Практические работы по физиологии
Определение примесей в таблетках диазепама и
феназепама методом двухступенчатой капиллярной газовой хроматографии с
масс-спектрометрическим детектированием
Определение примесей в фармацевтических
препаратах является важной и актуальной задачей, так как состав примесей
определяет качество продукта и позволяет судить о производителе продукции и ее
фальсификации, которая принимает все большие масштабы во всех странах мира.
Необходимо также отметить, что в ряде случаев примеси, присутствующие в
препарате в следовых концентрациях, по своей токсичности намного превосходят
токсичность основного компонента.
Одно из ведущих мест в анализе фармацевтических
препаратов на содержание органических примесей (как правило, заданных) занимает
высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). При обнаружении и
определении неизвестных примесей возможности этого метода весьма ограничены.
УФ-детектор с диодной матрицей, как наиболее селективный, часто используется
при определении заданных примесей в фармацевтических препаратах, однако для
идентификации неизвестных примесей в фармацевтических препаратах данный
детектор использован не был. Принципиально диодно-матричный детектор может быть
использован для этой цели путем сравнения спектра со спектром библиотеки,
однако УФ-спектры не так характеристичны, как масс-спектры, и после
идентификации соединения по УФ-спектру ее необходимо подкрепить применением
таких методов как ГХ/МС или ВЭЖХ/МС. Сочетание ВЭЖХ с масс- спектрометрией (МС)
используют в большинстве случаев для подтверждения известных (заданных)
примесей, присутствующих в фармацевтической продукции. Возможности такого
сочетания для идентификации неизвестных примесей весьма ограничены; это
обусловлено возможностью потери информации о ряде компонентов смеси из-за
различных ион-молекулярных реакций примесей в элюенте, а также регистрацией
только молекулярных масс компонентов смесей (когда это возможно). В ряде
случаев для идентификации примесей используют выделение соответствующих
фракций, их концентрирование с заменой растворителя и последующую регистрацию
спектров ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (если это возможно - в связи с
низкой чувствительностью метода ЯМР). Помимо ВЭЖХ, для контроля содержания
заданных примесей в фармацевтической продукции используют высокоэффективную тонкослойную
хроматографию и реже газовую (ГХ), сверхкритическую флюидную хроматографию и
капиллярный электрофорез. Каждый из этих методов имеет определенные
преимущества перед ВЭЖХ, однако их ограничениями являются селективность,
эффективность, емкость колонки и чувствительность детектора.
Для большинства термостабильных летучих и
среднелетучих соединений идентификация примесей наиболее легко и эффективно
обеспечивается использованием сочетания капиллярной газовой хроматографии с
масс-спектрометрией (ГХ/МС). Одним из возможных методов, позволяющих
одновременно снизить предел обнаружения примесей и улучшить чувствительность,
эффективность и селективность анализа, является метод двухступенчатой off-line
капиллярной газовой хроматографии (КГХ) в сочетании с масс-спектрометрией.
Известно, что бензодиазепины, в том числе
диазепам и феназепам, удовлетворяют требованиям метода ГХ/МС по своей летучести
и термостабильности. В частности, их метаболизм и фармакокинетика были успешно
изучены методами ГХ и ГХ/МС.
В связи с этим целью настоящей работы являлось
изучение возможности определения примесей в таблетированной форме
рассматриваемых фармацевтических препаратов с использованием двухступенчатой
КГХ в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием в режиме off-line.
Экспериментальная часть
В качестве объектов исследования были выбраны
два фармацевтических препарата в таблетированной форме, активными веществами
которых являлись диазепам
(7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он) и феназепам (7-бром-5-(орто-
хлорфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он).
Для приготовления рабочего раствора диазепама
одну таблетку (с содержанием активного компонента 5 мг) растирали в порошок в
ступке. Порошок растворяли в 6 мл ацетонитрила, при растворении использовали
активацию ультразвуковым полем в течение 30 мин. Затем раствор центрифугировали
15 мин со скоростью 5000 об/мин. Жидкость над осадком сливали и для получения
более концентрированного раствора 2,0 мл полученного раствора упаривали в токе
азота при комнатной температуре до 200 мкл.
Для приготовления рабочего раствора феназепама
пять таблеток (с содержанием активного компонента 0,5 мг) растирали в порошок в
ступке. Далее феназепам извлекали 6 мл ацетонитрила по той же методике, которая
описана для извлечения диазепама. Для холостых опытов 2,0 мл растворителя -
ацетонитрила - упаривали до 200 мкл.
Первую ступень двухступенчатой КГХ в режиме off-line
с концентрированием примесей осуществляли с использованием газового
хроматографа "DANI
6500" с пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Разделение проводили на
капиллярной кварцевой колонке 0,5 м х 0,32 мм х 1 мкм с неподвижной фазой RTX-5
фирмы Restec (США).
Режим программирования температуры колонки: 50° С (3 мин) → 30°/мин →
250 °С (6 мин). Температура испарителя хроматографа составляла 250 °С,
температура ПИД - 250 °С. Колонку к детектору и инжектору присоединяли без
поддува и сброса потока. В качестве газа-носителя использовали водород со
скоростью потока 5 мл/мин. Для сбора и обработки хроматографических данных
использовали программное обеспечение "Chrom
- Card" для Windows
3.1 Server
Ver. 1.1.
Концентрирование примесей осуществляли на
сорбционном картридже, подключенном к выходу капиллярной колонки (см. рисунок).
Картридж представлял собой металлическую трубку
длиной 4 см и внутренним диаметром 3 мм, наполненную тенаксом (длина слоя 1,6
см) и хромосорбом W с 15 % SE-30
(длина слоя 1,6 см). Зоны сорбентов внутри трубки отделялись друг от друга
кварцевой ватой. Улавливание веществ проводили при потоке газа-носителя,
направленном от слоя хромосорба W
с 15 % SE-30 к слою
тенакса.
Для концентрирования примесей на первой ступени
двухступенчатой КГХ в режиме off-line
использовали систему, представленную на рисунке.
Схема установки для двухступенчатой off-line
КГХ: ( 1, 10 - вентиль «открыт/закрыт»; 2 - кран тонкой регулировки; 3 -
манометр; 4 -инжектор хроматографа; 5 - ГХ колонка; 6 - термостат ГХ; 7 -
тройник; 8 - ПИД; 9 - сорбционный катридж).
На конце разделительной колонки был установлен
тройник (7), позволяющий направлять поток газа-носителя на сорбционный картридж
(9) и частично ПИД (при открытом вентиле 10) или полностью через ПИД (8) (при
закрытом вентиле 10). Примеси на сорбционном картридже концентрировали по следующей
схеме. Отбирали 5 мкл рабочего раствора и вводили его непосредственно в
инжектор ГХ, при этом вентиль 10 был открыт. Для сброса основной части
активного компонента (диазепама или феназепама) вентиль 10 закрывали после
начала выхода пика основного компонента, а после окончания его выхода открывали
(с 7,5 по 12,4 мин при анализе раствора диазепама и с 8,4 по 12,4 мин при
анализе раствора феназепама). Эту операцию повторяли два раза. Начало и конец
выхода пика основного компонента определяли в предварительном опыте.
Для определения сконцентрированных примесей на
второй ступени использовали систему ГХ/МС (газовый хроматограф фирмы "Varian"
(США) модели 3400 с масс-спектрометрическим детектором "Incos
50" фирмы "Finnigan
МАТ" (США) в режиме ионизации электронным ударом). Для перевода
адсорбированных соединений в капиллярную колонку ГХ картридж с помощью иглы
соединяли с испарителем хроматографа и осуществляли термодесорбцию, нагревая
картридж потоком горячего воздуха (250 °С), при этом поток газа-носителя пропускали
через картридж в направлении, обратном направлению потока при улавливании.
Термодесорбированные примеси разделяли на
капиллярной кварцевой колонке 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм с неподвижной фазой CPSil
24 СВ. Режим программирования температуры колонки: 50 °С (10 мин) →
10°/мин → 290 °С (20 мин). Температура испарителя хроматографа составляла
270 °С. Пробу вводили в режиме без деления потока. В качестве газа-носителя
использовали гелий со скоростью потока 1,5 мл/мин. Температура переходной линии
составляла 260 °С, температура источника ионов - 180 °С, энергия электронов -
70 эВ, диапазон сканируемых масс от 50 до 500 а.е.м., скорость сканирования - 2
скан/с.
До определения примесей в исследуемых образцах
методом двухступенчатой off-line
КГХ/МС сначала регистрировали примеси без концентрирования, вводя пробу (1 мкл)
рабочего раствора непосредственно в инжектор хроматомасс-спектрометра. Примеси
определяли в условиях, описанных для второй ступени. Предварительно провели
холостой опыт, проанализировав 1 мкл ацетонитрила, упаренного в 10 раз, в тех
же условиях. При обработке хроматомасс-спектрометрических данных учитывали
результаты холостого опыта. Холостым опытом при определении примесей методом
двухступенчатой off-line
КГХ/МС являлся предварительно проведенный анализ ацетонитрила, упаренного в 10
раз, в условиях двухступенчатой offline
КГХ/МС.
Для обработки хроматомасс-спектрометрических
данных использовали программное обеспечение GCQ
версии 2.2. Неизвестные примеси идентифицировали сравнением масс-спектра неизвестного
соединения с базой данных NIST
(National
Institute
of Standards
and Technology,
USA). Отнесение
спектра к определенной структуре считали достоверным, если значения
коэффициентов сходимости при прямом и обратном библиотечном поиске были больше
700.
Содержание примесей оценивали с использованием
метода внешнего стандарта - раствора нафталина-d8
с концентрацией 1 • 10 -8 г/мкл. Проводили 6 параллельных опытов, относительное
стандартное отклонение при определении примесей составило не более 0,25.
Результаты и их обсуждение
Данные по определению примесей в диазепаме и
феназепаме методом хроматомасс-спектрометрии представлены, соответственно, в
табл. 1 и 2.
Таблица - Примеси, определенные в препарате
диазепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр,
и оценка их содержания в таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
tR
|
Масс-спектр
m/z
(lотн)*
|
Название
|
Формула
|
Молекулярная
масса, г/моль (Mr)
|
Оценка
содержания, %
|
14,11
|
154(100),
153(39), 152(28), 151(10), 76(30), 63(12)
|
бифенил
|
С12Н10
|
154
|
0,003
|
21,25
|
206(58),
205(100), 151(11), 121(20), 76(30), 57(9)
|
1-фенил-фталазин
|
С14H10N2
|
206
|
0,004
|
22,47
|
241(40), 239(93), 205(100),
110(28), 75(53)
|
неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,06
|
* - здесь и далее масс-спектры приведены в
следующей форме: молекулярный ион (если он наблюдается), пять наиболее
интенсивных ионов в спектре в порядке убывания значений массовых чисел ионов
(для изотопных галогенсодержащих ионов приведены пики только 35Cl
и 79Br-содержащих
ионов)
Таблица - Примеси, определенные в препарате
феназепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр,
и оценка их содержания в таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
tR
|
Масс-спектр
m/z
(lотн)
|
Название
|
Формула
|
Молекулярная
масса, г/моль (Mr)
|
Оценка
содержания, %
|
20,13
|
208(31),
192(24), 104(22), 92(100), 91(62)
|
неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,002
|
21,25
|
206(40),
205(100), 121(12), 89(23), 75(51), 57(21)
|
1-фенил-фталазин
|
С14H10N2
|
206
|
0,006
|
22,47
|
неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,01
|
24,25
|
141(100),
119(32), 115(20), 83(48), 77(22)
|
неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,002
|
27,24
|
270(66),
256(100), 221(36), 165(29), 110(13), 77(45)
|
7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он
(диазепам)
|
C16H13ClN2O
|
284
|
0,3
|
27,47
|
270(66), 241(96),
235(100), 208(70), 103(39), 75(74)
|
5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-1,4
-бензодиазепин-2-он
|
C15H11ClN2O
|
270
|
0,006
|
30,15
|
348(38), 321(65),
282(30), 102(63), 89(76), 75(100)
|
неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,01
|
Как видно из приведенных данных, в препарате
диазепама было зарегистрировано только три примеси на уровне 10-3 - 10-2 %, из
них идентифицированы две примеси, а в препарате феназепама - 7 примесей на
уровне 10 -3 - 10 -5 %, из них идентифицированных - 3.
Результаты обработки данных по определению сконцентрированных
примесей в таблетках диазепама и феназепама методом двухступенчатой off-line
КГХ представлены соответственно в табл. 3 и 4.
Таблица - Примеси, определенные в препарате
диазепама двухступенчатой КГХ/МС в варианте off-line,
и оценка их содержания в одной таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
tR
|
Масс-спектр
m/z
(lотн)
|
Название
|
Формула
|
Молекулярная
масса, г/моль (Mr)
|
Оценка
содержания, %
|
8,15
|
134(22),
119(14), 106(16), 105(100), 91(12), 77(19)
|
1
-метил-3-пропилбензол
|
С10Н14
|
134
|
0,001
|
10,36
|
132(39),
117(17), 104(100), 91(35), 77(23), 65(11)
|
1,2,3,4-тетрагидронафталин
|
С10Н12
|
132
|
0,0002
|
10,47
|
136(35),
64(58), 61(32), 60(100), 59(33), 55(29)
|
[1,4,5]-оксадитиепан
|
C4H8OS2
|
136
|
0,006
|
11,37
|
132(100),
163(8), 155(5), 88(45), 73(8)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,004
|
14,10
|
154(100),
153(41), 152(25), 151(18), 76(25), 63(13)
|
Бифенил
|
С12Н10
|
154
|
0,004
|
14,55
|
191(75),
168(100), 167(75), 152(19), 73(41)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
0,0001
|
15,37
|
168(100),
167(53), 152(20), 148(15), 56(13)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,00007
|
15,42
|
194(21),
163(100), 135(29), 120(9), 103(17), 76(28)
|
Диметиловый
эфир 1,3-бензолдикарбоновой кислоты
|
С10Н10О4
|
194
|
0,009
|
15,59
|
154(22),
153(100), 126(16), 98(28), 57(60)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0001
|
16,07
|
156(84),
155(48), 128(100), 127(98), 126(34), 63(18)
|
1-нафталин-карбоксальдегид
|
C11H8O4
|
156
|
0,001
|
16,20
|
170(100),
155(97), 119(70), 71(27), 57(43)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,00009
|
16,25
|
196(23),
181(20), 153(100), 74(9), 73(43)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,001
|
17,07
|
185(32),
183(100), 154(33), 92(98), 73(28)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0003
|
17,10
|
170(22),
166(73), 165(100), 163(31), 155(25)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0004
|
17,22
|
181(97),
138(96), 110(95), 75(100), 74(73)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0003
|
17,26
|
169(100),
168(28), 167(30), 115(10), 73(27), 51(30)
|
2-n-толилпиридин
|
C12H11N
|
169
|
0,002
|
21,23
|
206(52),
205(100), 151(14), 121(18), 76(29), 57(15)
|
1
-фенил-фталазин
|
c14h10n2
|
206
|
0,005
|
22,26
|
303(100),
110(17), 97(15), 57(58), 54(17)
|
-
|
-
|
0,003
|
22,47
|
241(40),
239(93), 205(100), 75(53), 69(17)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,09
|
23,03
|
255(39),
254(60), 253(100), 219(95), 110(37)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0008
|
23,12
|
245(78),
228(36), 193(33), 168(17), 105(36), 77(100)
|
5-хлор-2-(метиламин)бензофенон
|
С14Н12ClNO
|
245
|
0,03
|
23,25
|
284(21),
243(26), 94(100), 69(20), 55(39)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0004
|
23,50
|
286(32),
285(47), 284(31), 283(40), 205(100)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,007
|
24,21
|
259(27),
257(80), 230(26), 228(50), 222(100)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0007
|
25,36
|
250(64),
249(85), 222(100), 221(42), 91(27), 77(37)
|
1,3-дигидро-
1-метил-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он
|
c16h14n2o
|
250
|
0,03
|
26,24
|
316(8),
284(57), 241(100), 228(75), 222(82), 209(39)
|
7-хлор-2,3-дигидро-2-гидрокси-1-метил-2-метокси-5-фенил-1Н-1,4-
бензодиазепин
|
c17h17Cln2o2
|
316
|
0,002
|
28,35
|
270(71),
242(100), 214(18), 178(14), 151(21), 103(40)
|
7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он
|
c15h11cin2o
|
270
|
0,004
|
30,38
|
284(100),
268(13), 248(11), 206(18), 151(8), 124(14)
|
7-хлор-2-метокси-5-фенил-ЗН-1,4-бензодиазепин
|
c16h13cln2o
|
284
|
0,0008
|
Таблица - Примеси, определенные в препарате
феназепама двухступенчатой КГХ/МС в варианте off-line,
и оценка их содержания в одной таблетке (n
= 6; Р = 0,95; Sr
≤0,25)
tR
|
Масс-спектр
m/z
(lотн)
|
Название
|
Формула
|
Мол.
масса, г/моль (Mr)
|
Оценка
содержания, %
|
137(100),
110(4), 102(46), 83(17), 75(34), 58(56)
|
2-хлорбензонитрил
l
|
c7h4cln
|
137
|
0,0003
|
16,09
|
156(80),
128(100), 127(25), 126(65), 102(13)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,00007
|
16,26
|
196(31),
181(32), 154(46), 153(100), 57(85)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,00006
|
17,31
|
184(7),
169(100), 168(54), 167(27), 115(11), 51(19)
|
1,1
-дифенил-гидразин
|
c12h12n2
|
184
|
0,00009
|
20,13
|
246(13),
243(9), 92(100), 91(70), 78(8), 60(11)
|
Додецил-бензол
|
C18H30
|
246
|
0,001
|
20,28
|
110(10),
82(61), 68(43), 57(100), 55(81)
|
Тетрадеканаль
|
c14h38o
|
212
|
0,007
|
21,25
|
206(44),
205(100), 177(10), 151(15), 76(28), 60(37)
|
1
-фенил-фталазин
|
c14h10n2
|
206
|
0,008
|
21,40
|
129(18),
97(21), 85(19), 57(100), 55(80)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,005
|
21,57
|
270(23),
73(99), 71(45), 60(100), 57(99), 55(87)
|
Гептадекановая
кислота
|
C17H34O2
|
270
|
0,007
|
22,48
|
241(45),
239(87), 205(100), 110(22), 75(40)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,009
|
23,46
|
275(53),
195(28), 105(48), 91(25), 77(100), 51(44)
|
5-бром-2-аминобензофенон
|
C13H10BrNO
|
275
|
0,0002
|
23,54
|
285(47),
205(100), 177(13), 103(16), 75(29)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
24,27
|
276(16),
150(16), 141(100), 115(12), 55(15)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,002
|
25,08
|
311(100),
276(93), 195(64), 139(75), 75(60)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,002
|
26,05
|
133(10),
100(17), 87(100), 77(34), 72(15)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,0006
|
26,17
|
236(77),
235(91), 208(100), 207(89), 180(31), 77(57),
|
1,3-дигидро-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он
|
c15h12n2o
|
236
|
0,004
|
27,27
|
284(60),
256(100), 221(30), 165(22), 110(20), 103(17)
|
7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-
фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он (диазепам)
|
c16h13c l n2o
|
284
|
0,4
|
27,50
|
270(73),
241(88), 235(100), 207(32), 178(21), 103(45)
|
5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-
1,4-бензодиазепин-2-он
|
c15h11c l n2o
|
270
|
0,008
|
28,12
|
308(100),
306(72), 227(8), 192(32), 164(17), 63(33)
|
2-[n-бромфенил]-5-хлорбензими-
дазол
|
C13H8BrClN2
|
306
|
0,00007
|
28,46
|
335(100),
333(75), 254(28), 219(27), 75(60)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,00006
|
29,06
|
323(100),
321(78), 294(48), 258(50), 242(48)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,006
|
29,16
|
307(100),
305(73), 211(42), 209(50), 163(23)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
-
|
0,004
|
30,18
|
304(90),
275(100), 269(80), 241(33), 138(25), 120(30)
|
7-хлор-5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он
|
C15h10Cl2N2O
|
304
|
0,0004
|
30,24
|
348(40),
321(50), 313(28), 102(60), 89(80), 75(100)
|
Неизвестная
примесь
|
-
|
0,03
|
30,30
|
314(67),
286(100), 207(30), 179(26), 151(22), 103(74)
|
7-бром-2,3-дигидро-5-фенил-1Н-
1,4-бензодиазепин-2-он
|
C15H11BrN2O
|
314
|
0,003
|
35,04
|
392(18),
365(47), 313(69), 103(80), 89(79), 75(100)
|
7-бром-5-(3-бромфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он
|
C15H10Br2N2O
|
392
|
0,00007
|
феназепам
диазепам хроматография
В диазепаме определено 28 примесей на уровне
10-4 - 10-2 %, оценка суммарного содержания которых составила около 0,2 %. В
феназепаме определено 26 примесей на уровне 10-4 - 10-1 %, и оценка их
суммарного содержания составила около 0,5 %. Таким образом, с использованием
предложенного метода двухступенчатой КГХ в режиме off-line
можно определять значительно большее число примесей и на более низком уровне по
сравнению с прямым ГХ/МС определением.
В Фармакопее США регламентированы следующие
примеси в диазепаме: 5-хлор-2-(метиламин)бензофенон (не более 0,01 %), 3-амино-6-хлор-1-метил-4-фе-
нилкарбостирил (не более 0,1 %) и
7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он (не более 0,3 %). Как
видно из данных, представленных в табл. 1 и 3, ни одна из регламентированных
примесей не была определена при прямом вводе в ГХ/МС и две из
регламентированных примесей были определены двухступенчатой off-line
КГХ/МС на уровне 0,03 % и 0,004 %.
Можно предположить, что часть определенных
примесей, не относящихся к классу бензодиазепинов, возможно, связана с наличием
наполнителей в таблетках или является продуктами деструкции в процессе
концентрирования и термодесорбции с картриджа. Известно, что, в качестве
вспомогательных веществ в таблетках диазепама и феназепама могут быть
использованы такие вещества, как глюкоза, сахар, крахмал, лактоза, стеариновая
кислота, метилцеллюлоза, карбоксицеллюлоза, аэросил, тальк, полиэтилоксид и
другие вещества. По-видимому, идентифицированные примеси, приведенные в табл. 1
- 4, не характерны как для самих перечисленных наполнителей (большая часть которых
удаляется в процессе пробоподготовки), так и продуктов их возможной деструкции.
Часть неидентифицированных примесей может относиться к наполнителям таблеток.
Доказательством отсутствия деструкции примесей и основных веществ в процессе
концентрирования и термодесорбции с картриджа является наличие четких
хроматографических пиков, соответствующих этим веществам, на хроматограммах,
зарегистрированных как для растворов этих веществ при прямом вводе в ГХ/МС, так
и для десорбированного содержимого картриджа. Кроме того, об отсутствии
термодеструкции примесей при термодесорбции свидетельствует примерно одинаковое
содержание одних и тех же примесей в препарате, зарегистрированных до и после
концентрирования. Отдельно следует отметить следующий факт: среди примесей,
определенных методом двухступенчатой КГХ/МС, есть ряд веществ, содержание
которых оценено на относительно высоком уровне (10-3-10-2 %), но в то же время,
эти примеси не определены при прямом вводе в хроматомасс-спектрометр. Это может
быть, во-первых, обусловлено различной чувствительностью
масс-спектрометрического детектора (МСД) к разным веществам, а также разной
формой хроматографических пиков при содержании примеси на уровне 10-4-10-3% (до
концентрирования) и на уровне 10-3-10-2% (после концентрирования). В первом
случае пик может быть более размытым и иметь меньшую высоту и, следовательно,
не быть различимым МСД, а после концентрирования он становится более четким и
легко различимым.
Таким образом, с использованием метода,
основанного на двухступенчатой КГХ в режиме off-line
в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием, определены примеси в
таблетированной форме фармацевтических препаратов, активными веществами которых
являлись диазепам и феназепам. В препарате диазепама зарегистрировано 28
примесей на уровне 10-4-10-2% (из них идентифицировано 13), в то время как при
прямом вводе пробы в инжектор хроматомасс-спектрометра обнаружено только 3
примеси на уровне 10-3- 10-2%. В препарате феназепама зарегистрировано 26
примесей на уровне 10-4 - 10 -1 % (из них идентифицировано 14), а при прямом
вводе пробы обнаружено 7 примесей на уровне 10-3-10-1%. Оценка суммарного
содержания всех зарегистрированных примесей в случае диазепама составила около
0,2 %, в случае феназепама - около 0,5 %.