Гуморальный иммунитет у пациентов с терминальной хронической почечной недостаточностью, находящихся на перитонеальном диализе

Гуморальный иммунитет у пациентов с терминальной хронической почечной недостаточностью, находящихся на перитонеальном диализе

Содержание

Сокращения

Введение

. Литературный обзор

1.1 Терминальная хроническая почечная недостаточность

.2 Состояние иммунитета у пациентов с терминальной хронической почечной недостаточностью

.3 Строение и функции иммуноглобулинов

. Материалы и методы исследования

.1 Определение концентрации Ig A, Ig M, Ig G в сыворотке крови

3. Статистическая обработка

. Результаты и обсуждение

Выводы

Список используемой литературы

Сокращения

АПКАнтигенпрезентирующие клеткиГУЗ «ВОУНЦ»Государственное учреждение здравоохранения «Волгоградский областной уронефрологический центр»ЖКТЖелудочно-кишечный трактИСИммунная системаИФАИммуноферментный анализПАПДПостоянный амбулаторный перитонеальный диализОПОптическая плотностьМКАТМоноклональные антителаСКСекреторный компонентСКФСкорость клубочковой фильтрацииСПИДСиндром приобретенного иммунного дефицитаССССердечно-сосудистая системаТХПНТерминальная хроническая почечная недостаточностьХПНХроническая почечная недостаточностьЦНСЦентральная нервная системаAgАнтигенIgИммуноглобулин

Введение

Одним из тяжелых и трудно поддающихся лечению осложнений, к которым приводят многие заболевания почек, является терминальная хроническая почечная недостаточность (ТХПН). Основными этиологическими факторами ТХПН являются аутоиммунные заболевания, гипертонические и диабетические нефропатии. В настоящее время число данных заболеваний во всем мире неуклонно растет.

Известно, что при ТХПН происходит нарушение гомеостаза в организме. Нарушение гомеостаза обусловлено необратимым снижением массы действующих нефронов (МДН) почек и накоплением уремических токсинов. При этом ТХПН проявляется многосимптомным комплексом, отражающим участие в этом процессе практически всех органов и систем больного.

Статистика показывает, что около 20% от общей смертности пациентов с ТХПН занимают инфекционные осложнения. Этот факт объясняется действием уремических токсинов на иммунную систему пациентов с ТХПН. Уремическое нарушение иммунной системы характеризуется иммунодепрессией врожденного и приобретенного иммунитета, что приводит к большому количеству инфекционных осложнений у пациентов данной группы. В настоящее время большое количество исследований посвящено изучению действия уремии на клеточный и гуморальный иммунитет. Так, во многих исследованиях сообщается о непротективном иммунном ответе больных с уремией на вакцинацию.

На сегодняшний день основным методом лечения ТХПН является заместительная почечная терапия, к которой относятся гемодиализ, перитонеальный диализ и трансплантация почки. Процедура диализа способствует выведению уремических веществ из крови больного, таким образом, снижая отрицательное воздействие токсинов на организм в целом и на иммунную систему в частности. Но с другой стороны факторы, связанные с диализом (диализирующий раствор, раздражение брюшины) постоянно стимулируют и активируют иммунокомпетентные клетки, приводя к состоянию хронического воспаления. Таким образом, изучение состояния иммунной системы у пациентов с ТХПН, получающих диализ, является актуальным.

Цель настоящей работы: Исследовать состояние гуморального иммунитета пациентов с ТХПН, находящихся на ПАПД, по уровню IgA, IgM, IgG в сыворотке крови.

Задачи:

Определить уровень IgA, IgM, IgG в сыворотке крови здоровых лиц.

Оценить уровень IgA, IgM, IgG в сыворотке крови пациентов с ТХПН, получающих ПАПД.

Выявить особенности гуморального иммунитета по уровню IgA, IgM, IgG у пациентов с ТХПН, получающих ПАПД.

1. Литературный обзор

.1 Терминальная хроническая почечная недостаточность

Хроническая почечная недостаточность - это постепенное снижение функции почек до ее полного исчезновения, вызванное постепенной гибелью почечной ткани в результате хронического заболевания почек [Ярилин А.А., 1999].

В основе развития хронической почечной недостаточности (ХПН) лежит постепенная гибель основной рабочей единицы почки - нефрона. Оставшиеся нефроны почек вынуждены работать с повышенной нагрузкой. Нефроны, работающие с повышенной нагрузкой в свою очередь так же более подвержены изменениям и гибели [Chan T.M., 2000]. Несмотря на то, что компенсаторные возможности почек высокие (даже оставшиеся 10% нефронов способны поддерживать водно-электролитный баланс в организме), уже на ранних стадиях хронической почечной недостаточности возникают нарушения электролитного состава крови, ацидозу, нарушается обмен белка в организме, задерживаются продукты обмена: мочевина, креатинин, мочевая кислота [Бочков Н. П., 2002]. На сегодняшний день выявлено более 200 веществ, обмен которых в организме нарушается при почечной недостаточности [Ivashkin V.T., 2007]. Диагноз хронической почечной недостаточности ставится, если продолжительность болезни более 5 лет, в крови и моче присутствуют характерные изменения [Гребенев А.Л., 1995].

Причинами возникновения хронической почечной недостаточности могут стать различные заболевания, которые приводят к поражению почечных клубочков. Это:

- заболевания почек - хронический гломерулонефрит, хронический пиелонефрит; <#"justify">2. Материалы и методы исследования

Исследования проводились на базе ГУЗ «ВОУНЦ». В исследовании принимали участие 25 пациентов с ТХНП, находящихся на лечении перитонеальным диализом (1 группа). Средний возраст исследуемой группы составил 41±6 лет. Распределение по полу: 54% мужчин и 46% женщин. Среднее время нахождения на ПАПД 4±2,5года. Основной причиной приведшей к развитию ТХНП являлся хронический гломерулонефрит, мочекаменная болезнь, хронический пиелонефрит. В группу сравнения вошло 20 человек из числа здоровых сотрудников центра (2 группа). Средний возраст в контрольной группе составил 37±6 лет. Распределение по полу в контрольной группе было: 45% мужчин и 55% женщин.

.1 Определение концентрации общего Ig A, Ig M, Ig G в сыворотке крови

иммунитет почечная недостаточность кровь

Определение концентрации общего Ig A, Ig M, Ig G в сыворотке крови проводили с использованием тест-системы фирмы «Хема».

В качестве исследуемого биологического материала использовали сыворотку крови, которая хранилась при температуре -200 С. Образцы не подвергались заморозке более одного раза. После размораживания (без теплового воздействия) их тщательно перемешивали. Хилезные и гемолизированные сыворотки были исключены из исследования.

Наборы «Общий Ig А», «Общий Ig М», «Общий Ig G» предназначены для иммуноферментного определения концентрации общего иммуноглобулина класса А, М и G соответственно в сыворотке крови и других биологических жидкостях человека в клинических, диагностических и научно - исследовательских лабораториях. Используемый твердофазный метод иммуноанализа. Анализ проводиться в две стадии. На первой стадии калибровочные образцы с известной концентрацией Ig А и анализируемые образцы инкубируются в лунках стрипированного планшета с иммобилизованными моноклональными антителами (МКАТ) к Ig А, Ig M, Ig G. Затем планшет отмывается. На второй стадии, связавшийся в лунках Ig А, Ig M, Ig G обрабатываются конъюгатом МКАТ к легким (лямбда и каппа) цепям иммуноглобулинов человека с пероксидазой. После отмывания избытка конъюгата образовавшиеся иммунные комплексы «иммобилизованные МКАТ - Ig А, Ig M, Ig G - конъюгат» выявляют ферментативной реакцией пероксидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена. Интенсивность окраски хромогена пропорциональна концентрации Ig А, Ig M, Ig G в анализируемом образце. После остановки пероксидазой реакции стоп - реагентом результаты учитываются фотометрически. Концентрацию Ig А, Ig M, Ig G в образцах определяют по калибровочной прямой.

Оборудование и материалы необходимые для проведения анализа

мерные цилиндры, колбы или стаканы для приготовления промывочного буферного раствора;

пипетки дозирующие, автоматические одно- и многоканальные со сменными наконечниками на 0,01 - 1,0 мл;

пробирки или флаконы для приготовления и разведения проб;

термостат на (37+/-1)0 С;

спектрофотометр вертикального сканирования позволяющий проводить измерения оптической плотности (ОП) раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм; 620 - 650 нм;

дистиллированная вода (ГОСТ 6709 - 72);

фильтровальная бумага;

пластмассовые ванночки для работы с многоканальными пипетками или чашки Петри.

Проведение опыта

внесение по 100 мкл на лунку рабочего раствора для разведения сывороток;

внесение по 20 мкл в лунку калибровочных и контрольного образцов;

внесение в остальные лунки по 20 мкл разведенных образцов;

инкубация 30 минут при температуре (37±10 С);

промывание;

внесение по 100 мкл на лунку раствора конъюгата;

инкубация 30 минут при температуре (37±10 С);

промывание;

внесение по 100 мкл раствора тетраметилбензидина (ТМБ);

инкубация15 минут при 18 - 250 С;

внесение по 100 мкл на лунку стоп - реагента;

регистрация результатов реакции фотометрически в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс - фильтр - в диапазоне 620 - 650 нм.

По результатам анализа строили калибровочную кривую зависимости оптической плотности от концентрации Ig А, Ig M, Ig G в образцах. С помощью калибровочной кривой определяли концентрацию Ig А, Ig M, Ig G в исследуемом материале по известной оптической плотности образцов.

3. Статистическая обработка

Статистическая обработка результатов выполнялось с помощью программы MS Exel (Microsoft).

Для описания количественных признаков были рассчитаны средняя величина признака и ошибка средней величины. Статистическую значимость различий между выборками оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Достоверным считали различие между сравниваемыми группами с уровнем доверительной вероятности 95% (p<0,05).

4. Результаты и обсуждение

В результате проведенного исследования было установлено что концентрация Ig А в сыворотке крови у пациентов с ТХПН, находящихся на ПАПД, составила 2,25±0,24 г/л. В контрольной группе концентрация Ig А составила 1,81±0,29 г/л. При сравнении концентраций Ig А в сыворотке крови здоровых лиц и пациентов с ТХПН на ПАПД достоверных различий не выявлено. Хотя можно отметить некоторую тенденцию к повышению уровня Ig А у пациентов с ТХПН, находящихся на ПАПД.

Концентрация Ig М в сыворотке крови у пациентов с ТХПН, находящихся на ПАПД составила 3,06±0,24 г/л. В группе сравнения концентрация Ig М составила 2,26±0,28 г/л. При межгрупповом сравнивании концентраций Ig М оказалось, что уровень Ig М в 1 группе достоверно выше, чем во 2 группе.

Концентрация Ig G в сыворотке крови пациентов с ТХПН на ПАПД значительно выше, чем в группе здоровых лиц (28,23±0,73 г/л против 19,03±0,73 г/л р<0,05) (табл.1).

Таблица 1

Уровень сывороточных Ig А, Ig M, Ig G (г/л) у пациентов с ТХПН, находящихся на перитонеальном диализе и у здоровых лиц

Концентрация Ig (г/л)Пациенты с ТХПН, находящиеся на ПАПДЗдоровая группаIg А2,25±0,241,81±0,29Ig М3,06±0,24*2,26±0,28Ig G28,23±0,73*19,03±0,73* - значимые различия со здоровыми лицами, (p<0,05)