвы или сильно заспоренного материала проводят при повышенном до 2 атм. давлении, что соответствует 134°С. Питательные среды, содержащие углеводы, стерилизуют в автоклаве при пониженном давлении (0,5 атм.) при температуре от 110° до 112°С. Так как стерилизация в автоклаве производится при повышенном давлении, то работать с ним могут лишь специально обученные работники, имеющие допуск, т.е. лаборанты лаборатории. Студенты могут только ознакомиться с работой автоклава.

ü  Печь Пастера или сушильный шкаф для стерилизации стеклянной посуды, ваты, марли и т.д. В нем стерилизуют сухим жаром при 170°С 1,5 ч. Показателем достаточной стерилизации является легкое пожелтение бумаги, в которую завернуты стерилизуемые предметы.

ü  Бактерицидная лампа (БУВ - 15, БУВ- 30) для стерилизации воздуха в помещении лаборатории после работы с микроорганизмами.

ü  Холодильник для хранения музейных культур микроорганизмов и ряда питательных сред.

ü  Сейф для хранения патогенных культур микроорганизмов, ядовитых соединений.

ü  Боксовая комната или бокс для пересева музейных культур. Бокс - это небольшое замкнутое пространство, где нет движения воздуха и стерилизация воздуха осуществляется бактерицидной лампой. Бокс хорошо обеспечивает условия стерильности, необходимые для посева чистых культур, так как исследователь через специальное отверстие бокса (рукав) просовывает в него только руки и осуществляет все посевы, проводя манипуляции над зажженной в боксе спиртовкой.

ü  Анаэростаты - приборы для выращивания микроорганизмов без доступа кислорода воздуха. Воздух отсасывается из них с помощью насосов. Контролируют давление по манометру.

ü  Аппарат Коха для дробной стерилизации, водяная баня, pH-метр и бактериальные фильтры.

ü  Шкафы для посуды и сред.

ü  Лабораторные столы, покрытые пластиком для удобства дезинфекции.

Оборудование рабочего стола

ü  Микроскоп - для изучения морфологии микроорганизмов.

ü  Спиртовки для фиксации препаратов, фламбирования (обжигания) бактериологической петли, пинцета и др., обжигания краев пробирок и колб при работе с последними и поверхности ватно-марлевых пробок.

ü  Предметные стекла с луночками и без них, покровные стекла.

ü  Набор красителей: генцианвиолет, фуксин, метиленовая синь, раствор Люголя, спирт 96° и др., используемых для окрашивания клеток микроорганизмов, а также песочные часы.

ü  Фарфоровая ванночка со стеклянным мостиком - установка для окраски препаратов.

ü  Колба с дистиллированной водой и пипеткой для промывания окрашенных препаратов.

ü  Лист фильтровальной бумаги для просушивания препаратов после окраски.

ü  Кедровое масло для работы с иммерсионным объективом 90´.

ü  Восковой карандаш для надписей по стеклу.

ü  Салфетка матерчатая для протирания оптических деталей микроскопа (окуляр, конденсор, диафрагма, зеркало, объективы суховоздушные).

ü  Салфетка марлевая для удаления масла с иммерсионного объектива после работы.

ü  Пробирки с культурами и пустые штативы для пробирок.

ü  Чашки Петри - плоские чашки из тугоплавкого стекла, в которые наливаются питательные среды для выращивания микроорганизмов.

Микробиологические лаборатории

Организуются при больницах и санитарно-эпидемиологических станциях (СЭС). Существуют также специальные лаборатории, в которых работают с возбудителями особо опасных инфекций, вирусологические лаборатории и др. Микробиологические лаборатории занимаются бактериологической диагностикой инфекционных заболеваний, исследуя испражнения, мочу, кровь, мокроту больных с целью обнаружения патогенных микроорганизмов - возбудителей заболевания. Помимо этого, в микробиологических лабораториях проводят санитарно-бактериологические исследования воды, воздуха, смывов с окружающих предметов, рук, пищевых продуктов для обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов, указывающих на загрязнение патогенными микробами. При необходимости в объектах внешней среды определяют наличие патогенных микробов.

В связи с тем, что в микробиологических лабораториях работают с заразным материалом, помещение их должно быть изолировано от других больничных помещений, пищеблоков, жилых комнат. В состав лаборатории входят:

) лабораторные комнаты для проведения микробиологических исследований;

) моечная;

) препараторская для подготовки лабораторной посуды, приготовления питательных сред и других вспомогательных работ;

) автоклавная;

) комната, где производят прием материала и выдачу результатов исследования. Лабораторных животных, необходимых для постановки биологических проб, содержат в специальном изолированном помещении - виварии. В лабораториях, где объем работ невелик, можно объединить моечную и препараторскую, исключить комнату для приема анализов и т. д.

Лабораторные комнаты должны быть просторными и светлыми, желательно с ориентацией окон на север или северо-запад, так как для работы необходим рассеянный свет. Стены окрашивают светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы - пластиком или стеклом, что позволяет их легко дезинфицировать. В лабораторной комнате оборудуют застекленный бокс с предбоксником для проведения работ в стерильных условиях. В боксе помещают бактерицидную лампу, стол, табуретку. В лабораторных комнатах находится специальное оборудование: термостат (рисунок 23), холодильник, шкафы, центрифуга и др. Большое значение имеет правильная организация рабочего места. Рабочий стол устанавливают у окна таким образом, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе должны находиться только необходимые для работы предметы: спиртовка или газовая горелка, штативы, бактериологические петли, банка с дезинфицирующим раствором.

 <#"869026.files/image002.jpg"> <#"869026.files/image003.gif"> <http://microbiology.ucoz.org/_si/0/10162537.jpg>

микробиологический лаборатория материал оборудование

Техника взятия и доставки материала в микробиологическую лабораторию

Успех бактериологического исследования зависит от правильности взятия материала и своевременной доставки его в лабораторию. В зависимости от характера патологического процесса, места максимальной (избирательной) локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду исследуют мокроту (при заболеваниях органов дыхания), испражнения (при желудочно-кишечных инфекциях), мочу (при поражении почек и мочевыводящих путей), гнойное отделяемое (из гнойных очагов), кровь (при кровяных инфекциях).Материал необходимо брать в стерильную посуду с соблюдением правил, обеспечивающих стерильность.

Испражнения собирают в стерильные картонные тарелки или судно, предварительно обработанное раствором хлорной извести и тщательно промытое горячей водой для уничтожения следов дезинфицирующего раствора. Испражнения берут стерильным шпателем и вносят в стерильную пробирку с пробкой, содержащую консервант (глицериновая смесь, фосфатно-буферная смесь и др.). Можно брать материал специальной стеклянной ректальной трубкой, которую вводят в прямую кишку на 8 - 15 см. Мочу берут стерильным катетером в стерильную пробирку или банку. Рвотные массы собирают в стерильную широкогорлую банку, которую закрывают вощаной бумагой, мокроту - в стерильную банку с пробкой или в стерильную чашку Петри.

Трупный материал для микробиологического исследования необходимо брать в первые часы после смерти, так как в дальнейшем микрофлора кишечника распространяется по всему организму. Кровь из сердца берут стерильным шприцем. Из селезенки, печени и других органов после предварительного прижигания их поверхности вырезают стерильными ножницами кусочек и помещают в стерильный сосуд. При взятии отрезка кишечника или желудка предварительно накладывают две лигатуры выше и ниже места взятия.

На каждый стеклянный сосуд с инфекционным материалом необходимо наклеить этикетку, где указывают фамилию, имя, отчество больного и дату взятия материала. Надписи делают простым карандашом. К материалу, отправляемому в лабораторию, должно прилагаться направление, в котором указываются:

) название материала;

) учреждение, направившее материал;

) фамилия, имя, отчество больного;

) его возраст;

) дата взятия материала;

) клинический диагноз;

) цель исследования;

) подпись направляющего врача. Взятый исследуемый материал должен быть доставлен в лабораторию в кратчайший срок.

Если этот срок удлиняется, материал необходимо сохранять в холодильнике при 4°С или на льду. Материал, содержащий вирусы, должен и при транспортировке находиться в условиях низкой температуры (например, в термосе со льдом). Доставку инфицированного материала в лабораторию следует производить с соблюдением мер предосторожности: в закрытой посуде, в специальных металлических биксах, пеналах, чемоданах. Доставка особо опасного материала (от больных холерой, чумой, натуральной оспой и др.) осуществляется в соответствии со специальными инструкциями. Исследуемый материал помещают в плотно закрывающиеся сосуды, обвязывают пергаментом или другим водонепроницаемым материалом, после чего их обертывают салфетками, смоченными 5% раствором фенола или лизола (необходима полная гарантия от попадания дезинфицирующего раствора в банки с материалом!). После этого сосуды помещают в жестяные коробки с крышкой или металлические биксы. При пересылке на далекие расстояния их помещают в деревянные ящики, опечатывают сургучной печатью и делают надпись: «Опасно. Не открывать во время пересылки». Доставка производится специальным транспортом в сопровождении двух лиц (один из них врач).

Поступивший в лабораторию материал регистрируют в специальном журнале. Исследуемый материал в лаборатории можно хранить: неконсервированный - при температуре 4° С не более 1-2 суток, консервированный в 50 % глицерине, например кусочки органов и тканей,- в течение недель, а при необходимости длительного хранения - при замораживании до 15-20° С.

Режим работы микробиологической лаборатории зависит от степени опасности работы с тем или иным возбудителем. По степени патогенности и опасности работы все возбудители разделены на группы:- возбудители чумы;- возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний: бруцеллеза, туляремии, сибирской язвы, сапа, натуральной оспы, различных риккетсиозов и др.;- возбудители эпидемических бактериальных инфекций: кишечных, туберкулеза, дифтерии, патогенные анаэробы, спирохеты (возвратный тиф), простейшие (малярия) и др.;- все патогенные кокки, гемоглобинофильные бактерии, сальмонеллы.

Работа с культурами I и II групп инфекций проводится в специальных лабораториях только с разрешения Министерства здравоохранения, III группы - в лабораториях СЭС, IV группы - во всех бактериологических лабораториях.

Техника безопасности при работе в лабораториях

ü  Каждый сотрудник лаборатории должен иметь закрепленное за ним рабочее место. Перед началом работы следует надеть специальную одежду, которая хранится в индивидуальных шкафчиках, раздельно с верхней одеждой. Тип защитного костюма и частота его смены определяются в зависимости от характера выполняемой работы.

ü  Нагревание легковоспламеняющихся жидкостей до 100° необходимо производить на водяных банях. Запрещается опускать колбу с легковоспламеняющейся жидкостью в горячую воду без предварительного постепенного подогрева. Нагревание легковоспламеняющихся жидкостей выше 100° производить на масляных банях, причем температура бань не должна превышать температуры самовоспламенения нагреваемой жидкости.

ü  При работе со спиртовкой или с легковоспламеняющимися жидкостями необходимо иметь под рукой одеяло, плотную ткань и т.д. для быстрого тушения огня в случае аварии.

ü  При работе со стеклянными приборами необходимо соблюдать следующие приемы:

ü  - защищать руки полотенцем при сборе стеклянных приборов или соединений отдельных частей их с помощью каучука; при разламывании стеклянных трубок придерживать левой трубку около надпила;

ü  - при закрывании колбы, пробирки или другого тонкостенного сосуда пробкой держать сосуд за верхнюю часть горлышка ближе к месту, куда должна быть вставлена пробка, защищая руку полотенцем;

ü  Чтобы избежать травмирования при резании стеклянных трубок, сборке и разборке приборов, изготовленных из стекла, необходимо соблюдать следующие меры безопасности:

а) стеклянные трубки небольшого диаметра ломать после надрезки их напильником, предварительно защитив руки полотенцем;

б) при вставлении стеклянных трубок в резиновые пробки или резиновые трубки (при сборке приборов) предварительно смочить снаружи стеклянную трубку и внутренние края резиновой трубки или отверстие в пробке водой, глицерином или вазелиновым маслом. Острые края стеклянных трубок должны быть оплавлены. Во всех случаях руки необходимо защищать полотенцем во избежание ранения от поломки стекла;

в) собирать стеклянные приборы и стеклянные детали в местах, оборудованных подкладками (пеноуретан, резина и др.);

г) при вставлении стеклянных трубок или термометра в просверленную пробку, последнюю не упирать в ладонь, а держать за боковые стороны. Трубку или термометр держать как можно ближе к вставляемому в пробку концу.

ü  При переливании жидкостей (кроме жидкостей, содержащих возбудителей инфекционных заболеваний) необходимо пользоваться воронкой.

ü  Нагревая жидкость в пробирке, необходимо держать последнюю так, чтобы отверстие было направлено в сторону от себя и соседей по работе.

ü  При переносе сосудов с горячей жидкостью следует пользоваться полотенцем, сосуд при этом необходимо держать обеими руками: одной за дно, а другой за горловину.

ü  Большие химические стаканы с жидкостью нужно поднимать только двумя руками так, чтобы отогнутые края стакана опирались на указательные пальцы.

ü  Работы, при проведении которых возможно бурное течение процесса, перегрева стеклянного прибора или его поломка с разбрызгиванием горячих и едких продуктов, должны выполняться в вытяжных шкафах на противнях. Работу проводят в очках, перчатках и резиновом фартуке.

ü  Во избежание "выброса" перегоняемой жидкости в колбу помещают стеклянные капилляры или кусочки прокипяченой и высушенной пемзы.

ü  Перед перегонкой горючих веществ пускают холодную воду в холодильник. Когда ток воды установится, включают нагревание, колбу приемника ставят на противень. Нельзя оставлять прибор без наблюдения.

ü  При закупоривании сосудов с реактивами пробками следует учитывать свойства реактивов. Резиновые пробки сильно набухают под действием некоторых реактивов - спирта, бензола, ацетона, эфира. Под действием галогенов (брома, йода) резиновые пробки становятся хрупкими, теряют эластичность. Такие реактивы лучше закупоривать стеклянными притертыми пробками. Щелочь нельзя закупоривать притертыми пробками. Внутренняя поверхность горла сосуда смачивается щелочью, а затем под влиянием углекислого газа между пробкой и горлом образуются карбонаты, которые плотно заклинивают пробку.

ü  Для предотвращения переутомления и порчи зрения при микроскопировании и пользовании другими оптическими приборами необходимо обеспечить правильное освещение поля зрения, предусмотренное для данного микроскопа или прибора, не закрывать неработающий глаз, работать попеременно то одним, то другим глазом и делать перерывы на пять минут через полчаса работы.

ü  Насасывание в пипетки растворов химических реактивов и жидкостей, содержащих возбудителей инфекционных заболеваний, производят с помощью резиновой груши или автоматической пипетки, насасывание ртом не допускается.

ü  Использованную химическую посуду и приборы, содержавшие кислоты, щелочи и другие едкие и вредные вещества, освобождают от остатков этих веществ, обезвреживают, передают в мойку.

ü  С целью контроля за загрязнением воздуха в санитарно-гигиенических отделениях лабораторий следует периодически (не реже 1 раза в квартал и при подозрении) брать анализы на вредные вещества, а в боксах бактериологических лабораторий, не менее 2 раз в неделю - на патогенные микроорганизмы.

ü  Сотрудники лабораторий и отделений должны проходить ежегодно диспансеризацию в соответствии с действующими приказами МЗ СССР. Результаты по диспансеризации должны находиться у администрации учреждения. Беременным женщинам запрещаются работы с ядовитыми веществами и живыми вирусами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Микробиологические лаборатории занимаются бактериологической диагностикой инфекционных заболеваний, исследуя испражнения, мочу, кровь, мокроту больных с целью обнаружения патогенных микроорганизмов - возбудителей заболевания.

В результате проделанной мной работы, я выяснила, что при работе с бактериями - возбудителями особо опасных инфекций (туляремии, бруцеллезе, сапе, сибирской язвы и др. заболеваний) следует руководствоваться Инструкцией о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп, утвержденной Минздравом СССР 29 июня 1978 г., а также дополнительными правилами, изложенными в разделе правил, и инструкциями по отдельным инфекциям, издаваемыми Министерством здравоохранения СССР.

Также доставку инфицированного материала в лабораторию следует производить с соблюдением мер предосторожности: в закрытой посуде, в специальных металлических биксах, пеналах, чемоданах. На каждый стеклянный сосуд с инфекционным материалом необходимо наклеить этикетку, где указывают дату взятия материала. В связи с тем что в микробиологических лабораториях работают с заразным материалом, помещение их должно быть изолировано от других больничных помещений, пищеблоков, жилых комнат.

Нельзя обрабатывать посуду дезинфицирующим раствором, так как даже следы его задерживают рост микробов. Стеклянную посуду моют ершами с применением бикарбоната натрия, полужидкого мыла или стирального порошка.

Для предотвращения переутомления и порчи зрения при микроскопировании и пользовании другими оптическими приборами необходимо обеспечить правильное освещение поля зрения, предусмотренное для данного микроскопа или прибора, не закрывать неработающий глаз, работать попеременно то одним, то другим глазом и делать перерывы на пять минут через полчаса работы.

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

Алешукина, А. В. Медицинская микробиология: учебное пособие для вузов / А. В. Алешукина. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2011. - 437 с.

Богданова, О.Ю. Систематика и классификация микроорганизмов: метод. указания к практическим работам по дисциплине «Микробиология» / О.Ю. Богданова. - Мурманск: Изд-во МГТУ, 2012. - 80 с.

Емцев, В.Т. Микробиология: учебник для вузов / В.Т. Емцев, Е.Н. Мишустин. - 6-е изд., испр. - М.: Дрофа, 2013. - 444 с.

Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук // Под ред. А.И. Нетрусова. - М.: ИЦ «Академия», 2010. - 608 с.